پاورپوینت نگهداری ذخایرژنی سلول های خورشی ،پرتغال واشنگتن ناول در ازت مایع

بخشی از پاورپوینت

اسلاید 1 :

نگهداری ذخایرژنی سلول های خورشی ،پرتغال واشنگتن ناول در ازت مایع

و خدایی که دراین نزدیکیست.

اسلاید 2 :

مقدمه
نگهداری در انجماد یکی از روش های خوب نگهداری ذخایرژنی گیاهی برای مدت طولانی است.
مارتین وهمکاران(1988) گزارش دادندتنها 3-4 درصدجنین های منجمد شده زنده مانده و جوانه می زدند
این اولین مقاله درباره ی باززایی جنین های سوماتیکی از
انجماددر پرتغال میباشد.
واردی سال 1982 موفق به کشت کل گیاه باپروتوپلاست
کالوس خورش در8 رقم پرتغال شد.
دراین مقاله مایک روش موفقیت آمیز برای نگهداری
ذخایرژنی کالوس خورش پرتغال ارائه میدهیم

اسلاید 3 :

مواد و روش ها
کالوس بدست آمده از بافت خورش رقم واشنگتن پرتغال در آزمایش انجماد،استفاده شد.
برای شروع کالوس زایی،تخمدان از گلها بریده شده و در محلول کشت MS قرار گرفت
محلول MS حاوی 0/15 مولارساکارز،10 میلیگرم برلیتر،BA و 0/8گرم آگار بود.

اسلاید 4 :

PHمحیط قبل از اوتوکلاو در121 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه،روی 5/7 تنظیم شد.
محلول ماتحت تناوب نوری 16 ساعت روشنایی لامپ مهتابی سرد قرار گرفت
دمای محیط روی 25 درجه سانتی گراد تنظیم شد
کالوس های ما طی 2 تا3 ماه بوجود آمدو 2 سال در همان محلول قرار گرفت

اسلاید 5 :

دراین مرحله باید محلول ما با محلول MT منتقل شود.
10 میلی لیتر،ازسوسپانسیون کالوس 6 روزه ،به تیوب شیشه ای حاوی50 میلی لیتر محلول MT منتقل شد
محلول MT حاوی 1.2 مولار ساکارز بود
تیوب ها درداخل یخ سرد شدند.
2 میلی لیتر محلول سرد شده MT حاوی 1.2
مولارساکارز و30 درصد
DMSO (دی متیل سولفوکسید) به تدریج به محلول
اضافه شد

اسلاید 6 :

500 میکرولیتراز سوسپانسیون سلولی حاوی 100 میلی گرم سلول کالوس به تیوب های
انجماد تا 1/8 میلی لیتر ظرفیت، اضافه شد.
تیوب ها درفریزر قابل تنظیم،چیده شدندوتا -8 درجه سانتیگراد پیش سرمادهی شدند.
انجماد کامل با فشردن تیوب ها با پنس به داخل ازت مایع صورت گرفت.
نمونه ها در دمای نهایی -25 تا -50 درجه به مدت 1 ساعت منجمد شدند.
سپس نمونه ها را بیرون آورده و در آب +40 درجه ذوب شدند

اسلاید 7 :

میزان زنده مانی در سلول ها بعد از این عملیات،با انتقال به اتافک باززایی بررسی شد
در هرتیمار 200 کلنی سلولی آزمایش زنده مانی شد
زنده مانی سلول ها برحسب نسبت درصد زنده مانی سلولی به سلول های شاهد)منجمدنشده) بود
برای رشددوباره نمونه 0/5 میلی لیتراز سوسپانسیون مذکوررا داخل فیلتر های کاغذی گذاشتند
5سانتی متر قطرفیلتر کاغذی بود
فیلتر را نیز داخل 20 میلی لیتر محلول MT حاوی 5 میلیگرم BA و0/8 گرم آگار، داخل یک پتری دیش قرار داده شد
بعد از 4 یا 5 ساعت کاغذ به یک پتری دیش دیگر منتقل شد
پتری دیش ها با پارافیلم مسدود شده و در دمای 25 درجه و16 ساعت روشنایی آنکوبات شدند

اسلاید 8 :

نتایج
بیشترین میزان زنده مانی زمانی بدست آمدکه سلول ها با 5درصد DMSO و 0/7 مولار سوربیتول در دمای –40 درجه سانتی گراد ازت مایع تیمار شدند
تیمار سلول ها در محلول MT حاوی 0/5 ،0/7،1 مولار سوربیتول بدون ساکارز برای 16 ساعت نتیجه بخش نبود
اختلاف معنی داری در تلفیق
DMSO 5 یا 10
درصد با0/7 مولار سوربیتول
دیده نشد

اسلاید 10 :

درترکیب های قندی ومحافظ مختلف ترکیب DMSO با ساکارز 0/7 درصد بیشترین بازده را داشت
طبق جدول میزان زنده مانی باافزایش ساکارزتا 1/2مولار تا 73 درصد، افزایش یافت
بهترین دمابرای زنده مانی سلول ها، در دمای -40درجه سانتی گراد یا آهنگ 0.5درجه دردقیقه بدست آمد

اسلاید 12 :

باززایی سلول های منجمد-ذوب شده بعداز 3 روز شروع شده ولی رشد نمونه شاهد ما بیشتر از یخ زده بود بعد از 12 روز
سلول های رشدکرده باهمان فیلتر به محیط MT حاوی مواد مغذی منتقل شدند
بعد از 2 الی 6 ماه هم به یک جنین لپه ای و گیاه کامل تبدیل شدند

اسلاید 13 :

بحث
زنده مانی سلول های کشت شده ،به دمای نهایی فریز،آهنگ انجماد و گرمایش مجدد،به محافظ های انجماد و غیره بستگی دارد.
برای یک انجمادموفق باید سلول ها با آهنگ آرام 0/5 تا 0/3 درجه بر دقیقه تا -40 درجه ،قبل از ازت مایع ،سرد شوند.
دراین آزمایش سلول های خورش پرتغال با این روش و
شرایط بدرستی منجمدشد

دراین آزمایش کالوس های خورشی باززایی شده،پتانسیل
های جنین زایی را نسبت به نمونه های شاهد تحریک میکند.
همینطور گیاهان باززایی شده از نظر مورفولوژیکی
بسیار یکدست بودند که مطالعات بیشتری نیاز دارد

اسلاید 14 :

چکیده
کشت سوسپانسیون سلولهای خورشی پرتغال ناول،با موفقیت منجمد شد.
سلول های خورشی در محیط کشت MT حاوی DMSO و1/2 مولار ساکارزدر ظورف یخ به مدت 1 ساعت م کشت شدند.
سپس در محلول با آهنگ 0.5درجه سانتی گراد بر دقیقه تا -40 درجه در ازت مایع سرد شدند
سپس بلافاصله تا +40 درجه گرم شدند
سپس سلول هاداخل فیلتر کاغذی قرارداده شده و به محیط کشت حاوی مواد مغذی منتقل شدند
سلول های زنده مانده در مدت 3 روز شروع به رشد کرده و جنین های لپه ای تولید کردند
جنین ها بعد 2 الی 6 ماه به گیاهی کامل تبدیل شدند

اسلاید 15 :

پیشنهادات
استفاده از روش های درست انجماد جهت نگهداری ذخایر ژتیکی
استفاده از انجماد برای نگهداری ژنها و جنین های گیاهان نادر و کمیاب
استفاده از دماها و مواد نگهدارنده ی درست برای افزایش زنده مانی نمونه ها