پاورپوینت کشت، تست های افتراقی، آنتی بیوگرام مایکوباکتریوم توبرکولوزیس

بخشی از پاورپوینت

اسلاید 3 :

کشت، تست های افتراقي، آنتی بيوگرام مايکوباکتريوم توبرکولوزيس

اسلاید 4 :

كليات
مايکوباکتريوم ها باکتريهاي ميله ای، هوازی تا ميکروآئروفيليک، بدون اسپور، غير متحرک از رده آکتينوميست هستند که دارای مقادير زيادی چربي با وزن ملکولی بالا در ديواره سلولی هستند.

تاريخچه
ضايعات نخاعی اجساد کشف شده 6000 سال پيش در پرو و مصر
گسترش اپيدمی Great White Plague از انگلستان به ساير مناطق اروپا
كشف باكتري توسط رابرت کخ در 1882، كسب جايزه نوبل 1905

اسلاید 5 :

پديده اسيد فاستی باسيل سل، پل ارليخ در سال 1882
تاسيس انستيتو كنترل سل توسط فليپ در سال 1887 در انگلستان
نخستين کنگره علمی سل انسان و حيوان در سال 1888 در پاريس
ارائه سوش غير بيماريزای ميکروب سل گاوی توسط کالمت و گوئرين فرانسوی در سال 1908

اسلاید 6 :

اپيدميولوژی بيماری سل
يک سوم مردم جهان (1/7 بيليون نفر)آلوده اند ولی اكثراً بيمار نيستند.
بيش از 10 ميليون نفر در جهان داراي علائم کلينيکی
50% مرگ و مير در موارد درمان نشده (اغلب در کشورهای توسعه نيافته يا در حال توسعه)
بيش از هر عامل عفونی منجر به مرگ مي گردد.
80% از کل موارد بيماری سل تنها در 22 کشور جهان اتفاق می افتد: کشورهای جنوب شرق آسيا يعنی هند، اندونزی، بنگلادش، فيليپين و ويتنام

اسلاید 7 :

هند به تنهايي 30% از مسلولين را در خود جای داده است.
96% از مرگ و مير مربوط به اقشار فقير و عمدتاً بی خانمان است.
فقر ، بی خانمانی، ازدحام جمعيت، جنگ، زندان، آسايشگاهها، سوء تغذيه، برخي بيماريها مثل ايدز، ديابت، نارسايي كليه، سيليكوز، درمان با كورتن ها، مصرف دخانيات، زمينه ساز ابتلاء به بيماری سل هستند.

اسلاید 10 :

دسته بندي روشهای تشخيصی باسيل سل
رنگ آميزی زيل نلسون
رنگ آميزی اورامين
کشت و تست هاي بيوشيميايي مرسوم
سيستم رشد C14 broth-based - (BACTEC MGIT) (Mycobacterium Growth Indicator Tube)
تست هايي بر اساس نواحی هايپروريبل 16s RNA
HSP 65KDa PCR
MTD test (Mycobacterium tuberculosis Direct Test)
AMPLICOR MTB
تست بر اساس ژن lux
HPLC

اسلاید 14 :

طرز تهيه محيط كشت لونشتاين جانسون
1- 37/5 گرم از پودر محيط کشت را در 600 ميلی ليتر آب مقطر حل كنيد.
2- 12 ميلی ليتر گليسرول به محلول اضافه كنيد.
3- در 121 درجه سانتيگراد برای 15 دقيقه اتوکلاو شود.
4- پوسته خارجي حدود 25 عدد تخم مرغ تازه ( با عمر حداکثر يک هفته) با آب روان و صابون به خوبي شسته شده به مدت 15 دقيقه در اتانول70% ضدعفونی شود.
5- تخم مرغ ها در يک ارلن 2 ليتری استريل حاوی گلوله های شيشه ای شکسته شده و سوسپانسيون با تکان های شديد هموژن گردد.

اسلاید 15 :

6- سوسپانسيون فوق از فيلتر پارچه ای استريل عبور داده شود تا محصول کاملاً هموژن بدست آيد.
7- محيط کشت اتوکلاو شده LJ تا دمای 50 درجه سرد شد و در شرايط آسپتيک ، 1000 ميلی ليتر از سوسپانسيون هموژن تخم مرغ به آن افزوده گردد.
8- با استفاده از مخلوط کن (magnetic stirrer) مخلوط فوق هموژن شده و در شرايط آسپتيک مقدار 8-6 ميلي ليتر از محيط کشت درون لوله های مک کارتنی استريل ريخته شود.
9- لوله ها بصورت مورب برای مدت 45 دقيقه به بن ماری که حاوی مقدار کمی آب است منتقل شود تا محيط کشت کواگوليت (منعقد) شود. در اين شرايط ميبايست دقت شود که حبابی در داخل محيط های کشت پديد نيايد.

اسلاید 16 :

10- جهت اطمينان از عدم آلودگي محيط های کشت، محيط ها 24 ساعت در 35 درجه انکوبه شود.
11- لوله ها تا زمان استفاده در يخچال نگهداری شود. در صورتی که محيط ها دور از نور باشند تا 4 هفته مي توان آنها را مورد استفاده قرار داد.

اسلاید 18 :

طرز تهيه محيط کشت ميدل بروک 7H9
2/35 گرم از محيط کشت بهمراه 2 ميلي ليتر گليسرول به 450 ميلي ليتر آب مقطر افزوده شده و پس از حرارت دادن و مخلوط شدن کامل، در 121 درجه برای 10 دقيقه اتوکلاو مي شود.

پس از سرد شدن تا دمای 45 درجه، يک ويال مکمل OADC به آن افزوده مي گردد.
OADC (Oleic acid-Albumin-Dextrose-Catalase)

اسلاید 19 :

طرز تهيه محيط کشت ميدل بروک 7H10
19 گرم پودر و 5 ميلي ليتر گليسرول به 450 ميلي ليتر آب مقطر افزوده مي شود. به کمک هيتر شيکر کاملاً مخلوط و در 121 درجه برای مدت 10 دقيقه اتوکلاو مي گردد.

محتويات ويال مکمل OADC در 10 ميلي ليتر آب مقطر استريل حل شده و بعد از سرد شدن محيط کشت تا دمای 55-50 درجه به آن افزوده مي شود. پس از مخلوط کردن، محيط در پليت های استريل پخش مي شود.