بخشی از مقاله
چکیده
مقدمه: تب برفکی یکی بیماری حاد ویروسی در حیوانات زوج سم میباشد. هدف این تحقیق بررسی اثر نانوذرات اکسیدآهن بعنوان یاور واکسن بیماری تب برفکی در بهبود پاسخ ایمنی میباشد.
روش کار: پس از تکثیر و تعیین تیتر ویروس، غیرفعالسازی به روش پرتوتابی گاما انجام، با نانوذرات اکسیدآهن کنژوگه و به عنوان واکسن به خوکچه هندی تزریق شد.
نتایج نشان داد نانوذرات اکسیدآهن به عنوان یاور در واکسن تب برفکی پرتوتابی شده باعث تقویت تکثیر لنفوسیتهای طحال میشوند.
نتیجه گیری: نانو ذرات اکسیدآهن یاور مناسب همراه واکسن ویروسی تب برفکی، پاسخ های ایمنی مناسب را تقویت مینمایند.
.1 مقدمه و هدف
بیماری تب برفکی یک بیماری حادّ ویروسی است. اولین بار این بیماری در گاو نر بدونهیچ علّت مشخصی دیده شد و گلهداران با این عفونت معیّن و دیدن کورکهای کوچک و ریزی در دهان حیوان، از آن مطلع شدند، کمکم کورکها در کتف و سپس به پائین پا منتشر شد.
این بیماری کاملاً مسری است و بین حیوانات زوج سم رواج دارد .[5] علائم بیماری شامل، تب و ضعف عمومی، ظهور بثورات وزیکولار - تاولی - درون و اطراف دهان، کاهش وزن، کاهش تولید، سقط جنین و مرگ و میر دامهای جوان به دلیل گسترش و انتشار سریع بیماری میباشد. تاکنون 7 سروتیپ و 85 تحت تیپ به عنوان عوامل این بیماری شناخته شدهاند که شامل: Asia1، A، O، C، SAT1، SAT2 and SAT3 میباشد. واکسنی که امروزه برای تب برفکی مورد استفاده قرار میگیرد، یک واکسن کشته شده و غیرفعال است که با یاورهای مناسب فرموله شده است.
این واکسن به دلایلی مانند نیمه عمر کوتاه، نیاز به زنجیر سرد و احتمال باقیماندههای توکسیک و آلرژیک در واکسن، به تنهایی نمیتواند در کنترل بیماری مؤثر باشد .[5] لذا به دنبال تحقیقات معتمدی و همکاران که منجر به تولید رادیو واکسن به روش پرتو تابی گاما شد و با توجه به خواص نانو ذرات بعنوان یک سیستم توزیع مناسب آنتی ژن، لذا هدف از این تحقیق بررسی اثر نانوذرات اکسید آهن کربوکسیل دار شده بعنوان یاور همراه با واکسن پرتوتابی شده بیماری تب برفکی تایپ Opanasia در بهبود تکثیر لنفوسیت های طحال می باشد.
.2 تئوری و پیشینه تحقیق
نانوذرات در ترکیب، اندازه، شکل و خواص سطحی متفاوت هستند و به دلیل شباهت اندازه شان به اجزاء سلول میتوانند به سلولهای زنده بوسیله اندوسیتوز - پینوسیتوز - وارد شوند.[13] یکی از کاربردهای فناوری نانو در پزشکی برای تحویل دارو و واکسن به منظور درمان و پیشگیری انواع بیماری ها می باشد.
الدین وهمکاران - 2010 - ، به منظور افزایش تحویل واکسن نوترکیب مالاریا - پلاسمودیوم یوئلی - * از نانو ذرات اکسید آهن پوشش داده شده با پلیمر پلی اتیلن ایمین به عنوان یاور زیستی استفاده کردند.[4] پاسیک و همکاران - - 2013، از نانوذرات اکسید آهن کربوکسیل دار شده به عنوان یاور زیستی برای تحویل واکسن مالاریا نوترکیب انسانی استفاده کردند.[10] حسن زاده و همکاران - 1394 - ، نانو ذرات مغناطیسی اکسید اهن را با پوشش نشاسته بوسیله روش همرسوبی در محل سنتز نمودند
لمباردو و اسمولکو - 1990 - بر روی تولید رادیو واکسن و مواد بیولوژیکی با استفاده از پرتو گاما ساطع شده از چشمه کبالت 60 مطالعه نمودند. آنها توانستند با استفاده از پرتو الکترومگنتیک واکسن غیر فعال بیماری تب برفکی با کیفیت آنتی ژنیک خوب و هزینه پایین تولید نمایند
اسمولکو و لمباردو - 2005 - نیز پرتو تابی گاما را برای غیر فعال سازی کامل ویروس های تب برفکی و هرپس سیمپلکس ویروس استفاده نمودند. نتیجه خوب این تحقیق کاربرد پرتوهای یونساز برای غیر فعال سازی ویروس تب برفکی که به طور موفقیت آمیزی منجر به غیر فعال شدن آنتی ژن این ویروس به صورت واکسن ضد بیماری تب برفکی شد .[12] معتمدی - - 1385 در ایران با غیر فعال سازی ویروس عامل بیماری تب برفکی تایپ O در دام ها به وسیله پرتو گاما به منظور تهیه واکسن کشته شده اقدام نمودند و پس از بررسی پاسخ های ایمنی در خوکچه های هندی نتیجه مطلوبی بدست آوردند
.3 مواد و روش ها
تهیه ویروس و غیرفعال سازی آن
ابتدا ویروس تب برفکی تایپ Opanasia از بخش تب برفکی موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی تهیه و مراحل پژوهش در پژوهشگاه علوم و فنون هستهای انجام شد. پس از تکثیر ویروس در رده سلولی پایدار BHK-21 به روش پرتوتابی گاما در دز 45 کیلوگری با استفاده از دستگاه گاما سل تحقیقاتی - مدل MDS-Nordian ساخت کشور کانادا - پرتوتابی شده و غیرفعالسازی ویروس با استفاده از آزمون بی ضرری در رده سلولی BHK-21 در چهار پاساژ کور متوالی تائید شد.
آماده سازی نانوذرات اکسید آهن کربوکسیل دار به عنوان یاور
نانوذرات اکسید آهن از شرکت تکونان*اسپانیا با اندازه حدود 20 نانومتر خریداری شد. در این تحقیق، برای پوشش دادن سطح نانو ذرات اکسید آهن از پلیمر پلی ساکاریدی کیتوزان - سیگما آلدریچ - استفاده شد ولی ابتدا بایستی این پلیمر کربوکسیله گردد. با توجه به وجود گلیکوپروتئینهای سطحی ویروس تب برفکی و گروه های آمینی آنها که می توانند با گروه کربوکسیل پیوند یابند، لذا سطح نانوذرات با گروه کربوکسیل کیتوزان پوشش داده شد. کربوکسیل دار نمودن کیتوزان به منظور تهیه کربوکسی متیل کیتوزان - CMC - صورت گرفت و نانوذره اکسیدآهن با CMC عامل دار شده و از نانوذرات اکسید آهن کربوکسیل دار شده به عنوان یاور واکسن استفاده گردید. بررسی اتصال آهن با CMC توسط FTIR و سپس بررسی ابعاد ذرات از نظر فیزیکی توسط XRD مورد بررسی قرار گرفت.
کونژوگه نمودن ذرات اکسید آهن کربوکسیل دار با آنتی ژن پرتوتابی شده ویروس تب برفکی تایپ
Opanasia
ابتدا 100 میلی گرم از نانو ذره پوشش دار شده را با 20 میلی لیتر برات بافر مخلوط کرده، سپس با NHS و EDC به نسبت مولی 2000 به 1 در دمای اتاق و به مدت 5 دقیقه فعال گردید، بعد از آن 2 میلی لیتر از آنتی ژن ویروس تب برفکی پرتو تابی شده به آن افزوده شد. یک شب در دمای 2-8 درجه ی سیلیسیوس قرار داده شد. پس از گذشت زمان فوق 100 میکرو لیتر کوانچینگ بافر به منظور توقف واکنش به محلول اضافه و 10 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شد. بعد از آن به مدت 24 ساعت بر روی آهنربا در دمای 2-8 درجه ی سیلیسیوس قرار داده تا جداسازی ویروس کونژوگه شده با نانو ذره پوشش داده شده صورت گیرد. در مرحله بعد به رسوب حاصل 5 میلی لیتر بافر فسفات افزوده گردید. جهت بررسی کونژوگه شدن آنتی ژن ویروس با نانوذرات اکسید آهن پوشش دار شده، الکتروفورز افقی ژل آگارز % 1/5 در ولتاژ 100 ولت و به مدت 30 دقیقه انجام گرفت.
