بخشی از پاورپوینت
اسلاید 2 :
غربالگری اولیه عفونت HTLV
اسلاید 3 :
اهداف تشخيصي
براي مشخص نمودن عفونت در فرد بيماري كه علائم منطبق با عفونت HTLV- 1 دارد.
پيگيري عفونت درافرادي كه در معرض ابتلا به عفونت قرار دارند.
آزمايش داوطلبان اهدا خون به منظور جلوگيري از انتقال از طريق انتقال خون
اسلاید 4 :
متداول ترين روش براي غربالگري عفونت، شناسايي آنتي باديها در سرم يا پلاسما مي باشد
اسلاید 5 :
شناسايي آنتي بادي ها
چنين روشهايي تنها قادرند كه در معرض قرار گرفتن به ويروس را در گذشته شناسايي نمايند
اسلاید 6 :
روش هاي شناسايي آنتي باديهاي ويروسي
آنتي بادي بر علیه شاخص هاي آنتي ژني (پروتئين هاي ویروس)، به روش هاي متعددي سنجش می گردد:
غربالگری
EIA
PA
IFA
اسلاید 7 :
آنزيم ايمونواسي
آزمايشي ساده و حساس مي باشد.
در اين روش ليز شده خالص شده سلول هاي آلوده (آنتی ژن) بكار برده مي شود تا بتوان آنتي باديهاي برعليه پروتئين هاي ويروس را مورد سنجش قرار داد.
اسلاید 8 :
آنزيم ايمونواسي
تست الایزا به شكل اتوماتيك در مقياس بسيار بالا مي تواند به عنوان روشي انتخابي براي آزمايش اهدا كنندگان خون مورد استفاده قرار گيرد.
اسلاید 9 :
آنزيم ايمونواسي
چنانچه نتيجه تست در مرحله اول مثبت باشد آزمايش بايد تكرار شود.
تمام نمونه هايي كه براي بار دوم مثبت گرديده اند بايد با روش هاي ديگر مانند وسترن بلات، ايمنوفلورسانس و يا راديوايمنوپرسپيتاسيون تاييد گردند.
اسلاید 10 :
آنزيم ايمونواسي
حساسيت و اختصاصي بودن تست هاي غربالگري تجارتي بستگي به منبع آنتي ژن مورد استفاده و اساس روش دارد.
آزمايش هاي غربالگري كه براساس ليزات سلولي طراحي شده اند، قادر به افتراق عفونت با ویروس HTLV-II و HTLV-I نمي باشند زيرا شباهت هاي زيادي بين پروتئين هاي ساختماني اين دو ويروس وجود دارد.
اسلاید 11 :
آنزيم ايمونواسي
چنانچه آزمايش با تست هاي ديگري تائيد نشود، نتايج اليزا به عنوان واكنش هاي مثبت كاذب تلقي مي گردند.
نتايج مثبت كاذب ممكن است با هريك از روش هاي غربالگري HTLV-I/II روي دهد.
اسلاید 12 :
آنزيم ايمونواسي
مواردي كه منجر به واكنش هاي مثبت كاذب مي گردد شامل:
اتصال غيراختصاصي ايمونوگلوبولين به فاز جامد است كه در نتيجه گرم و فريزكردن مكرر نمونه ها روي مي دهد.
از آنجائيكه آنتي ژن ویروس HTLV-I/IIكه براي آزمايش اليزا به عنوان آنتي ژن بكار مي روند ممكن است حاوي آنتي ژنهاي HLA سل لاين سلولي باشد كه براي تكثير ويروس بكار برده شده است. بنابراين تعدادي از واكنش هاي مثبت كاذب ممكن است بعلت واكنش متقاطع با آنتي باديهاي ضد HLA باشد.
واكنش مثبت كاذب در پروتئين نوتركيب ممكن است به علت پاسخ آنتي بادي به آنتي ژنهاي باكتري باشد.
اسلاید 13 :
آنزيم ايمونواسي
چنين نمونه هاي مثبت كاذب موجب افزايش هزينه هاي تست هاي تاييدي مي گردند
اگرچه فرمت آزمايش اليزا آسان مي باشد ولي ارزش پيشگويي پايين نتايج تست مثبت درجمعيت هاي با خطر پايين منجر به محدوديت آن به عنوان يك روش آزمايش تك مرحله اي مي گردد.
حتي در جمعيت هاي با شيوع بالا ارزش پيشگويي مثبت اليزاي تجارتي در حدود 70 تا 90 درصد مي باشد و در جمعيت هاي با شيوع پايين ممكن است بسیار كمتر باشد.
اسلاید 14 :
روش اگلوتيناسيون ذره اي
روش اگلوتيناسيون ذره اي از ذرات كد شده ليزات ويروسي استفاده مي نمايد.
روش اگلوتيناسيون بسيار حساس مي باشد ولي ويژگي آن بايد توسط سلول هاي كنترل مشخص گردد.
روش اگلوتيناسيون ذره اي به سادگي قابل انجام بوده و با ديدن قابل تفسير مي باشد.
اين روش ابتدا در ژاپن ابداع گرديد وبه عنوان تست غربالگري مورد استفاده قرار گرفت.
اسلاید 15 :
روش ايمنوفلورسانس
در اين روش آنتي باديهاي ضدويروسي از طريق انكوباسيون سرم با سلول هاي آلوده به ويروس كه در سطح اسلايد شيشه اي فيكس گرديده اند، عمل شناسايي را انجام مي دهند.
آنتي بادي هاي اختصاصي ضد ويروس به آنتي ژنهايي كه در سطح سلول هاي آلوده وجود دارد متصل شده و توسط ايمنوگلوبولين ضد انساني كه با فلورسئين كونژوگه شده اند قابل شناسايي مي گردند.
اسلاید 16 :
روش ايمنوفلورسانس
اگرچه ايمنوفلورسانس تست سرولوژيكي مفيدي براي شناسايي و يا تائيد حضور آنتي باديهاي ضد ویروس می باشد ولي نتايج مثبت كاذب آن بالا است.
اين روش بطور گسترده اي مورد استفاده قرار نمي گيرد زيرا بطور مداوم نياز به سل لاين هاي آلوده ويروس مي باشد.
اسلاید 17 :
شناسايي مستقيم ويروس در مايعات بدن با شناسايي آنتي ژنها و اسيدهاي نوكلئيك ويروسي با استفاده از روش هاي تشخيص مولكولي صورت مي گيرد
اسلاید 18 :
روش هاي تشخيص اسيد نوكلئيك ويروسي
بدنبال عفونت، ژنوم هاي HTLV-II و HTLV-I درDNA سلول ادغام گرديده و پرويروس ناميده مي شوند. چندين تكنيك شامل هيبريديزاسيون ساترن بلات و PCR براي شناسايي پروويروس در سلول هاي آلوده بكار گرفته شده اند.
in situ hybridization به اندازه هاي كافي حساس نيست تا بتواند تعداد كمي از كپي ويروس را شناسايي نمايد.
