بخشی از پاورپوینت
--- پاورپوینت شامل تصاویر میباشد ----
اسلاید 1 :
مقدمه
¡انتقال ژن فرآیندی است که طی آن، قطعه مشخصی از DNA به درون سلولها وارد میشود.
¡به انتقال هدایت شده ژن از یک موجود زنده به موجود زنده دیگر و تلفیق و بیان پایدار آن ژن در ژنوم موجود پذیرنده، انتقال ژنتیکی ( تراژنی) گفته می شود.
¡ژن منتقل شده تراژن(Transgene) نامیده می شود.
¡سیستم اگروباکتریوم اولین سیستم تراریختی موفق در گیاهان می باشد (1983)
¡غلبه بر دستکاری ژن های گیاهی با شناخت خصوصیات و بهره برداری از پلازمیدهای Ti و Ri محقق گردید
¡این پلازمید ها امکان انتقال طبیعی ژن، بیان ژن و سیستم های گزینش را فراهم می کنند.
اسلاید 2 :
Agrobacterium
باکتری گرم منفی، میله ای شکل
متعلق به خانواده Rhizobiaceae
اغلب در نزدیکی سطح خاک (در ناحیه طوقه)
اسلاید 3 :
Agrobacterium
براساس خوصیات بیماریزایی و داشتن پلازمید Ti و Ri طبقه بندی قدیمی این جنس شامل
oA. tumefaciens عامل بیماری گال طوقه و دارای پلازمید Ti
oA. Rhizogenes عامل بیماری ریشه موئی و دارای پلازمید Ri
oA. Radiobacter گونه غیر بیماریزا و بدون پلازمید
اسلاید 4 :
سازماندهی پلازمید Ti
مولکول های حلقوی بزرگ (800-200 کیلو باز)
به صورت واحد های ژنتیکی خود تکثیر در سلول های باکتریایی
دارای مناطق بزرگی برای بیماری زایی، شروع همانند سازی، سرطان زایی و کاتابولیسم اپین ها هستند
اسلاید 5 :
قسمتی از پلازمید Ti که به گیاه منتقل می شود T-DNA نام دارد.
در منطقه T-DNA هیچ ژنی که برای انتقال آن به گیاه ضروری باشد، وجود ندارد.
این منطقه ژن های سرطان زا را در بر می گیرد.
اسلاید 6 :
انتقال T-DNA
جهت انتقال T-DNA به سلول گیاه سه عامل مورد نیاز می باشد.
مرز راست و چپ T-DNA
ژن های ناحیه vir
ژن های کروموزومی مانند chvA، chvB و pscA
اسلاید 7 :
ناقل های مبتنی بر آگروباکتریوم
ساده ترین روش برای بهره گرفتن از پلازمید Ti جهت انتقال ژن به گیاهان، وارد کردن توالی ژن مورد نظر به داخل ناحیه T-DNA و سپس استفاده از پلازمید Ti و باکتری A.tumefacience می باشد تا این توالی ژنی را وارد سلول گیاه کرده و به داخل ژنوم گیاه الحاق کند.
اسلاید 8 :
دلایل عدم استفاده مستقیم از پلازمید Ti
تولید هورمون های گیاهی توسط سلول های ترنسفورم شده در محیط کشت، که از باززایی آنها به گیاهان بالغ جلوگیری می کند.
تولید اپین با استفاده از منابع گیاهی در صورت حذف نشدن ژن تولید اپین
اندازه بزرگ پلازمید Ti
فقدان مکان های برشی منحصر به فرد برای آنزیم های برشی
عدم تکثیر پلازمید Ti در باکتری های دیگر مانند E. coli
اسلاید 9 :
مراحل اصلاح پلازمید Ti
افزودن یک ژن مارکر گزینشگر جهت اعطای مقاومت به سلول های گیاهی ترنسفورم شده
افزودن یک ناحیه شروع همانند سازی (ori) به پلازمید جهت همانندسازی در E.coli
حفظ توالی مرزی راست T-DNA(جهت الحاق و پیوستن T-DNA به توالی DNA سلول گیاهی لازم است)
افزودن یک پلی لینکر (MCS) جهت تسهیل الحاق ژن کلون شده به ناحیه بین توالی های مرزی T-DNA
اسلاید 10 :
انواع ناقل
با توجه به اینکه این ناقل های کلونینگ فاقد ژن های ناحیه Vir هستند، آنها قادر به انتقال و الحاق ناحیه T-DNA (ژن مورد نظر) به داخل سلول و کروموزوم سلول گیاه میزبان نمی باشند. بنابراین دو پلازمید Ti از سیستم ناقل مشتق شده توسعه پیدا کرده است.
