پاورپوینت ارزیابی کیفیت محیط های کشت میکروبی

بخشی از پاورپوینت

اسلاید 1 :

ارزیابی کیفیت محیط های کشت میکروبی

اسلاید 3 :

نکات مه

اسلاید 4 :

ارزیابی کیفیت محیط های کشت میکروبی
هر آزمایشگاه باید از کیفیت هر شماره ساخت از محیط های آماده مصرف تجاری و یا محیطهای کشت دهیدراته، قبل از استفاده اطمینان حاصل نماید. الزامات عمومی کنترل کیفیت محیط های کشت عبارتند از:
1)ثبت اطلاعات محیط های کشت
2)بررسی ظاهری
3)بررسی آلودگی
4)انجام آزمایش کنترل کیفیت

اسلاید 5 :

1) ثبت اطلاعات محیط های کشت
1.محیط های آماده مصرف تجاری:
منبع تهیه آن (شرکت سازنده)، شماره ساخت، تاریخ انقضاء، تاریخ دریافت، تاریخ شروع به استفاده
نگهداری هر محیط مطابق دستورالعمل سازنده (معمولا در دمای اتاق )
2.محیط های ساخته شده از پودر دهیدراته در آزمایشگاه:
مقدار محیط ساخته شده، منبع تهیه آن، شماره ساخت، روش استریل نمودن آن، تاریخ ساخت، pH، تاریخ شروع به استفاده از آن، تاریخ انقضاء و نام فرد سازنده آن ثبت

اسلاید 6 :

2) بررسی ظاهری
شکستگی یا آسیب دیدگی پلیت ها و لوله ها
جدا شدن آگار از جداره پلیت ها و لوله ها
یخ زدگی یا ذوب شدن آگار
پر شدن ناصاف پلیت ها
مقدار ناکافی آگار در پلیت ها (کمتر از mm۳ عمق) و لوله ها (عمق و سطح ناکافی)
وجود همولیز در محیط های حاوی خون
تغییر در رنگ مورد انتظار برای هر محیط (احتمال وجود مشکل درpH محیط)
وجود حباب یا ناهمواری در سطح محیط
رطوبت اضافی یا از دست رفتن آب محیط
آلودگی قابل مشاهده
وجود رسوب

اسلاید 7 :

3)بررسی آلودگی
تعداد
برای batch های ۱۰۰ تایی یا کمتر، به تعداد %۵ نمونه
برای batch های بیشتر از ۱۰۰ تا، ۱۰ نمونه
انتخاب تصادفی
انکوباسیون
به مدت ۴۸ ساعت در دمایی که استفاده خواهند شد (معمولا C۱±۳۶)
و سپس به مدت ۴۸ ساعت دیگر در دمای اتاق

اسلاید 8 :

4)انجام آزمایش کنترل کیفیت
بررسی هر محیط کشت از نظر میزان رشد قابل قبول و/یا خصوصیت مهارکنندگی، با میکروارگانیسم های کنترل مناسب مطابق جدول ۲
A.محیط های کشت غیر انتخابی
B.محیط های کشت انتخابی
C.محیط های لوله ای
D.محیط های بیوشیمیایی
E.محیط های انتقالی

اسلاید 9 :

منابع تهیه میکروارگانیسم های کنترل
(American Type Culture Collection) ATCCیاPersian Type Culture Collection) PTCC
سویه های شناسنامه دار که طی برنامه ارزیابی خارجی کیفیت دریافت می شوند
سویه های شناخته شده بیماران که دارای ثبات فنوتیپی می باشند
استفاده از سویه های ATCC برای کنترل کیفی دیسک های آنتی بیوتیک اجباری می باشد.

اسلاید 10 :

A.محیط های کشت غیر انتخابی ) مانند بلاد آگار
روش انجام آزمایش جهت کار آرائی performance Test
تهیه سوسپانسیون از کشت تازه و خالص هر سویه کنترل در سرم فیزیولوژی استریل مطابق کدورت استاندارد نیم مک فارلند ((cfu/mL 108- 107×1
رقیق سازی این سوسپانسیون در سرم فیزیولوژی استریل به نسبت 1:100
تلقیحLµ10 (mL0.01) از رقت بدست آمده روی هر پلیت مورد آزمون، و کشت به گونه ای که کلنی های ایزوله بدست آید
اگر با تلقیح رقت 1:100 روی پلیت کلنی های متراکم رشد کند، برای ایجاد کلنی های ایزوله از رقت 1:1000 استفاده کنید.
انکوباسیون پلیتها مطابق شرایط ذکر شده در جدول ۱
تفسیر:
کیفیت یک محیط غیر انتخابی زمانی قابل قبول است که سویه های کنترل روی آن محیط رشد کافی داشته و اندازه و مورفولوژی کلنی ها متناسب با نتایج مورد انتظار باشد.

اسلاید 11 :

. Bمحیط های کشت انتخابی
روش انجام آزمایش:
تهیه سوسپانسیون از کشت تازه و خالص هر سویه کنترل در سرم فیزیولوژی استریل مطابق کدورت استاندارد نیم مک فارلند (cfu/mL 108- 107×1
رقیق سازی این سوسپانسیون در سرم فیزیولوژی استریل به نسبت 1:10
تلقیحLµ10 (mL0.01) از رقت بدست آمده روی هر پلیت مورد آزمون، و کشت به گونه ای که کلنی های ایزوله بدست آید
اگر با تلقیح رقت 1:10 روی پلیت کلنی های متراکم رشد کند، برای ایجاد کلنی های ایزوله از رقت 1:100 استفاده کنید.
انکوباسیون پلیتها مطابق شرایط ذکر شده در جدول ۱
تفسیر:
کیفیت یک محیط انتخابی زمانی قابل قبول است که سویه های کنترل روی آن محیط رشد کافی داشته، اندازه و مورفولوژی کلنی ها متناسب با نتایج مورد انتظار باشد، ضمن اینکه رشد بعضی از سویه ها را مهار کند.

اسلاید 12 :

.Cمحیط های لوله ای
روش انجام آزمایش:
تهیه سوسپانسیون از کشت تازه و خالص هر سویه کنترل در سرم فیزیولوژی استریل مطابق کدورت استاندارد نیم مک فارلند (cfu/mL 108- 107×1
تلقیحLµ10 (0.1mL) سوسپانسیون در محیط لوله ای بدون رقیق نمودن
انکوباسیون لوله ها مطابق شرایط ذکر شده در جدول ۱
تفسیر:
کیفیت محیط های لوله ای زمانی قابل قبول است که سویه های کنترل روی آن رشد کافی داشته باشند

اسلاید 13 :

D.محیط های بیوشیمیایی (مانند سیترات آگار ، اروه و. (
روش انجام آزمایش: .از کلونی باکنری کنترل مثبت وکنترل با آنس برداشت کرده
تلقیح و سپس انکوباسیون هر محیط مطابق روشی که بصورت معمول از آن استفاده می شود
تفسیر:
کیفیت محیط های بیوشیمیایی زمانی قابل قبول است که سویه های کنترل روی آن رشد کافی داشته باشند و با سویه های کنترل مثبت و کنترل منفی واکنشهای بیوشیمیایی مورد انتظار ایجاد گردد.

اسلاید 14 :

E. محیط های انتقالی
روش انجام آزمایش:
تهیه سوسپانسیون از کشت تازه و خالص هر سویه کنترل در سرم فیزیولوژی استریل مطابق کدورت استاندارد نیم مک فارلند (cfu/mL 108- 107×1) )
فرو بردن یک سوآب استریل در این سوسپانسیون، با فشردن به دیواره لوله آب اضافی آن را خارج کنید. سوآب را در محیط انتقالی غوطه ور نمایید.
انکوباسیون محیط در دمای اتاق
سپس کشت سوآب روی محیط پلیتی مناسب
تفسیر:
وجود رشد کافی

اسلاید 15 :

جدول ۱- شرایط انکوباسیون

اسلاید 16 :

شکل ۱- آماده سازی سوسپانسیون برای کنترل کیفیت محیط های کشت

اسلاید 17 :

جدول کنترل کیفی محیطهای غیر انتخابی

اسلاید 18 :

جدول کنترل کیفی محیطهای انتخابی

اسلاید 19 :

جدول کنترل کیفی محیطهای براث

اسلاید 20 :

جدول کنترل کیفی محیطهای افتراقی