بخشی از پاورپوینت
اسلاید 1 :
In The Name of God
اسلاید 2 :
تست حساسیت دارویی(آنتی بیوگرام)
اسلاید 3 :
موارد انجام آزمايش های حساسیت
اگر حساسیت داروئی یک باکتری را نتوان به طور قطعی با توجه به هویت آن باکتری پیش بینی کرد.
اگر باکتری قادر به نشان دادن مقاومت به عوامل ضد میکروبی باشد.
انجام آزمايش حساسیت برای باکتری هایی که به یک دارو حساس شناخته شده باشند، به ندرت ضروری است. (مانند استرپتوکوک پایوژنز که تاکنون به پنی سیلین حساس شناخته شده اند)
حساسیت آنتی بیوتیکی در مطالعات اپیدمیولوژی مقاومت های دارویی و در ارزیابی عوامل ضدمیکروبی
اسلاید 4 :
موارد انجام آزمايش های حساسیت
کلنی جدا شده هر نوع باکتری، باید از روی کشت اولیه انتخاب شود و حساسیت آن آزمایش گردد.
برای تعیین حساسیت هر باکتری، استفاده از کشت خالص باکتری
عدم استفاده از نمونه های بالینی (مایعات استریل بدن و ادرار)، مگر در فوریت های بالینی و زمانی که رنگ آمیزی گرم، وجود باکتری بیماریزا را نشان دهد.
هنگامی که تعیین حساسیت مستقیما با نمونه بالینی انجام می گردد نتایج به طور اولیه گزارش و آزمايش حساسیت با استفاده از روش استاندارد تکرار گردد.
هنگامی که ماهیت عفونت واضح نیست و نمونه دارای رشد مخلوطی از باکتری ها یا همراه با فلور طبیعی باشد، اغلب آزمايش تعیین حساسیت ضرورت ندارد زیرا نتایج ممکن است گمراه کننده باشد.
اسلاید 5 :
انتخاب عوامل ضد میکروبی
انتخاب مناسب ترین عوامل ضدمیکروبی برای تعیین حساسیت و گزارش آن با مشورت بین آزمایشگاه بالینی، متخصص عفونی، داروخانه و کادر پزشکی در کمیته های کنترل عفونت – درمان و دارویی در بیمارستان صورت می گیرد.
فهرست عوامل ضدمیکروبی توصیه شده توسط CLSA
Clinical & Laboratory Standards Institute
اسلاید 6 :
آنتی بیوگرام
آنتی بیوگرام:
تعیین حساسیت یا مقاومت میکروبها نسبت به مواد ضد میکروبی در آزمایشگاه
روشهای مختلف:
Broth-Macrodilution (tube-Dilution) Test
Broth-Microdilution Test
Agar-Dilution Test
E-test
Disk Diffusion Method
اسلاید 7 :
Broth-Macrodilution (tube-Dilution) Tests
MBC
MIC
MBC: Minimal Bactericide Concentration
MIC: Minimal Inhibitory Concentration
اسلاید 8 :
96 well microtiter plate
ug/ml
64 32 16 8 4 2
Broth-Microdilution Tests
اسلاید 9 :
E- test
اسلاید 10 :
E- test
اسلاید 11 :
Agar-Dilution Method
اسلاید 12 :
مواد مورد نياز برای آزمايش تعيين حساسيت ميکروبی
اسلاید 13 :
مولر هينتون آگار
تأمين شرايط رشد مناسب سويه های باكتريايی کم نياز (non fastidious)
براي اطمينان از کيفيت اين محيط، توصيه مي شود هر بسته از محيط خريداری شده کنترل کيفيت شود.
در صورت رشد نامناسب روی محيط مولر هينتون آگار، قطر هاله های ايجاد شده زيادتر از حد واقعی خواهد بود. در اين صورت ممکن است سويه مقاوم، به اشتباه، حساس (حساس كاذب) گزارش گردد.
اسلاید 14 :
مراحل تهيه محيط مولر هينتون آگار
بعد از انجام اتوکلاو، محيط كشت بايد تا دماي 50-45 درجه (ترجيحا در بن ماری) خنك شود.
محيط خنك شده را در ظروف پتری شيشه ای يا پلاستيکی كه بر روي ميز در سطحي کاملا افقی و بدون شيب قرار دارد، ريخته تا عمق يکنواخت mm4 در آنها ايجاد گردد.
ظروف پتری با قطر mm150، گنجايش 70-60 ميلی ليتر و ظروف پتری با قطر mm 100، گنجايش 30- 25 ميلی ليتر را دارند.
هنگام تهيه محيط بايد از حرارت بيش از حد خودداري گردد.
اسلاید 15 :
مراحل تهيه محيط مولر هينتون آگار
5- 3% از محيط های تهيه شده در هر نوبت ساخت بايد در دمای 35-30 درجه به مدت 24 ساعت يا بيشتر از نظر سترون بودن کنترل كيفيت شوند.
اگر ظروف پتري حاوي مولر هينتون آگار در همان روز کاری استفاده نمي شوند، بايد آنها را در 8- 2 درجه نگهداری كرد.
در صورت عدم استفاده از محيط های موجود در يخچال طي مدت 7 روز، بايد آنها را در کيسه های پلاستيكي قرار داده و در يخچال نگهداری نمود.
اسلاید 16 :
کنترل pH محيط مولر هينتون آگار پس از تهيه
pH محيط آگار پس از ژله ای شدن در حرارت اتاق، در حد 7/4-7/2
در pHکمتر از 7/2 بعضی از داروها ( آمينوگليکوزيدها، کينولونها و ماکروليدها) كاهش فعاليت و بعضي نظير تتراسايکلينها افزايش فعاليت و در pH بالاتر از 7/4 احتمال دارد اثرات معکوس مشاهده گردد.
روش های کنترل pH محيط مولر هينتون آگار:
1- روش خيساندن: آگار يك پتري را در ظرفي كوچك حاوي مقدار كمي آب مقطر (ml 7-5) له و به مدت 10 دقيقه بخيسانيد، سپس غوطه ور کردن نوک الکترود pH متر در آن
2- نوک الکترود pH متر را در داخل ارلن کوچکی قرار داده، مقدار اندکی از آگار مذاب را به داخل ارلن ريخته، پس از سفت شدن آگار، اندازه گيریpH
3- الکترودهای سطحی
عدم استفاده ازکاغذ pH متر به دليل عدم حساسيت مورد انتظار
اسلاید 17 :
رطوبت
در صورت خيس بودن سطح آگار در زمان مصرف، ظرف پتري را به مدت 30-10 دقيقه در انکوباتورc °35 و يا با درِ نيمه باز در زير هود كلاس IIدر حرارت اتاق قرار دهيد تا رطوبت اضافی آن تبخير گردد.
براي تلقيح باکتری، سطح محيط كشت بايد مرطوب ولی فاقد قطرات آب بر روی آگار يا درپوش ظرف پتري باشد.
اسلاید 18 :
ارزيابی کيفيت محیط مولر
برای ارزيابی کيفيت هر بسته از محيط مولر هينتون آگار بايد از انتروکوک فکاليس 29212 ATCC و يا ATCC 33186 و ديسک کوتریموکسازول استفاده نمود:
هاله عدم رشد mm 20≤ با حاشيه واضح نشانگر کيفيت مناسب محيط است. قطر هاله mm20>، عدم وجود هاله و يا رشد کلنی ها در داخل هاله، بر کيفيت نامناسب محيط مورد نظر دلالت دارد.
اسلاید 19 :
باکتريهای پرنياز
محيط مولر هينتون آگار جهت انجام آزمايش روی گونه های هوازی (مطلق يا اختياری) با رشد مناسب روی محيط به کار ميرود.
باکتري های پرنیاز نظير گنوگگ، هموفيلوس، مننگوکک، استرپتوکوک پنومونيه، بتا هموليتيک و ويريدنس بدون مواد افزودنی محرک رشد بر روی محيط مولر هينتون رشد کافی ندارند.
اسلاید 20 :
نگهداری ديسک های آنتی بيوتيکی
نگهداری ديسک ها تا زمان انقضاء در يخچال (سرمای 8 درجه يا کمتر) و يا در فريزر (14- درجه يا کمتر)
ارائه ديسک ها در بسته هايي غير قابل نفوذ به رطوبت
خوداری از باز کردن بسته های حاوی ديسک، به ميزان بيش از مقدار مورد نياز
در صورت باز کردن، بايد ديسک ها را در لوله های درپيچ دار محتوی ماده جاذب رطوبت نگهداری كرد و درصورت لزوم، بسته ديسك های باز نشده و يا لوله های درپيچ دار حاوی ديسک، 2-1 ساعت قبل از مصرف از يخچال يا فريزر خارج شود تا به دمای اتاق برسد.
اين کار از تماس هوای گرم با ديسک يخ زده و تغليظ دارو در سطح ديسک جلوگيری می کند.
ديسك هاي موجود در يخچال قبل از استفاده بايد به دماي اتاق برسند.
