بخشی از مقاله
چکیده:
قارچ اندوفیت پریفورموسپورا ایندیکا جذب مواد غذایی را در گیاهان افزایش می دهد، اجازه بقاء گیاهان تحت تنش هاي خشکی، دماي بالا و پایین و شوري می دهد، مقاومت سیستمی به سموم، یون هاي فلزي سنگین و موجودات بیماریزا اعطا می کند و همچنین رشد و تولید بذر تحریک می کند و سبب افزایش متابولیت هاي ثانویه گیاهان دارویی می شود.
مطالعات کمی براي کشت قارچ هاي همزیست وجود دارد. توسعه ي روش هایی که قادر به کشت انبوه قارچ هاي همزیست باشد می تواند براي مطالعات عملی مناسب باشد. هدف این تحقیق تهیه محیط کشت ساده با تولید بالاتر جهت تولید زیست توده بیشتر براي این قارچ است. مقایسه منحنی رشد در دو محیط Kafer و YPG نشان داد که قارچ پریفورموسپورا ایندیکا در محیط YPG رشد بهتر و بیشتري دارد. نتایج این تحقیق می تواند براي تولید زیست توده قارچ به عنوان کود زیستی در مقیاس بزرگ بکار رود.
-1 مقدمه
پریفورموسپورا ایندیکا قارچ اندوفیت ریشه گیاهان خشکی زي از بیابان تار هند، توسط وارما و همکاران در سال 1999 جدا شد است . - VARMA et al., 1999 - در آن زمان کسی تصور نمی کرد این قارچ می تواند یکی از موجودات مدل در زمینه تحقیقات مایکوریزا باشد. برخلاف دیگر قارچ هاي اربوسکولار مایکوریزا پریفورموسپورا ایندیکا می تواند به طور مجزا رشد کند. این قارچ بازیدیومیست و متعلق به خانواده جدید سباسیناسه و راسته جدید سباسیناسه گلومرومیکوتا است.
قارچ پریفورموسپورا ایندیکا به دلیل خصوصیات مورفولوژیکی خاص قادر به بهبود رشد و تولید زیست توده در گیاهان مختلف علفی و درختی است، همچنین باعث افزایش مقاومت گیاه علیه بیماري زاهاي قارچی و مقاومت آن به تنش هاي غیر زیستی می شود. تولید متابولیت هاي ثانویه گیاهان با ارزش اقتصادي را افزایش می دهد و همچنین سبب افزایش رشد و تولید بذر بسیاري از گیاهان می شود
هیف هاي پیریفورموسپورا ایندیکا اغلب به یکدیگر چسبیده و به شکل یک ریسمان در هم تنیده ساده دیده می شوند. میسلیوم هاي جوان تر سفید و اکثرا شفاف هستند. هیف ها داراي دیواره نازکی به اندازه 0,7 تا 3,5 میلی متر هستند. دیواره هیف ها داراي ذخیره سازي خارجی پلی ساکاریدي یا پروتئینی در فاصله هاي منظم نشان هستند که به شدت با تولئن بلو رنگ می گیرند. میسلیوم ها در هنگام بلوغ کلامیدیواسپورهاي گلابی شکل اختصاصی تولید می کنندکه به خاطر شکل گلابی خود متمایز هستند. میانگین ضخامت اسپور ها و دیواره هیفی به ترتیب 0,7و0,3 میکرومتر است
پریفورموسپورا ایندیکا یک سیستم مدلی مناسب براي دانستن اساس مولکولی برهمکنش گیاه و میکروب ایجاد کرده است. کاربرد هاي آن در کشاورزي به عنوان کود زیستی و عامل کنترل زیستی با تلقیح ساده مایع قارچ با استفاده از کشت مایع میسر است . - A. VARMA and B. Hock, 2012 - قارچ پریفورموسپورا ایندیکا می تواند بر محیط هاي پیچیده و سنتزي مختلف رشد کند. با توجه به اهمیت قارچ پریفورموسپورا ایندیکا هدف این تحقیق بررسی و انتخاب یک محیط ساده، مناسب و ارزان قیمت براي کشت و تولید زیست توده این قارچ است.
-2 مواد و روش ها
1-2 محیط هاي کشت و سویه قارچ
کشت اولیه قارچ پریفورموسپورا ایندیکا در پلیت حاوي محیط Kafer با %15 آگار انجام شد که ترکیبات این محیط کشت در جداول 1 و 2 نشان داده شده است . - Terry W. Hill and Kafer, 2001 - پس از کشت در دماي 29 درجه به مدت 10 روز قرار داده شد سپس جهت آماده سازي ماده تلقیح در دماي 4 درجه نگهداري شد. جهت انتقال ماده تلقیح به محیط کشت ار محیط جامد به کمک پیپت پاستور استریل 5 میلیمتر از قارچ کشت داده شده به همراه محیط جامد جدا شد.
جهت مقایسه منحنی رشد و تولید زیست توده از ارلن 50 میلی لیتر حاوي 10 میلی لیتر محیط کشت براي هر کدام از دو محیط Kafer و YPG - جدول - 3 استفاده شد که به روش ذکر شده تلقیح گردیدند. ارلن ها در انکوباتور شیکردار با دماي 29 درجه سانتیگراد و 200 دور در دقیقه قرار داده شدند، 3 ارلن در هر روز پس از تلقیح از انکوباتور برداشته شده و جهت اندازه گیري وزن خشک استفاده شدند.
جدول - 1 - مقادیر عناصر و ویتامین هاي استفاده شده دراستوك هاي محیط .Kafer
جدول - 2 - مقادیر مواد مورد نیاز براي تهیه محیط کامل .Kafer
جدول - 3 - مواد و مقادیر مورد نیاز جهت تهیه محیط .YPG
2-2 اندازگیري و بررسی رشد
رشد قارچ پریفورموسپورا ایندیکا با روش وزن خشک توده سلولی اندازه گیري شد. پس از رشد قارچ محیط کشت به وسیله کاغذ صافی واتمن شماره 4 جهت جداسازي توده سلولی از محیط کشت فیلتر شد
