بخشی از پاورپوینت
اسلاید 1 :
کشت مایکوباکتریوم
قسمت دوم : کشت سل
اسلاید 2 :
ویژگی محیط های کشت سل
محیط های مورد استفاده در مایکوباکتریولوژی، برخلاف محیط های معمول به صورت تجاری و پودر آماده موجود نبوده و باید توسط کارشناس فرموله گردد.
محیط های کشت مایکوباکتریوم قابلیت اتوکلاو شدن را نداشته و می بایست در محیط استریل ساخته شوند.
اسلاید 3 :
محیط کشت لونشتاین جانسون
این محیط به طور گسترده برای کشت باسیل سل استفاده می شود.
محتویات محیط : محلول نمکی، محلول مالاشیت گرین 2% ، مخلوط یکنواخت تخم مرغ
اسلاید 4 :
محلول نمکی
پتاسیم دی هیدروژن فسفات 2.4 گرم
منیزیم سولفات 0.24 گرم
منیزیم سیترات 0.6 گرم
آسپارژین 3.6 گرم
گلیسرول 12 میلی لیتر
آب مقطر 600 میلی لیتر
مواد فوق را به ترتیب در آب مقطر حل کرده و حرارت دهید. سپس در دمای 121 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه در اتوکلاو استریل کنید.
اسلاید 5 :
محلول مالاشیت گرین 2%
رنگ سبز مالاشیت 2 گرم
آب مقطر استریل 100 میلی لیتر
ابتدا رنگ را در آب مقطر استریل حل کرده و سپس به مدت یک ساعت روی روتاتور قرار دهید تا به خوبی حل شود. رنگ را در ظرف های درب دار تقسیم کرده و اتوکلاو نمایید. مالاشیت نباید در معرض نور قرار گیرد.
اسلاید 6 :
مخلوط یکنواخت تخم مرغ
تخم مرغ تازه را با یک برس کاملا تمیز نمایید. و به مدت 5 دقیقه در محلول صابون 5% قرار دهید.
تخم مرغ ها را با آب سرد شسته و زیر آب جاری قرار دهید.
تخم مرغ ها را به مدت 5 دقیقه در الکل 70% قرار دهید.
در شرایط استریل، تخم مرغ ها را زیر هود در یک ارلن بزرگ بشکنید.
با تکان شدید تخم مرغ ها را کاملا یکنواخت کرده و از 4 لایه پارچه نازک بگذرانید.
اسلاید 7 :
ساخت محیط
محتویات فوق را در یک ارلن استریل 2 لیتری با هم مخلوط کنید.
6 تا 8 سی سی از مخلوط فوق را در لوله های درپیچ دار مک کارتنی بریزید و درب لوله ها را ببندید.
لوله ها را به مدت 45 دقیقه در انکوباتور 80 درجه قرار دهید تا منعقد گردند.
اسلاید 8 :
چه نمونه هایی باید کشت داده شوند؟
نمونه هایی که درخواست کشت دارند.
نمونه های خارج ریوی
نمونه هایی که نتیجه دید مستقیم آن ها مثبت است.
اسلاید 9 :
هضم و آلودگی زدایی
اسلاید 11 :
کلونی مایکوباکتریوم
کلونی مایکوباکتریوم در دری محیط لونشتاین، به صورت کلونی های خشن و کرم رنگ دیده می شود.
شبیه خرده نان خشک
اسلاید 12 :
گزارش نتایج
اسلاید 13 :
Quality control in Instruments & Equipments
• Equipment should meet the manufacturers claims and specifications
تجهیزات باید منطبق با ادعا و مشخصات(کاتالوگ) شرکت سازنده باشد.
• Written operating and cleaning instructions must be kept in a file for all equipment
دستور کارکرد و نگهداری برای هر دستگاه(شناسنامه دستگاه) باید در پوشه نگهداری شود.
• Dated service records must be kept for all equipment
برگه های سرویس (تعمیر) تاریخ دار تمام دستگاهها باید نگهداری شود.
• Equipment must be monitored regularly to ensure the constant accuracy and precision necessary.
تجهیزات بایستی بطور مرتب پایش شوند تا از ثبات دقت و تکرار پذیری لازم اطمینان حاصل شود.
اسلاید 14 :
Q.C in Culture Media preparation(1)
- Use fresh eggs for preparation of Lowenstein - Jensen media, wash them carefully and soak them with 70% alcohol.
استفاده از تخم مرغ تازه (روز) ، شستشوی با دقت تخم مرغها و غوطه ور کردن آنها در الکل 70 درجه
Record preparation date of malachite- green and mineral salt solution.
ثبت تاریخ تهیه محلول مالاشیت گرین و محلول حاوی نمکهای معدنی (پایه محیط کشت)
Freshly prepared and sterilized malachite green and mineral salt solution.
استفاده از محلول مالاشیت گرین و محلول حاوی نکمهای معدنی بصورت تازه تهیه شده و تازه استریل شده
All glass- ware and glass tubes should be sterilize in (autoclave in 121 °C /15 min. 180 °C for 2 hours.)
تمامی شیشه آلات و مک کارتنی ها بایستی در اتوکلاو با درجه حرارت 125 درجه بمدت 15 دقیقه و در فور 180 درجه بمدت دو ساعت استریل گردند
اسلاید 15 :
Q.C in Culture Media preparation(2)
Clean the biological safety cabinet before media preparation.
قبل از تهیه محیط کشت هود مربوطه (محل مناسب) کاملا تمیز کنید.
Control the coagulator temperature by a thermometer.
درجه حرارت کواگولاتور (دمای 85 درجه) را با دماسنج کالیبره کنترل نمائید.
Check time needed for media coagulation.
زمان پختن کامل محیط کشت را (دردمای فوق) مد نظر داشته باشید.
اسلاید 16 :
Wash the coagulator after each media preparation.
کواگولاتور را پس از هر مرحله محیط سازی تمیز کنید
Following inspissation, check visual appearance of media for discoloring, air-bubbles.
متعاقب انعقاد محیط کشت، ازنظر ظاهری محیطها از لحاظ رنگ و وجود حباب بررسی شود
Record preparation date under each L. J culture tubes.
در ته لوله های محیط کشت تاریخ (و شخص سازنده محیط) را درج نمائید.
Q.C in Culture Media preparation(3)
اسلاید 17 :
Q.C in Culture Media preparation(4)
Check 10% of media for sterility by incubation at 37°C for 72 hours.
10% محیطهای کشت را جهت کنترل آلودگی بمدت 72 ساعت در 37 درجه انکوبه نمائید
Calculate the number of contaminated media before inoculation (After check)
محیطهای کشت آلوده را قبل از انجام کشت نمونه ها جمع آوری کنید
Keep all media in the refrigerator.
تمام محیطهای کشت (بعد از کنترل نهائی) را در یخچال نگهداری نمائید
اسلاید 18 :
Q.C in Digestion & Decontamination procedures (1)
Keep a monthly record of contaminated specimens:
the acceptable range in 2-5%.
میزان آلودگی محیطهای کشت بعد از مرحله انجام کشت را ماهانه محاسبه نمائید.
میزان قابل قبول آلودگی 2 تا 5 %
Contamination rate <2% indicates overly harsh the contamination, which means that too many tubercule bacilli are killed.
میزان آلودگی کمتر از 2% نشاندهنده آلوده زدائی بسیار خشن بوده و بیانگر این مطلب است که تعداد زیادی از باسیلهای سل از بین رفته اند.
اسلاید 19 :
Q.C in Digestion & Decontamination procedures(2)
If the laboratory is experiencing delays of delivery specimens the contamination rate may be greater than 5%.
اگر آزمایشگاه تجربه دریافت با تاخیر نمونه ها جهت کشت را داشته باشد میزان آلودگی محیطهای کشت بالای 5% خواهد بود.
If a rate of > 5% persists, ensure that specimens are completely digested, because partially digested specimens may not be completely decontaminated.
اگر میزان آلودگی بالای 5% حادث شود، مطمئن شوید که مرحله هضم نمونه ها بطور کامل صورت گرفته زیرا هضم نا کافی نمونه ها امکان آلوده زدائی کامل را نخواهد داشت
Thoroughly mix the contents of centrifuge tubes to ensure that the inside surface have been well decontaminated.
بطور کامل ماده ضدعفونی کننده مناسب را با سطح داخلی جا لوله های سانتریفیوژآغشته نمائید تاکاملا آلوده زدائی صورت گیرد
Check the quality of solutions that have been used during processing (Record in the Form).
کیفیت محلولهایی که در آلوده زدائی از آنها استفاده مینمائید کنترل نمائید .(در فرمهای مخصوص ثبت نمائید)
اسلاید 20 :
If AFB are seen on smear but not have grown on culture, it may possible that: اگر باسیل اسید فست در لام مشاهده ولی کلنی در روی محیط کشت رشد ننماید ممکن است:
Organisms are dead as a consequence of the treatment (Fragmented bacilli)
باسیلهای مرده مربوط به بیمار تحت درمان باشد(باسیلهای شکسته)
Decontamination is not performed properly: too long time of decontamination.
مرحله آلوده زدائی نمونه ها بصورت مناسب انجام نشده باشد:مدت زمان آلوده زدائی بیش از اندازه باشد.
High concentration of the NaOH (decontaminant agent)
غلظت بالای سود (محلول آلوده زدائی)
Bad quality of the media.
کیفیت نامطلوب محیطهای کشت تهیه شده
Bad conditions of the incubation: too low or too high temperature of the incubator.
شرایط نامطلوب انکوباسیون: درجه حرارت خیلی پائین یا خیلی بالای انکوباتور
