بخشی از پاورپوینت
اسلاید 1 :
دستورالعمل نگهداري و استفاده از سو ش هاي ميكروبي ذخيره به روش طولاني مدت و كوتاه مدت
اسلاید 2 :
هدف :
نگهداري و استفاده از كشت هاي ذخيره به روش طولاني مدت و كوتاه مدت به شیوه ای همگون در بخش ميكروب شناسي آزمايشگاه
نگهداري كشت هاي ذخيره كه براي اهداف كنترل كيفي استفاده مي شوند، بايد به روشي استاندارد شود كه احتمال آلوده شدن يا تغييرات خصوصيات كشت به حداقل برسد.
اسلاید 3 :
روش انجام آزمايش: نگهداري طولاني مدت :
الف ـ استفاده از گليسرول در فريزر c° 20- يا ديپ فريز (c° 70- يا پايين تر )
- تعدادي كلني برداشته و در ml 100– 50 از يك محيط محافظت كننده از سرما (Cryoprotective) سوسپانسيون نماييد. محيط محافظت كننده ممكن است خون گوسفند يا خرگوش دفيبرينه، Skim milk يا TSB حاوي گليسرول در غلظت نهايي 15 – 10 % باشد.
- حجم كمي (ml 1- 5/0 ) از سوسپانسيون باكتريايي را در ويال هاي شيشه اي يا پلاستيكي كوچك توزيع كنيد. تعداد كافي ويال ذخيره كشت به مدت يك سال آماده نماييد.
- هنگام نياز، يك ويال از فريزر يا تانك نيتروژن مايع در آورده و سريع محتويات آن را زير آب جاري ولرم ذوب نماييد. سوسپانسيون استفاده شده بايد دور انداخته شود، هرگز براي استفاده بعدي آنها را دوباره فريز نكنيد.
- تا 3 كشت مجدد پشت سرهم از كشت ذخيره فريز شده مي توان انجام داد. بعد از انجام حداكثر 3 كشت مجدد پشت سرهم، آن را با يك كشت ذخيره فريز شده ديگر جايگزين كنيد. كشتهاي مجدد پشت سرهم به تعداد بيشتر، ريسك تغييرات فنوتيپي باكتري را افزايش مي دهد.
اسلاید 4 :
ب ) استفاده از روغن معدني در حرارت اتاق :
- محيط كشت برين هارت اينفيوژن آگار را با شيب كم در لوله تهيه نماييد. براي باكتري هاي مشكل پسند، به محيط، خون تازه يا خون حرارت داده شده، اضافه نماييد.
- سپس روغن معدني (يا پارافين مايع ) را در اتوکلاو استريل نماييد.
- از ميكروب مورد نظر روي سطح محيط، كشت دهيد.
- بعد از بدست آوردن رشد كافي روغن استريل را به مقدار cc1 روي سطح محيط بريزيد.
- در صورت انجام كشت مجدد، نمونه از قسمت زيرين روغن برداشته مي شود.
-بعد از 12 – 6 ماه كشت مجدد تهيه نماييد.
اسلاید 5 :
نگهداري كوتاه مدت : كشت هايی كه براي كارهاي روتين روزانه استفاده مي شوند به روش هاي زير نگهداري مي شوند
الف ـ براي باكتري هاي با رشد سريع :
- سوش مورد نظر را در سطح محيط TSA لوله اي درپيچ دار كشت دهيد.
- لوله را به مدت 24 ساعت در اتوو ºc35 انكوبه كنيد.
- پس از رشد كامل، لوله را در يخچال نگهداري نماييد.
- هر 2 هفته يك بار مجددا کشت دهيد.
اسلاید 6 :
ب ـ استرپتوكك ها :
- سوش مورد نظر را در سطح محيط بلاد آگار لوله اي درپيچ دار كشت دهيد.
- لوله را به مدت 24 ساعت در ºc35 انكوبه كنيد.
- پس از رشد لوله را در يخچال نگهداري كنيد.
- هر 2 هفته يك بار مجددا کشت دهيد.
اسلاید 7 :
ج ـ مننگوكوک، هموفيلوس
- سوش مورد نظر را در سطح محيط شكلات آگار لوله اي يا پليتي كشت دهيد.
- لوله يا پليت را به مدت 24 ساعت در ºc35 انكوبه كنيد و بعد از رشد در حرارت اتاق نگهداري كنيد.
- هر 2 هفته يك بار مجددا کشت دهيد.
اسلاید 8 :
د ـ گنوكوک :
- سوش مورد نظر را روي شكلات آگار كشت دهيد.
- به مدت 24 ساعت در ºc35 انكوبه كنيد.
- نمونه کشت داده شده را پس از اين مدت نيز ، در اين درجه حرارت (ºc35) نگهداري نماييد.
- هر 2 روز يك بار تجديدكشت كنيد.
