پاورپوینت دستورالعمل تشخیص آزمایشگاهی باکتریهای مولد اسهال

بخشی از پاورپوینت

اسلاید 1 :

بنام خدا

اسلاید 2 :

دستورالعمل تشخيص آزمايشگاهي باکتریهای مولد اسهال

اسلاید 3 :

نمونه گيري
اولين قدم در راه تشخيص صحيح آزمايشگاهي ، نمونه گيري دقيق و درست در زمان بروز بيماري است.

نمونه گيري مدفوع بايستي در مراحل اوليه بيماري (حداكثر ظرف 1 تا 2 روز كه عامل بيماري زا به تعداد بيشتري در مدفوع وجود دارد) و قبل از درمان با آنتي بيوتيك صورت پذيرد.

نمونه مدفوع (در صورت قوام دار بودن حداقل 5 گرم و يادر صورت کاملا آبکی بودن معادل 5 سی سی) نسبت به سواب برتری دارد وحداقل بايد دو نمونه سوآب مقعدي يا سوآب از مدفوع تازه براي هر بيمارجمع آوري و در محيط انتقالCary Blair تلقیح شود.

اسلاید 4 :

تهيه نمونه مدفوع و سوآب از مدفوع
براي نمونه مدفوع ، از يك ظرف درپيچدار تميز با اندازه مناسب استفاده نماييد .
هنگامي كه نمونه به آزمايشگاه مي رسد لازم است به سرعت آزمايش بر روي آن انجام شود . ( بيشتر از 2 ساعت از زمان نمونه گيري نگذشته باشد.)

اگر ناچار به نگهداري نمونه ها بيشتر از 2 ساعت هستيد ، سو آب را درون نمونه مدفوع قرار داده و پس از حركت چرخشي ، آن رادر يك محيط انتقالي تلقيح كنيد.

اگر مدفوع حالت مخاطي دارد سعي كنيد نمونه را همراه مخاط در محيط ترانسپورت تلقيح نماييد.

اسلاید 5 :

سوآب مقعدي
براي نمونه گيري از سوآب پنبه اي سالم استفاده كنيدو دقت كنيد كه پنبه سر آن كنده نشده باشد.

ابتدا سوآ ب را با فرو كردن در محيط ترانسپورت استريل مرطوب كرده و سپس به اندازه2/5تا 3/5سانتی متر داخل اسفنكتر ركتوم نموده و بچرخانيد و بيرون بكشيد . با توجه به تغيير رنگ پنبه ي سر سوآ ب مطمئن شويد سوآ ب به مدفوع آغشته است .تعداد سوآب مورد نياز بستگي به تعداد عوامل پاتوژن مورد مطالعه دارد.معمولاحداقل 2 سوآ ب بايد تلقيح شود .

اسلاید 6 :

دستورالعمل عمومی برای جمع آوری نمونه
نمونه را قبل از درمان آنتی بیوتیکی جمع آوری کنید.
امکان آلوده شدن نمونه را با عوامل داخلی وخارجی را به حداقل برسانید.
برروی ظرف نمونه، اسم بیمار، تاریخ وساعت نمونه برداری و شماره آن را بنویسید.
نمونه باید به اندازه کافی باشد، مقادیر ناکافی نمونه باعث جواب منفی کاذب می گردد.
درخواست کشت وبررسی باید مشخص گردد.درغیراینصورت آزمایشگاه تنها نمونه را ازنظر سالمونلا، شیگلا بررسی می کند
نمونه را دریک ظرف درب دار با درب محکم جمع آوری کنید

اسلاید 7 :

ملاحظات عمومی
نمونه مدفوع را خنک نگهدارید و آن را انکوبه نکنید.
اگر نمونه مدفوع را نمی توان درعرض یک یا دو ساعت بعد ازجمع آوری، کشت داد، آن را باید به محیط ترانسپورت (برای مثال کاری-بلر یا بافر نمکی گلیسرول) انتقال داد.
ازکاغذ توالت برای جمع آوری مدفوع استفاده نکنید. کاغذ توالت ممکن است حاوی نمکهای باریم باشد که برای بعضی پاتوژنهای مدفوعی مهارکننده رشد هستند

اسلاید 8 :

نمونه های مدفوع قابل پذیرش برای کشت
دستورالعمل کلی:
با ادرار آلوده نشده باشد.
قسمتی از مدفوع را که حاوی چرک، خون یا موکوس است برای کشت انتخاب کنید.
حدود 5 گرم مدفوع برای کشت کافی است.بعضی ظروف مدفوع دارای خطوطی هستند که مقادیر را نشان می دهد.
ارسال نمونه در2تا 3 روزجداگانه امکان جداسازی یک پاتوژن را افزایش می دهد.

اسلاید 9 :

مدفوع باید تازه باشد و1 تا 2ساعت بعد از نمونه برداری به آزمایشگاه برسد.
درمحیط نگهدارنده
بافرنمکی گلیسیروله
ترانسپورت کاری-بلر
حرارت 4 تا 6 درجه سانتیگراد به آزمایشگاه
ارسال شود.
سواب رکتال حتما" باید درمحیط ترانسپورت
ارسال شود.

اسلاید 10 :

تلقيح به محيط انتقال
در صورتي كه ناچار به تلقيح نمونه پس از 2 ساعت باشيم لازم است نمونه ها را در يخچال و يا در محيط هاي انتقالي جهت بقا بيشتر قرار دهيم . محيط انتقالي تلقيح شده نيز بايد در سرما نگهداري شود . زيرا اين شرايط براي پاتوژن هايي مانند شيگلا و كمپيلوباكتر بسيار مهم است . البته بيشتر عوامل پاتوژن به استثنا اين دو ارگانيسم قابليت زنده ماندن براي مدتي در محيط انتقالي ، دردماي محيط را دارند (حداكثر يك هفته ). هنگامي كه نمونه ها در محيط انتقالي قرار داده شده و نياز به نگهداري آنها براي مدت بيشتري مي باشد لازم است كه در يخچال يا فريزر نگهداري شوند.

اسلاید 11 :

Cary Blair محيط انتقال
براي نگهداري و انتقال سالمونلا ، شيگلا،ویبریو کلره،اشریشیاکلی و یرسینیا انتروکولیتیکا بسيار مورد استفاده قرار مي گيرد.

این محیط به میزان 5 سی سی(PH=8.4) در لوله در پيچدار با اندازه متوسط ريخته مي شود و بايد قبل از استفاده و بعد از تلقيح نمونه به آن در یخچال نگهداری شود.

اين محيط انتقالي پس از آماده سازي حداكثر12 ماه قابل استفاده است به شرطي كه، حجم آن كاهش پيدا نكرده و هيچگونه علائم آلودگي و تغيير رنگ در آن مشاهده نشود.

اسلاید 12 :

مراحل تلقيح نمونه در محيط انتقالي
حداقل 2 سوآب مدفوع يا مقعدي را به ته لوله حاوي محيط وارد كنيد.
پس از قرار دادن سوآب در لوله قسمت چوبي بيرون از لوله را بشكنيد.
در لوله را محكم ببنديد.

-نمونه ها را داخل يخچال نگهداري كنيد و اگر امكان نگهداري در يخچال وجود نداردمحيط انتقال حاوي سوآ ب را در مكاني خنك و
دور از نور جهت پايين نگه داشتن دما قرار دهيد.

اسلاید 13 :

محيطهاي كشت
محیطهای انتفال نمونه

محيطهای كشت اولیه

محیطهای شناسائی

اسلاید 14 :

نیاز به محیط مغذی، افتراقی وانتخابی
محیط روده حاوی باکتریهای هوازی–بی هوازی
- عدم رشد باکتریهای بیهوازی بعلت انکوباسیون هوازی
- وفور باکتریهای هوازی گرم منفی ومثبت
- تعداد کم عوامل پاتوژن نسبت به فلور
نیاز به محیط مغذی، افتراقی وانتخابی است تا امکان یافتن پاتوژن را افزایش دهیم

اسلاید 15 :

محيطهاي كشت اولیه
محیط های کشت روتین برای سالمونلا وشیگلا به چهارگروه عمده تقسیم می شوند:
آبگوشت مغذی
محیط افتراقی
محیط های نسبتا" انتخابی
محیط های فوق العاده انتخابی

اسلاید 16 :

آبگوشت مغذی
استفاده ازاین محیط باعث جلوگیری از رشد فلورطبیعی درطی ساعت اولیه انکوباسیون می شود. با ساب کالچرازاین محیط شانس یافتن تعداد کم پاتوژن در
نمونه افزایش می یابد.
Gram negative (GN) Brothالف)
S Fب )
سلنیت F

اسلاید 17 :

GNآبگوشت مغذی
جداسازی شیگلا وسا لمونلا با کشت دراین آبگوشت بیش ازوقتی است که نمونه مدفوع بطورمستقیم برروی محیط اختصاصی کشت داده شود.
روش عمل :
تریپتوز دراین محیط بعنوان ماده مغذی عمل می کند.
سیترات و دزوکسی کولات بعنوان ماده انتخابی عمل کرده ورشد باکتریهای گرم مثبت و بعضی کلی فرمها را مهار می کند.
مانیتول موجود درمحیط رشد سالمونلا وشیگلاهای متابولیزه کننده مانیتول را افزایش می دهد.
بافر فسفات ازکاهش pH واسیدی شدن آن جلوگیری می کند

اسلاید 18 :

محیط آبگوشت مغذی
بعد از کشت نمونه درآبگوشت مغذی نمونه را از روی این محیط برروی محیط های

افتراقی یا انتخابی کشت دهید.
بعد از 4تا 6 ساعت GN.

SF broth بعد از 12 ساعت و بعد از آن هرچه سریعتر
پلیت ها را سپس در35 تا 37 درجه انکوبه کنید

اسلاید 19 :

محیط افتراقی
باعث تمایز باکتریهای لاکتوز منفی از لاکتوزمثبت می شود وجلوی رشد باکتریهای گرم مثبت رانیز می گیرد.
الف) مک کانکی آگار
EMBب)
لاکتوز منفی
لاکتوزمثبت
مک کانکی آگار
EMB

اسلاید 20 :

محیط های فوق العاده انتخابی
این محیطها بطور روتین استفاده نمی شود.
گران قیمت هستند.
درموارد بررسی Outbreak توصیه می شود.
برای سالمونلا مناسب هستند ولی برای شیگلا مناسب نیستند.
الف) بریلیانت گرین
برای سالمونلا بجز سالمونلا تیفی وسالمونلا پاراتیفی
ب) بیسموت سولفیت
برای سالمونلا مخصوصا" تیفی