پاورپوینت آنتی بیوگرام

بخشی از پاورپوینت

اسلاید 1 :

آنتی بیوگرام

اسلاید 2 :

مقدمه

از روش های مختلف آزمایشگاهی می توان برای تعیین حساسیت باکتری ها به عوامل ضد میکروبی در شرایط In vitro استفاده کرد.

در بسیاری از آزمایشگاهها برای سنجش حساسیت باکتری های بیماری زا از روش انتشار از دیسک روی آگار استفاده می شود.

نتایج قابل اطمینان با روش انتشار از دیسک فقط زمانی به دست می آید که با استفاده از اصول روش استاندارد انجام شود.

اسلاید 3 :

انتخاب عوامل ضد میکروبی برای آزمایش روزمره و گزارش دهی

انتخاب مناسب ترین عوامل ضدمیکروبی برای تعیین حساسیت و گزارش آن با مشورت بین آزمایشگاه بالینی، متخصص عفونی، داروخانه و کادر پزشکی در کمیته های کنترل عفونت - درمان و دارویی در بیمارستان صورت می گیرد.

عوامل مؤثر در تعیین داروهای ضدمیکروبی برای باکتری خاص و گزارش آن عبارتند از:

تأیید بالینی، شیوع مقاومت، کاهش بروز مقاومت، هزینه، موارد مصرف بالینی، داشتن تأيیدیه از مراجع ذیصلاح و توصیه های گروه بندی انتخاب دارو (گروه .. ,C ,B ,A.). آزمايش داروهای انتخاب شده می تواند برای اهداف کنترل عفونت نیز مفید باشد.

اسلاید 4 :

مواد مورد نياز برای آزمايش تعيين حساسيت ميکروبی

مولر هینتون آگار
دیسک های ضد میکروبی

اسلاید 5 :

مولر هینتون آگار PH

محيط مولر هينتون آگار بهتر است پس از تهيه در هر نوبت ساخت از نظرPH کنترل شود. PH محيط آگار پس از ژله ای شدن در حرارت اتاق، بايد در حد 7.4-7.2 باشد.

قطر محیط کشت باید 4 میلیمتر باشد.

اسلاید 6 :

مولر هینتون آگار (رطوبت)

در صورت خيس بودن سطح آگار در زمان مصرف، ظرف پتري را به مدت 30- 10 دقيقه در انکوباتورc °35 و يا با درپوش نيمه باز، زير هود كلاس IIدر حرارت اتاق قرار دهيد تا رطوبت اضافی آن تبخير گردد. براي تلقيح باکتری، سطح محيط كشت بايد مرطوب، ولی فاقد قطرات آب بر روی آگار يا درپوش ظرف پتري باشد.

اسلاید 7 :

مولر هینتون آگار (اثرات تايميدين يا تايمين)

وجود مقادير بالای تايمين و تايميدين در محيط مولر هينتون آگار مي تواند اثرات مهار کنندگی سولفوناميدها و تري متوپريم را معکوس نموده، منجر به کاهش، عدم وضوح يا از بين رفتن هاله عدم رشد و گزارش مقاومت به صورت کاذب گردد.

برای ارزيابی کيفيت هر بسته از محيط مولر هينتون آگار بايد از انتروکوكوس فکاليس 29212 ATCC و ياATCC 33186 و ديسک های کوتریموکسازول استفاده نمود. هاله عدم رشد mm 20≤ با حاشيه واضح، نشانگر کيفيت مناسب محيط است. قطر هاله عدم رشد mm20>، عدم وجود هاله و يا رشد کلنی ها در داخل هاله عدم رشد، بر کيفيت نامناسب محيط مورد نظر دلالت دارد.

اسلاید 8 :

بررسی کاتیونهای محیط کشت

کشت P.aeroginosa برروی محیط مولر هینتون آگار
Gentamicin=17-23
Amikacin= 18-26

اسلاید 9 :

آزمايش سويه هايي كه به خوبي رشد نمي كنند

محيط مولر هينتون آگار جهت انجام آزمايش بر روی گونه های هوازی (مطلق يا اختياری) با رشد مناسب بر روی اين محيط به کار مي رود. برخی از باکتري ها بدون مواد افزودنی محرک رشد بر روی محيط مولر هينتون آگار رشد کافی ندارند. اين باکتري ها براي رشد نياز به مواد افزودنی و يا محيط های متفاوتي دارند و بايد بر روي محيط هاي ذیل آزمايش شوند.

اسلاید 10 :

آزمايش سويه هايي كه به خوبي رشد نمي كنند

استرپتوکوک پنومونیه، بتا همولیتیک، ویریدنس
مولر هينتون آگار (MHA) با 5% خون گوسفند
گونه هموفيلوس
Haemophilus Test Medium (HTM)
نيسريا گونوره و مننژيتيديس
GC Agar Base + 1% مكمل رشد تعريف شده

اسلاید 11 :

ديسك هاي ضدميكروبي (ذخيره سازي )

جهت نگهداری ديسک ها توجه به شرايط زير ضروری است:
ديسک ها را تا زمان انقضاء بايد در يخچال (دمای 8 درجه سانتی گراد يا کمتر) يا در فريزر (14- درجه سانتی گراد يا کمتر) نگهداری کنيد.
ديسک ها نبايد در فريزرهايي با قابليت ذوب يخ خود به خودی، نگهداری گردند.

اسلاید 12 :

3) بسته های باز نشده ديسک های كلاس بتالاکتام بايد در فريزر نگهداری شوند و به مقدار كم و مصرف حداكثر يک هفته، از فريزر درآورده شوند و در يخچال نگهداری گردند.

4) بعضی آنتی بيوتيک های حساس (مانند ايمی پنم، سفاکلر (Cefaclor) و ترکيبات حاوی کلاولانيک اسيد) در صورت نگهداری در فريزر تا زمان مصرف، از پايداری بيشتری برخوردار خواهند بود.

اسلاید 13 :

بسته هاي باز نشده حاوی ديسک را 2-1 ساعت قبل از مصرف، از يخچال يا فريزر خارج كنيد تا به دمای اتاق برسد. اين کار تماس هوای گرم با ديسک يخ زده و متعاقبا" تغليظ دارو در سطح ديسک را به حداقل مي رساند.
ديسک ها توسط توليد کنندگان، در بسته هايي غير قابل نفوذ به رطوبت ارائه مي گردند. لازم است از باز کردن بسته های حاوی ديسک، به ميزان بيش از مقدار مورد نياز خودداری گردد.
در صورت باز کردن، بايد ديسک ها را در لوله های درپيچ دار محتوی ماده جاذب رطوبت نگهداری كرد.

اسلاید 14 :

در صورت استفاده از دستگاه توزيع كننده ديسك، بايد آن را با يك درپوش محكم، بست و از ماده جاذب رطوبت به مقدار كافي استفاده نمود.

بايد اجازه داده شود دستگاه توزيع كننده ديسك قبل از باز شدن، به دماي اتاق برسد. در صورت تغيير رنگ معرف، ماده جاذب رطوبت را تعويض نماييد و بدين وسيله از رطوبت اضافي جلوگيري كنيد.

اسلاید 15 :

دستورالعمل تهيه كدورت استاندارد نيم مك فارلند

1)0/5 میلی لیتراز کلرور باريم (BaCl2) mol/l 0/048 (2H2O .W/VBaCl2 1/175%) را به ml5/ 99 اسيد سولفوريکmol/l 0/18(V/V 1%) اضافه کنيد و با هم زدن مداوم سوسپانسيون بدست آوريد.

2) چگالي صحيح کدورت استاندارد با استفاده از اندازه گيري جذب در اسپکترو فتومتر با طول مسیر نوري cm1، مشخص شود. جذب در nm625 بايد بين 0/08تا 0/13 باشد.

3)سوسپانسيون سولفات باريم بايد به مقدار ml6-4 در لوله هاي در پيچ دار هم اندازه با لوله هاي سوسپانسيون باکتريايي ريخته شود.

اسلاید 16 :

4) درب اين لوله ها بايد محکم بسته شوند و در دماي اتاق و در تاريکي نگهداري گردند.

5) استاندارد سولفات باريم قبل از هر بار استفاده بايد به شدت (ترجيحا با ورتکس مکانيکی) همزده شود، تا کدورت يکنواختي ايجادگردد. در صورت مشاهده ذرات بزرگ، بايد استاندارد تازه اي تهيه گردد.

6) استاندارد سولفات باريم بايد به صورت ماهانه جايگزين شود يا جذب آن اندازه گيري گردد.

اسلاید 17 :

تهیه سوسپانسیون میکروبی

تهیه سوسپانسیون با استفاده از کلنی مستقیم:

این روش، آسان ترین شیوه تهیه سوسپانسیون میکروبی است و می تواند برای بیشتر باکتری ها قابل استفاده باشد. این شیوه، روش توصیه شده برای آزمایش باکتری های پر نیاز و نیز برای بررسی استافیلوکوک ها از نظر مقاومت بالقوه به متی سیلین و اگزاسیلین است.

مایه میکروبی را به طور مستقیم در سرم فیزیولوژی استریل، با استفاده از کلنی های ایزوله 24-18 ساعته از روی محیط آگار، تهیه کنید (باید از محیط غیر انتخابی نظیر آگار خون دار استفاده شود).
کدورت سوسپانسیون را معادل کدورت استاندارد 0/5 مک فارلند تنظیم نمایید.

اسلاید 18 :

تهیه سوسپانسیون از طریق رشد باکتری ها در محیط مایع:

این روش، جایگزین روش مستقیم است که بهتر است در موارد ذیل از آن استفاده گردد:
در مواردی که در روش تهیه سوسپانسیون مستقیم از کلنی باکتری، به کلنی های تازه (24 ساعته) نیاز است، باید توجه داشت که فقط برای باکتری های کم نیاز (به استثنای استافیلوکوک ها) کاربرد دارد.
باکتری هایی که تهیه سوسپانسیون یکنواخت از آنها مشکل است.

اسلاید 19 :

تهیه سوسپانسیون از طریق رشد باکتری ها در محیط مایع:

3 تا 5 کلنی کاملا ایزوله و با شکل یکسان را انتخاب کنید. به کمک لوپ یا سوآب از قله آنها برداشت نمایید و به لوله حاوی 5-4 میلی لیتر محیط مایع مانند TSB اضافه کنید.

محیط مایع تلقیح شده را در انکوباتور 35 درجه سانتی گراد نگهداری کنید تا به غلظتی برابر یا بیشتر از 0/5 مک فارلند برسد (معمولا 6-2 ساعت)

کدورت محیط مایع حاوی باکتری های در حال تکثیر را، با استفاده از محیط کشت مایع یا سرم فیزیولوژی استریل، معادل کدورت استاندارد 0/5 مک فارلند تنظیم کنید.