بخشی از پاورپوینت
اسلاید 1 :
تضمین کیفیت در روش الایزا
اسلاید 2 :
Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay
ELISA
اسلاید 3 :
روش استانداردسازی نمونه گیری تستهای هورمونی
رژیم غذایی عادی
حداقل یکساعت قبل از نمونه گیری از خواب بیدار شده باشد .
قبل از نمونه گیری در آزمایشگاه 15-10 دقیقه با آرامش بنشیند .
زمان بستن تورنیکت حداكثر یک دقیقه است .
گرچه غذا خوردن در بسیاری از تستهای هورمونی تاثیر زیادی ندارد توصیه می شود جهت یکنواختی نمونه ها و شفافیت آنها بیمار حداقل 6-4 ساعت قبل از خونگیری ، غذا نخورده باشد .
اسلاید 4 :
انتقال نمونه ها
نمونه خون حداکثر پس از نیم ساعت سانتریفیوژ شده و سرم آن جدا می شود .
حداکثر زمان مورد قبول جهت جدا کردن سرم برای تستهای هورمونی 2 ساعت است .
دور و زمان سانتریفیوژ باید استاندارد باشد ، نیروی سانتریفیوژ (RCF) بین 1000-850 واحد g برای مدت 7-5 دقیقه بوده ، که برای سانتریفیوژهای رومیزی معمولی معادل 2000-1500 دور در دقیقه (rpm) است .
اسلاید 5 :
در صورتیکه تستهای هورمونی ظرف 48 ساعت پس از جدا کردن سرم انجام گیرد ، نگهداری سرم به صورت در بسته در یخچال (c˚6-2) توصیه می شود و نیازی به نگهداری آن در فریزر نیست .
در صورتیکه زمان نگهداری سرم ( یا سایر نمونه ها ) طولانی تر است ، نگهداری نمونه به صورت در بسته در فریزر c˚20- توصیه می شود . توجه داشته باشید که فریزر بالای یخچالهای معمولی ( یخچالهای یک درب ) حداکثر به c˚10- می رسد و قادر به نگهداری و حفظ تمامیت نمونه ها نیست .
جهت نگهداری طولانی مدت نمونه ها یا نمونه مورد نظر جهت انجام تستهای خاص ( رنین پلاسما) استفاده از فریزر c˚70- توصیه می شود .
اسلاید 6 :
برای عملکرد صحیح باید دستگاه در فضای تمیز و عاری از گرد و غبار باشد و بر روی یک میز ثابت و دور از وسایل ارتعاشزا (مانند سانتریفیوژ و .) قرار گیرد و دستگاه باید سیم اتصال به زمین داشته باشد.
اسلاید 7 :
-بررسی تکرار پذیری
-بررسی صحت
-بررسی خطی بودن
-کنترل کالیبر بودن موتور جا بجا کننده پلیت
کنترل کیفی الایزا ریدر
اسلاید 8 :
یک میکروپلیت مناسب انتخاب کنید، محلول متیل اورنج در % 0.1 توئین 20 را تازه تهیه کرده و رقتهای مختلفی از این محلول را تهیه نمایید و در طول موج 492 نانومتر خوانش کنید. هر رقت را حداقل ده بار خوانده میانگین،انحراف معیارو CVرا بدست آورید
CVبدست آمده باید کمتر از CVمجاز باشد
accepted CV is 3%
بررسی تکرار پذیری
اسلاید 9 :
هدف تعیین تفاوت جذب واقعی با جذب مشاهده شده می باشد
صحت فتومتری به توانایی لامپ در ارائه حداکثر تابش فتوالکتریک ، نوع و کیفیت منوکروماتور (تک رنگ کننده) بستگی دارد.
این بررسی به سه روش انجام می شود:
الف-در صورت استفاده از محلول رنگی متیل اورنج(متیل اورنج در % 0.1 توئین 20 را تازه تهیه شده) بایدOD خوانده شده توسط الایزا ریدربا ODخوانده شده در اسپکتروفتومترمرجع طبق فرمول زیر مقایسه شود و در صد inaccuracy یا Bias مربوطه محاسبه شود
عدم صحت نباید از 1.5% بیشتر باشد و یا ODدستگاه مورد نظر باید در محدوده 0.001±اسپکتروفتومتر مرجع باشد.
بررسی صحت
اسلاید 13 :
جهت آزمون خطی بودن میتوان از محلول های تجاری با جذب نوری مشخص در طول موجهای مشخص استفاده نمود، در صورتیکه میانگین جذب نوری در رقت های مختلف در محدوده مورد انتظار میباشد که شرکت سازنده ادعا نموده است، تائید خطی بودن دستگاه است.
در غیر این صورت باید با شرکت سازنده تماس بگیرید.
آزمون خطی بودن
اسلاید 17 :
- در مورد معیارهای غیر قابل قبول بودن نمونه مندرج در بروشور کیت توجه لازم اعمال شود زیرا در غیر این صورت در نتایج بدست آمده ایجاد مشکل خواهند کرد.
-باید نمونه ها قبل از انجام آزمایش کاملا مخلوط شوند .
- در هنگام سمپل کردن به حجم برداشت شده توسط سمپلر توجه شود .
- از عدم وجود حباب در نوک سمپلر حین سمپل کردن اطمینان حاصل نمائید.
- در سمپل های با مقادیر پائین ( 10 , 5λ) نوک سمپلر را تا انتهای لوله در نمونه فرو نبرید و جهت اطمینان از رعایت این موارد در صورت امکان از دستمال نمگیر جهت پاک کردن نوک سمپلر استفاده شود.
- هنگام خالی کردن نمونه یا هر محلول دیگر در درون چاهکها در مراحل مختلف کاری حتما از زاویه کمتر از 90 درجه استفاده شود تا از پاشیدن محلول یا نمونه به چاهکهای مجاور و صورت جلوگیری شود.
- در مورد سمپل نمونه ها با تعداد بالا ، حتما فاصله زمانی سمپل اولین نمونه با آخرین نمونه مورد توجه قرار گیرد در صورت زیاد شدن فاصله زمانی نمونه ها را از نظر تعداد تقسیم کرده و در دو سری کاری جدا از هم با کنترل و کالیبراتورهای مچزا سمپل کنید.
-برای هر نمونه از یک سرسمپلر جداگانه وسمپلر كاليبره استفاده نمایید.
-از ایجاد کف در هنگام افزودن نمونه ها خودداری کنید زیرا مانع اتصال صحیح خواهد شد.
-به مدت زمان نگهداري نمونه قبل و بعد از انجام آزمايش توجه شود.
کنترل نمونه
اسلاید 18 :
قبل از انجام آزمایش حتما محتویات کیتها و خود کیت از جهت Lot. No و Exp.Date با بروشور کیت کنترل شود .
استفاده از كنترل هاي Cutoff- Positive- Negative موجود در كيت.(به جذب داده شده در بروشور كيت توجه شود)
از به کار گیری اجزای کیت های که شماره سری ساخت آنها یکی نیست خودداری نمایید .
- از محلول ها و معرف ها پس از انقضاء تاریخ آنها استفاده نکنید .
- قبل از انجام آزمایش تمام مواد مصرفی به دمای 32-20 درجه برسند.
-ميكروپليت ها را به اندازهاي كه احتياج داريد از يخچال خارج كنيد.
-درب كليه ويال هاي كيت پس از استفاده محكم بسته شودتا احتمال آلودگي و تماس با هوا به حداقل برسد.
-همه محلول هاي كيت پس از استفاده بلافاصله داخل يخچال گذاشته شوند تا از فعاليت آنها كاسته نشود.
- رعایت دقیق زمان انکوباسیون ضروری است فاصله بین اضافه کردن سوبسترا ، محلول رنگ زا و متوقف کننده به اولین و آخرین چاهک نباید از 4-3 دقیقه بیشتر طول بکشد .
-از گذاشتن ریجنتها در معرض نور خودداری شود.
-محلول شستشو رقیق شده برای یک ماه دردمای 8-2درجه قابل نگهداری است.چنانچه داراي كريستال باشد آنرا در حمام آب c 37ْ قرار دهيد تا كريستال ها حل شود.
-استرپهای استفاده نشده راهمراه نمگیر به داخل کیسه مخصوص برگردانید ودرب آنرا خوب ببندید.
- صحت محلولها از جهت فقدان آلودگی ، ( بخصوص سوبسترا – TMB و کونژوگه) کنترل شوند و از نظر بی رنگ بودن سوبسترا –TMB اطمینان حاصل نمائید.
- برای کنترل صحت کونژوگه می توانید از سوبسترا-TMB کنترل شده و بدون رنگ استفاده نمائید به این منظور محلول سوبسترا- TMB را به کونژوگه اضافه نمائید در صورت فقدان رنگ محلول کونژوگه دچار مشکل می باشد و نباید از آن کیت استفاده شود.
کنترل کیت:
اسلاید 19 :
محلولهای موجود در کیت:
- در مورد کیت هایی که محلول های کنژوگه و سوبسترای آن باید طبق بروشور کیت تهیه شوند رعایت نکات زیر الزامی است.
- وان مخصوص تهیه این محلولها ، کاملا تمیز و عاری از هرگونه آلودگی باشد.
- به زمان لازم تهیه این محلولها قبل از مرحله مورد نظر توجه شود چرا که در بعضی از کیتها توصیه می شود که محلول مورد نظر حتما قبل از مصرف در ساعات خاصی آماده شود و تا ساعت و یا زمان خاصی قابل استفاده می باشد.
- در رابطه با کیتهایی که یک یا چند معرف آن لیوفیلیزه می باشند حتما به زمان و شرایط نگهداری آنها که مندرج در بروشور کیت می باشد توجه شود و طبق توصیه کیت آنها را تقسیم نموده و در دمای مورد نظر و زمان لازم نگهداری شود.
- تهیه محلول شستشو طبق رقت مندرج بر روی ویالهای مربوطه و طبق بروشور کیت باید صورت گیرد.
- از آب مقطر یونیزه درجه دو جهت تهیه محلول شستشو استفاده شود.
اسلاید 20 :
انجام تست ها و کنترل های زیر جهت اطمینان از کیفیت کیت مصرفی کمی توسط سازمان جهانی (WHO) و انجمن بین المللی شیمی بالینی (IFCC) توصیه شده است :
1) کنترل دقت
تست با سرم کنترل معتبر یا حوضچه های سرمی (pooled serum) 10 بار پیاپی در یک run یا 10 روز پیاپی (between run) تکرار می شود و میانگین ، انحراف معیار (SD) و ضریب تغییرات (CV) آن محاسبه و تعیین می گردد :
مقدار قابل قبول عدم دقت (CV) عبارتست از :
3-2%≥within run CV
5%≥ between run CV
کنترل کیفی کیتهای کمی
