پاورپوینت آنتی بیوگرام

بخشی از پاورپوینت

اسلاید 1 :

به نام خدا

آنتی بیوگرام

اسلاید 2 :

موارد انجام ازمایش تعیین حساسیت ضد میکروبی
تعلق باکتری جدا شده به گونه هایی که قادربه مقاومت به عوامل ضد میکروبی هستند
مطالعات اپیدمیولوژیکی مقاومت های دارویی
ارزیابی عوامل ضد میکروبی

انجام تعیین حساسیت برای باکتری هایی که به یک دارو بسیار حساس هستند، بندرت ضرورت دارد (حساسیت استرپتوکوکوس پایوژنز نسبت به پنی سیلین که در صورت آلرژی از ماکرولید ها و اریترومایسین استفاده می شود).

اسلاید 3 :

نکاتی در مورد تعیین حساسیت ضد میکروبی
استفاده ازکلنی جدا شده از روی کشت اولیه برای تهیه کشت خالص

انجام سنجش حساسیت هر باکتری بطور جداگانه

عدم استفاده از نمونه های بالینی بطور مستقیم (مایعات استریل بدن و ادرار):
مگر در فوریت های بالینی
زمانی که رنگ آمیزی گرم وجود یک باکتری را نشان می دهد
بعنوان نتایج اولیه گزارش شده و مجددا از کلنی رشد کرده تکرار می شود.

ضرورت نداشتن انجام سنجش حساسیت، در مواردی که ماهیت عفونت مشخص نیست و نمونه همراه فلور طبیعی است و یا رشد مخلوطی از باکتری ها دارد ( نتایج گمراه کننده است).

اسلاید 4 :

محیط کشت Mueller-Hinton agar

در سری ساخت های متفاوت، تکرار پذیر است.

مهار کننده های آن بسیار کم است.

رشد اکثر باکتری های کم نیاز را تامین می کند.

براساس مطالعات نتایج بسیار خوبی داشته است.

جهت کنترل کیفی می توان از سویه های استاندارد استفاده کرد.

اسلاید 5 :

محیط کشت Mueller-Hinton agar

pH : 7.4-7.2 ( سنجش پس از جامد شدن محیط انجام شود)

ارتفاع محیط کشت در پلیت: 4 میلی متر

رطوبت: محیط باید مرطوب ولی فاقد قطرات اب روی اگار و یا درپوش باشد. ظرف پتری با درپوش نیمه باز بمدت 30-10 دقیقه در انکوباتور 35 درجه و یا هود کلاسII در دمای اتاق قرارمی گیرد.تا اب اضافی تبخیر شود.

اسلاید 6 :

محیط کشت Mueller-Hinton agar

اثرات تایمیدین- تایمین: وجود مقادیر زیاد تایمیدین- تایمین در محیط، اثر مهار کنندگی SXT را کاهش داده، باعث عدم وضوح و یا از بین رفتن هاله عدم رشد و مقاومت کاذب می شود.
استفاده از سوش استاندارد انتروکوکوس فکالیس ATCC29212 و دیسک های تری متوپریم- سولفامتوکسازول ( هاله عدم رشد ≥20 mm نشاندهنده محیط مناسب است)

تاثیر غلظت کاتیون های دو ظرفیتی: تغییر غلظت کلیسم و منیزیم نتایج آمینوگلیکوزید و تتراسیکلین بروی سودوموناس آئروژینوزا را تحت تاثیر قرار می دهد ( افزایش انها قطر هاله عدم رشد را کوچکتر و کاهش انها قطر هاله عدم رشد را بزرگتر می کند)

یون های روی (Zn) قطر هاله عدم رشد کارباپنم ها را کاهش می دهد. ( کنترل کیفی انجام شود)

اسلاید 7 :

محیط کشت Mueller-Hinton agar

روی محیط بدون افزودنی فقط بی هوازی های اختیاری و هوازی ها رشد می کنند.

برای باکتری های پرنیاز مانند نیسریا گنوره ، هموفیلوس، استرپتوکوکوس پنومونیه، استرپتوکوک های بتا همولیتیک و ویریدنس یا روی این محیط رشد نمی کنند و یا نیاز به افزودنی دارند.

اسلاید 8 :

روش های تهیه سوسپانسیون میکروبی

کدورت استاندارد برای تهیه سوسپانسیون: با سولفات باریم معادل استاندارد 0.5 مک فارلند ساخته می شود.

تهیه سوسپانسیون با استفاده از کلنی باکتری:

استفاده برای بیشتر باکتری ها
برای باکتری های پرنیاز مانند هموفیلوس، نیسریا های پاتوژن، استرپتوکوک ها وبررسی مقاومت استافیلوکوک ها به اگزاسیلین
کلنی های ایزوله 24-18 ساعته درمحیط غیرانتخابی و تلقیح برمحیط کشت مایع و یا سرم فیزیولوژی
تهیه کدورت سوسپانسیون معادل کدورت لوله 0.5 مک فارلند (1-2*108 CFU/mL)

اسلاید 9 :

روش های تهیه سوسپانسیون میکروبی

تهیه سوسپانسیون از طریق رشد باکتری در محیط مایع:

در صورت عدم وجود کشت تازه

5-3 کلنی ایزوله با شکل یکسان را از قله انها برداشته و به لوله حاوی 5-4mL محیط TSB اضافه افزوده، بمدت 6-2 ساعت در 35 درجه سانتی گراد گرمخانه گذاری شده تا غلظتی برابر و یا بیشتر از 0.5 مک فارلند ایجاد شود.
کدورت با استفاده از سرم فیزیولوژیک یا محیط مایع (معادل نیم مک فارلند) تنطیم می شود.

اسلاید 10 :

طرز تهیه لوله نیم مک فارلند

مواد و ابزار لازم:
کلرور باریوم دهیدراته، اسیدسولفوریک، مزور ، بالن ژوژه، لوله آزمایش در پیچ دار استریل

روش انجام کار:
1) 0.5 ml از کلرور باریم ( Bacl2)
0.048 mol/l ( %1.175 W/V Bacl2. 2H2O) را به 99.5 ml اسید سولفوریک
0.18 mol/l (%1V/V) اضافه کرده و با هم زدن مداوم سوسپانسیون بدست می اید.
2) چگالی صحیح کدورت استاندارد با استفاده از اندازه گیري جذب در اسپکترو فوتومتر با طول مسیرنوری 1Cm مشخص می شود. جذب در 625nm باید بین 0.0 8 تا 0.13 باشد.

اسلاید 11 :

3) سوسپانسیون سولفات باریوم باید به مقدار 4-6ml در در لوله هاي در پیچ دار هم اندازه با لوله ها ي سوسپانسیون باکتریایي ريخته شود.

4) درب این لوله ها باید محکم بسته شوند و در دماي اتاق و در تاریکي نگهداري گردند.

5) استاندارد سولفات باریوم قبل از هربار استفاده باید با دست و یا ورتکس همزده شود، تا کدورت یکنواختي ايجاد گردد.
در صورت مشاهده ذرات بزرگ ، باید استاندارد تازه اي تهیه گردد .

6) استاندارد سولفات باریوم باید به صورت ماهانه جا یگزین شود یا جذب آن اندازه گيري گردد.

اسلاید 12 :

تلقیح باکتری در ظرف پتری

در مدت 15 دقیقه بعد از تهیه سوسپانسیون باکتریایی، تلقیح انجام می شود.

بعد از فرو بردن و چند بار چرخاندن سواب درون لوله، جهت گرفتن مایع اضافی، سواب بالاتر ازسطح مایع به دیواره لوله فشرده میشود.

سوسپانسیون بوسیله سواب بر سطح مولر هینتون اگاربطور یکنواخت پخش می شود. ( 3 بارتکرار و هر بار به میزان 60 درجه چرخش پتری و یکبار هم دور لبه خارجی پتری ضروری است)

قبل از دیسک گذاری، درپوش ظرف پتری بمدت 5-3 دقیقه نیمه باز گذاشته شده تا رطوبت اضافی تبخیر شود.

برای تلقیح هرگز از کشت مایع یک شب مانده رقیق نشده و یا غیر استاندارد استفاده نمی شود.

اسلاید 13 :

دیسک گذاری روی محیط کشت تلقیح شده

با پنس و یا دستگاه دیسک گذاری
فاصله دیسک ها از مرکز یک دیسک تا مرکز دیسک دیگر ≥24mm
فاصله از لبه ظرف پتری ≥15 mm
تعداد قابل قبول دیسک برای ظرف 100 mm تعداد 5 دیسک و برای ظرف بزرگتر 12 عدد دیسک
جهت جلوگیری از همپوشانی هاله ها، دیسک های دارای قطر هاله عدم رشد کوچکتر ( جنتامایسین و ونکومایسین) در کنار دیسک های دارای قطر هاله عدم رشد بزرگتر ( سفالوسپورین ها) قرار داده شود.
بعد از قرار دادن در سطح اگار، دیسک جابجا نمی شود( بدلیل انتشار سریع برخی انتی بیوتیک ها در اگار) و لازمست دیسک جدیدی در محل دیگر قرار داده شود.

اسلاید 14 :

دیسک گذاری روی مجیط کشت تلقیح شده
پس از برگرداندن ظرف بروی درپوش، در مدت حداکثر 15 دقیقه در دمای 35 درجه سانتی گراد گرمخانه گذاری می شود.

ظرف پتری در انکوباتور CO2 قرار داده نمیشود. قطر هاله عدم رشد برخی دارو ها را تغییر می دهد. ( بجز برای هموفیلوس، نیسریا مننژیتیدیس و استرپتوکوک ها)

اسلاید 15 :

خواندن و تفسیرنتایج
بعد از 18-16 ساعت انکوباسیون، قطر هاله عدم رشد باکتری اندازه گیری میشود.

ظهور کلنی ها بطور منفرد، نشاندهنده رقیق بودن سوسپانسیون باکتریایی و نیاز به تکرار ازمایش است.

قطر هاله عدم رشد با کولیس و خط کشت از پشت ظرف پتری و در حضور نور انعکاسی در حالی که کمی بالاتر از یک سطح سیاه مات قرار دارد، می توان اندازه گیری کرد.

اسلاید 16 :

انتروباکتریاسه

اسلاید 18 :

انتروباکتریاسه

سنجش حساسیت به فلوروکینولون ها در حال بررسی می باشد
تازمانی که ازمایشگاهها کرایتر های فلوروکینولون ها را استفاده نکرده اند

اسلاید 19 :

پسودوموناس آئروژینوزا

اسلاید 20 :

استافیلوکوکوس اورئوس