بخشی از مقاله
چکیده:
هر ساله مقادیر معتنابهی نفت و ترکیبات نفتی از راههای مختلف مانند جنگ ،نشت لوله های نفتی ، فعالیتهای حفاری و اکتشاف نفت وارد محیط زیست می شود ،که این مقدار تقریبا 320 میلیون تن تخمین زده می شود . تخریب زیست محیطی از جانب این آلودگی های نفتی ، نیاز به استراتژی های سازگار با محیط زیست دارد که در این بین ، تجزیه زیستی توسط میکروارگانیسم ها نقش اساسی ایفا می کند . در این مطالعه یک سویه باکتری از خلیج فارس در سواحل بوشهر جداسازی و فاکتورهای PH و درصد نمک بهینه به روی این باکتری تعیین شد . PH مطلوب در حدود 8/4-8 بدست آمد و درصد نمک مطلوب صفر تا هفت درصد کلرید سدیم گزارش گردید.
مقدمه :
هر ساله مقادیر معتنابهی نفت و ترکیبات نفتی از راههای مختلف نظیر جنگ ،نشت لوله های نفتی ، فعالیت های حفاری و اکتشاف نفت ،پالایشگاه ها و صنایع مرتبط با نفت خام وارد محیط زیست می شود ، که این مقدار تقریبا 320 میلیون تن تخمین زده می شود . مناطق نفت خیز جهان به نواحی ویژه ای نظیر خلیج فارس محدود شده اند ، لذا این مناطق در معرض بیشترین آلودگی نفتی قرار دارند . آلودگی های حاصل از ترکیبات نفتی در صورتی که کم باشد تحت تاثیر عواملی مانند تبخیر و اکسیداسیون نوری به ترکیبات دیگری تبدیل شده و یا توسط میکروارگانیسمهای موجود در طبیعت مصرف و حذف می گردند .
اما در محیط هایی که آلودگی وسعت زیادی دارد آلودگی به خودی خود برطرف نمی شود . لذا تخریب زیست محیطی ازجانب این آلودگی ها نیازمند راهکارهای اساسی است تا با کمترین هزینه و بدون اینکه دخل تصرفی در اکوسیستم ایجاد شود آلاینده ها را برطرف کند . در میان انواع روشهای بکار رفته ، تجزیه زیستی توسط میکروارگانیسمها نقش اساسی در حذف مواد نفتی از محیط زیست دارند .
این میکروارگانیسمها ابتدا باتولیدو ترشح بیو سورفاکتانت نفت خام را امولسیونه می کنند و در نتیجه نسبت سطح به حجم قطرات نفت بسیار افزایش می یابد و بدین طریق دسترسی باکتریها را به ترکیبات نفتی بیشتر کرده و کارایی آنها را در مصرف نفت افزایش می دهد . هدف از این پژوهش تعیین مناسب ترین PH و درصد نمک برای باکتریهای جدا شده از سواحل بوشهر است .
مواد و روشها :
نمونه گیری :
نمونه گیری از سواحل بوشهر صورت گرفت . نمونه ها تا زمان شروع آزمایش در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری شدند ، به منظور هوا دهی ، درب آنها بصورت نیمه باز گذاشته شد . فاکتورهای PH و درصد نمک اندازه گیری شدند .
تهیه محیط کشت پایه:
محیط کشت پایه نمکی مورد استفاده برای بررسی تجزیه نفت خام شامل: 1/95 گرم کلرید آمونیم ،0/24 گرم دی پتاسیم هیدروژن فسفات ، 0/01 گرم سولفات آهن II ، 0/05 گرم کلرید پتاسیم ، 0/01 گرم کلرید کلسیم ، 1 میلی لیتر محلول میکرو عناصر در 1000 میلی لیتر آب مقطر
تهیه محلول میکرو عناصر :
70 میلی گرم کلرید روی ، 100 میلی گرم کلرید منگنز ، 200 میلی گرم کلرید کبالت ،100 میلی گرم کلرید نیکل ، 20 میلی گرم کلرید مس II ، 50 میلی گرم مولیبدات سدیم ، 26 میلی گرم سلنیت سدیم ، 10 میلی گرم وانادات سدیم ، 30 میلی گرم ولفرامات سدیم ، 1 میلی لیتر اسید کلرید %25 که در 1000 میلی لیتر آب مقطر حل شد.
بررسی PH بر رشد و مصرف نفت :
برای بررسی اثر PH ، باکتری مذکور در ارلن شیار دار 250 میلی لیتر حاوی 100 میلی لیتر محیط پایه کشت داده شد . PH محیط توسط بافر Tris/HcL استریل و بعد از اتوکلاو به روی7 ، 7/5 ،8، 8/4 و 9 تنظیم شد .
آزمایش نمک دوستی :
برای بررسی توانایی رشد باکتری در غلظت های مختلف نمک از محیط پایه با غلظتهای مختلف از صفر تا هفت درصد کلرید سدیم استفاده شد .
اندازه گیری پروتئین :
اندازه گیری میزان پروتئین کل سلولی بعنوان شاخص دقیق زیستی نفت ، مورد بررسی قرار گرفت . برای این منظور 1 میلی لیتر از محیط کشت حاوی باکتری در لوله آزمایش ریخته و سانتریفوژ شد. رسوب سلولی توسط سود 0/3 مولار بمدت 90 دقیقه در بن ماری 60 درجه سانتی گراد لیز شد و سپس رنگ آمیزی پروتئین به روش لاری صورت گرفت و با استفاده از منحنی استاندارد آلبومین سرم گاوی مقدار پروتیئن کل تولیدی بصورت روزانه تعیین شد.
