پاورپوینت تشخیص آزمایشگاهی عفونت های روده ای

بخشی از پاورپوینت

اسلاید 1 :

تشخیص آزمایشگاهی عفونت های روده ای

اسلاید 2 :

نمونه گیری مدفوع باید در مراحل اولیه بیماری های روده ای و قبل از شروع درمان آنتی بیوتیکی انجام شود.
نمونه مدفوع
سواب مدفوع
سواب رکتال
جمع آوری نمونه

اسلاید 3 :

نمونه مدفوع
نمونه مدفوع باید در ظرف پلاستیکی تمیز (نیاز به استریل بودن نیست).
ظرف باید فاقد مواد نگهدارنده، شوینده، یون های فلزی یا کاغذ توالت باشد.
نباید با ادارار مخلوط شود.

حداقل یک گرم مدفوع با قوام طبیعی (به اندازه یک فندق) یا 5 سی سی مدفوع اسهالی برای کشت نیاز است.
نمونه باید تازه باشد و در مدت 30 دقیقه به خصوص برای شیگلا و حداکثر 2 ساعت بعد از نمونه گیری باید کشت داده شود.
نمونه هایی که نمی توان به فاصله 2 ساعت کشت داد باید به محیط انتقالی منتقل کرد.
جمع آوری نمونه

اسلاید 4 :

سواب مدفوع
سواب را داخل مدفوع قرار داده و پس از حرکت چرخشی مقدار از آن را بردارید و در صورت مشاهده موکوس باید از آنها نیز نمونه برداشت.
سواب را تا انتهای محیط انتقالی برده و قسمت بالایی چوب را که با انگشتانتان لمس کرده اید را بشکنید و در پیچ لوله را کاملا ببندید. لوله را بلافاصله در یخچال قرار دهید.
نکته: برای جداسازی بهتر ترجیحا تا 24 ساعت پس از نمونه گیری کشت داده شود حداکثر این گونه از نمونه ها تا 3 روز قابل نگه داری می باشد.
جمع آوری نمونه

اسلاید 5 :

سواب رکتال
در صورت استفاده از سواب رکتال به جای نمونه مدفوع، از سواب پنبه ای سالم استفاده نمایید و دقت کنید که پنبه آن کنده نشده باشد.
ابتدا سواب را با فرو کردن در محیط انتقال استریل مرطوب کرده، سپس به اندازه 2 الی 3 سانتی متر داخل رکتوم فرو برید و به آرامی بچرخانید تا با مخاط انتهای رکتوم تماس یابد، سپس سواب را خارج کنید و با توجه به تغییر رنگ سواب مطمئن شوید سواب به مدفوع آغشته شده باشد.
حداقل دو سواب باید از بیمار گرفت و هر دو را در یک لوله حاوی محیط انتقال قرار داد.
جمع آوری نمونه

اسلاید 6 :

محیط کری بلر با پی اچ 8/4 محیط انتقال مناسب برای بسیاری از عوامل بیماری زای روده ای می باشد.
مطابق دستورالعمل سازنده تهیه کنید داخل لوله باید به اندازه ای ریخته شود که حداقل 4 سانتی متر عمق داشته باشد.
محیط انتقال Carry – Blair

اسلاید 7 :

ماکروسکوپی: نمونه های مدفوع باید از نظر ظاهر بررسی گردند و از نظر وجود لخته خون، موکوس و قوام مدفوع مشاهدات ثبت شود.

میکروسکوپی: با تهیه یک اسمیر نازک از مدفوع و رنگ آمیزی گرم می توان وجود گلبول های سفید، همچنین غالب بودن یک مورفولوژی باکتریایی، وجود سلول های مخمر یا عدم وجود باسیل های گرم منفی روده ای را تعیین نمود.
بررسی ماکروسکوپی و میکروسکوپی مدفوع

اسلاید 8 :

محیط های کشت پلیتی افتراقی و انتخابی
محیط های مایع غنی کننده
محیط کشت

اسلاید 9 :

محیط های کشت پلیتی افتراقی و انتخابی:
محیط کشت مکانکی که همه باسیل های گرم منفی روده ای بتوانند روی آن رشد کنند همراه با محیط افتراقی – انتخابی
XLD (Xylose – Lysine Decarboxylate)
از محیط HE (Hektoen Enteric Agar) به جای XLD می توان استفاده نمود.
محیط کشت

اسلاید 10 :

تذکر:
محیط SS آگار برای جداسازی سالمونلا به کار می رود، اما باعث مهار رشد برخی از شیگلاها می شود.
چون محیط XLD میزان مهار کنندگی کمتری روی رشد کلی فرم ها دارد، برای جداسازی شیگلا مناسب تر از محیط HE می باشد.
محیط کشت

اسلاید 11 :

محیط های مایع غنی کننده:
رایجترین این محیط ها GN (Gram Negative Broth) براث و
SF (Selenit F Broth) براث می باشند.
محیط کشت

اسلاید 12 :

تذکر
محیط SF براث برای جداسازی سالمونلا مناسب است ولی برای برخی از گونه ها شیگلا دارای اثر مهار کنندگی بوده، لذا بهتر است در موارد مشکوک به شیگلا از این محیط استفاده نشود.
هنگام ساخت محیط SF براث، حرارت دادن بیش از حد باعث ایجاد ذراتی در محیط می شود که در این صورت نمی توان از آن استفاده کرد. عمق محیط باید حداقل 5 سانتی متر باشد.
محیط کشت

اسلاید 13 :

سواب آغشته به مدفوع را روی پلیت به قطر حدود 2.5 سانتی متر می چرخانیم. با استفاده از لوپ استریل از منطقه تلقیح در تمامی پلیت Streak کرده به طوری که کلنی های جدا از هم بدست آید.
برای استریل کردن لوپ را با شعله استریل کرده و اجازه دهید تا کاملا سرد شود.
پلیت ها را به مدت 24 ساعت در انکوباتور 37 - 35 درجه سانتیگراد قرار می دهیم. در صورت عدم رشد یا رشد ضعیف، انکوباسیون را تا 48 ساعت ادامه می دهیم.
تلقیح به محیط کشت (تلقیح محیط های پلیتی)

اسلاید 14 :

تذکر:
برای هر بیمار استفاده از یک پلیت با قطر 10 – 8 سانتیمتری الزامی است و نباید از پلیت 6 سانتی متری استفاده نمود زیرا احتمال جداسازی کاهش می یابد.
برای تلقیح در محیط انتخابی باید مقدار بیشتری نمونه تلقیح شود.
در مواردی که نمونه مدفوع قوام دارد توصیه می شود کشت از سوسپانسیون مدفوع در سرم فیزیولوژی انجام گردد.
تلقیح به محیط کشت (تلقیح محیط های پلیتی)

اسلاید 15 :

نمونه را با سواب به داخل محیط برده مخلوط می کنیم و سواب را دور می اندازیم.
معمولا برای محیط GN براث 6 – 4 ساعت انکوباسیون و محیط SF براث 12 – 8 ساعت انکوباسیون در 37 – 35 درجه سانتیگراد توصیه می شود.
بعد از این زمان از سطح براث یک لوپ برداشته، روی پلیت MAC و XLD کشت می دهیم، به طوری که کلنی های جدا از هم به دست آید. به مدت 24 ساعت انکوبه می کنیم در صورت عدم رشد یا رشد ضعیف، انکوباسیون را تا 48 ساعت ادامه می دهیم.
تلقیح به محیط کشت (تلقیح محیط مایع غنی کننده)

اسلاید 16 :

اشریشیا (Escherichia)
شیگلا (Shigella)
سالمونلا (Salmonella)
ویبریوکلرا (Vibrio cholera)
باکتری

اسلاید 18 :

اشریشیا کولی بیشترین گونه های باکتریایی هستند که در آزمایشگاه جدا می شوند.
اشریشیا کولی برا اساس آنتی ژن سطحی O به بیشتر از 170 سروگروپ تقسیم می شود.
با ترکیبی از آنتی ژن O و آنتی ژن H اشریشیا کولی را به صورت سروتیپ تقسیم بندی می کنند مانند E.Coli O157:H7.
اشریشیا (Escherichia)

اسلاید 19 :

سویه های معینی از اشرشیا کولی با شش مکانیسم متفاوت می تواند باعث سندرم های بالینی مختلف شوند.
Entertoxigenic E.Coli (ETEC)
Enteropathogenic E.Coli (EPEC)
Enteroinvasive E.Coli (EIEC)
Enterohemorrhagic E.Coli (EHEC)
Enteroaggregative E.Coli (EAEC)
Diffusely adherent E.Coli (DAEC)
اشریشیا کولی و عفونت های روده ای

اسلاید 20 :

نکته
علیرغم اینکه شناسایی همه سویه های ذکر شده در دسترس می باشد اما در بیشتر موارد نیاری به شناسایی سویه های پاتوژن E.Coli نمی باشد. بیشتر بیماران با عفونت گوارشی ناشی از E.Coli بدون درمان و یا با آنتی بیوتیک های رایج درمان می شوند. بنابراین به جز شناسایی سروتایپ EHEC نیازی به شناسایی سایر سویه های E.Coli نمی باشد.
اشریشیا کولی و عفونت های روده ای