پاورپوینت مطالعه کنترل شده تصادفی از افزایش مصرف میوه و سبزیجات و چگونگی تاثیر غلظت کاروتنوئید و فعالیت آنزیم های LCAT و PoN1 در HDL بیماران دیابتی تیپ دو

بخشی از پاورپوینت

اسلاید 1 :

بسم الله الرحمن الرحیم

اسلاید 2 :

عنوان:
مطالعه کنترل شده تصادفی از افزایش مصرف میوه و سبزیجات و چگونگی تاثیر غلظت کاروتنوئید و فعالیت آنزیم های LCAT و PoN1 در HDL بیماران دیابتی تیپ دو

اسلاید 3 :

پیش زمینه:
بیماری کاردیوواسکولار (CVD) علت اصلی مرگ و میر در جوامع غربی است که وقوعش با دیابت تیپ دو افزایش می یابد. در سال 2008 ، دیابت علت اصلی 17% از کل موارد مرگ مرتبط با CVD بوده است. برعکس HDL (لیپوپروتئین با دانسیته بالا) با کاهش ریسک CVD همراه بوده است. این لیپوپروتئین ویژگیهای آنتی آتروژنیک زیادی دارد که شامل قابلیت حمل کلسترول معکوس و آنتی اکسیدانها می باشد. علاوه بر این ، HDL برداشت گلوکز و اکسیداسیون اسیدهای چرب را علیه مقاومت انسولین تحریک میکند. با این وجود در بیماران دیابتی تیپ دو ممکن است عملکرد HDL موثر نباشد. هیپرگلیسیمی پراکسیداسیون لیپید را افزایش می دهد.

اسلاید 4 :

در حالیکه آزاد شدن مارکر التهابی SAA از سلولهای چربی نیز روی اثرات ضد التهابی و آنتی اکسیدانی HDL اثر دارد. بدین ترتیب آنزیم های اصلی مرتبط با عملکرد آنتی اکسیدانی HDL عبارتند از PON1 و ( LCAT) لسیتین کلسترول استیل ترانسفراز
آنزیم LCAT در بلوغ HDL هم نقش دارد و در اختلال عملکرد HDL ممکنه به فنوتیپ پیش آتروژنیک تبدیل شده بنابراین مداخلاتی که ریسک دیابت و CVD را کاهش میدهد مثل افزایش مصرف میوه و سبزیجات بسیار مطلوب می باشد گرچه ارتباط بین مصرف میوه و سبزیجات و شیوع دیابت تیپ دو به طور کامل مشخص شده است ولی حمایت قابل توجهی از جهت کاهش ریسک دیابت و CVD با افزایش مصرف وجود دارد.
در این نظریه ، مطالعه Villagas و همکاران، گزارش کردند که مصرف سبزیجات یک عامل حفاظتی در برابر پیشرفت دیابت تیپ دو می باشد. در حالیکه در مطالعه Panagiotakos و همکاران در جمعیت بدون دیابتی ، نشان دادند که در موارد

اسلاید 5 :

مصرف کنندگان سبزیجات بیش از 3 روز در یک هفته ، 70% ریسک CVD را کاهش می دهد. علاوه بر این ، افزایش روزانه ای یک تکه ای میوه ، 10% ریسک CVD را کاهش می دهد.
در حمایت از این نظرCooper و همکاران اخیرا نشان دادند که افزایش مصرف سبزیجات و انواع میوه ، ریسک ابتلا به دیابت را کاهش می دهد.
بنابراین از شواهد بالا مشخص میشود که افزایش مصرف میوه و سبزیجات در برابر پیشرفت و گسترش دیابت و عوارض همراه CVD محافظت کننده خواهد بود. اثر حفاظتی میوه و سبزیجات ممکن است مرتبط با محتوای غنی آنتی اکسیدان آنها باشد که با کاهش ریسک دیابت و سرکوب پاسخ التهابی مرتبط با دیابت و گسترش CVD باشد. آنتی اکسیدانتهای زیادی از میوه و سبزیجات مشتق شده اند مثل کاروتنوئید که در گردش خون توسط لیپوپروتئین (HDL) حمل میشود و لیکوپن که اثرات موثر قلبی را نشان داده است.

اسلاید 6 :

در یک مطالعه قبلی توسط گروه ما، به این نتیجه رسیدیم که بین رنج سنی متوسط ، نسبتا موارد با اضافه وزن ، دریافت لیکوپن با مکمل یا رژیم غذایی غنی از لیکوپن منجر به افزایش فعالیتهای آنتی آتروژنیک آنزیم های PON1 و LCAT با HDL میشود.
علاوه بر این یک مطالعه دیگر نشان داده که کاروتنوئیدهای سرم و میزان فعالیت PON1 سرم به دنبال دریافت رژیم غذایی شبه مدیترانه ای افزایش می یابد.
در کل این مطالعات این مطلب را پیشنهاد می دهد که آنتی اکسیدانهای موجود در میوه و سبزی ممکن است در اثربخشی و محافظت قلبی مسئول باشد.
با این وجود گرچه نوشته ها این مطلب را پیشنهاد میکند که افزایش دریافت میوه و سبزیجات در موارد دیابت تیپ دو موثر است اما هنوز مطالعه ای که رابطه ی بین افزایش دریافت میوه و سبزسجات و آنزیم های مرتبط با HDL را نشان دهد صورت نگرفته است .
بنابرین هدف اصلی این مطالعه بررسی میزان افزایش دریافت میوه و سبزیجات بود که پتانسیلی برای تقویت خواص ضد آتروژنیک این لیپو یروتئین HDLدر افراد دیابتی تیپ دو بود.

اسلاید 7 :

Methods
جمعیت مورد مطالعه : این مطالعه یک آنالیز ثانویه از نمونه خونهای جمع اوری شده از افراد دیابتی تیپ دو می باشد که پس از یک تحقیق کنترل شده تصادفی با مصرف میوه و سبزیجات صورت گرفته است. مطالعه شامل 80نفر از دیابتی های خارج از کلینیک اندوکرینولوژی و دیابتی های بیمارستان ویکتوریا رویال بود. افراد مورد مطالعه همگی چاق ، (BMI>30 ) بودند و سنین بین 40 الی 70 سال داشتند هر بیمار دیابتی با رژیم غذایی و یا درمان خوراکی دیابت تحت کنترل بود که طی مطالعه هم این روند ادامه داشت قبل از شروع این مداخله از تمام افراد تحت مطالعه خواسته شد به مدت 4 هفته روزانه یک تکه از میوه و سبزیجات را مصرف کنند یک بخش از میوه و سبزیجات توسط استانداردهای غذایی تعریف شده است که سرویس سلامت بین المللی این مقدار را 80 گرم تعریف نموده است به دنبال این افراد مورد مطالعه به دو گروه تقسیم شده اند یک گروه دریافت کننده های کم میوه و سبزیجات (1قسمتی ) و گروه دوم دریافت کننده های زیاد میوه و سبزیجات (قسمتی>6) بودند .

اسلاید 8 :

نمونه های خون ناشتا در فاز wash-out (هفته ی صفر ) و هشت هفته بعد تحقیق بدست آمد . سرم بدست آمده با سانتریفوژ ایزوله و در دمای 80- درجه تا زمان موردنیاز جهت آنالیز ذخیره شد.
شکل 1 طرح مطالعه ی این تحقیق را نشان میدهد:

اسلاید 9 :

مکمل میوه وسبزیجات مشابه یک رژیم غذایی سالم بود بنابراین هیچ خطری برای سلامتی مطرح نیست توصیه های ویژه جهت اطمینان از کالری مشابه و مصرف ریز مغذی ها در رژیم غذایی عادی داده شد. افراد میوه و سبزیجات خودشان را هر هفته از سوپرمارکت های محلی در طول 8 هفته مطالعه انتخاب میکردند آنها هم چنین از مشاوره در ذخیره سازی مناسب برای میوه و سبزیجات برای به حداقل رساندن مضرات استفاده میکردند این مطالعه توسط کمیته اخلاق دانشگاه Queens تایید شده است.

اسلاید 10 :

کرایتریای حذفی:
کریاتریای حذفی شامل رویدادهای کرونری / سربروواسکولار حاد ، جراحی 3 ماهه قبل ، زنان باردار و شیرده ،درمان خوراکی انتی کواگولانت، مصرف زیاد الکل(بیش از 2 واحد روزانه در خانم ها،بیش از 3 واحد روزانه در آقایان)
حساسیتهای غذایی که به دنبال مصرف میوه و سبزیجات به وجود می آید، مصرف خوراکی ویتامین/آنتی اکسیدان 4 هفته قبل از فاز Wash out .
ایزولاسیون HDL2 و HDL3 از سرم:
HDL2,3 از سرم تازه ای که محصول اولتراسانتریفوژ سریع است برداشت می شود.
طبق روش Mcpherson و همکاران که شامل 3 مرحله است و مدت روش کار 6 ساعت به طول می انجامد. نمونه های HDL در دمای 80- درجه ذخیره شده و این دما تا یک سال stable می باشد.

اسلاید 11 :

غلظت کاروتنوئید:
کاروتنوئیدهای محلول در چربی شامل : الفا کاروتن،بتا کاروتن،بتا کریپتو گزانتین، لوتئین و لیکوپن می باشد.

اسلاید 12 :

فعالیت LCAT:
فعالیت LCAT در سرم اندازه گیری شد ، ماده ی موجود برای سنجش ،فلورسنت HDL2و HDL3 است طبق دستور سازنده 5میکرو لیتر از سرم HDL2و HDL3 برای هر آنالیز LCAT مورد نیاز میباشد .
غلظت CRP با حساسیت بالا و SSA:
غلظت CRP با حساسیت بالای سرم با ایمونوتوربیدومتری مشخص میشود .در حالیکه SAA بوسیله ی HDL2 و HDL3 در سرم بوسیله ی الایزا که به صورت تجاری آماده است اندازه گیری شد و آنالیز به صورت خودکار بوسیله ی سیستم الایزا انجام شد .

اسلاید 13 :

آنالیز آماری :
یک محاسبه ی گذشته نگر توانمندی HDL3 لیکوپن و HDL3-pon1 نشان میدهد که زیرگروه بیست نفری از هر گروه کافی بود برای 90 درصد توانمندی از 5درصد اهمیت تفاوت های آماری بین گروه ها را نشان دهد .آنالیز های آماری بوسیله ی spss17 انجام میشوند متغیرها از جهت نرمال بودن ارزیابی میشوند .
مقایسه ی بین گروه ها بوسیله ی تی تست نمونه های غیروابسته آنالیز میشد .مقایسه های داخل گروه بوسیله ی تی تست نمونه های تصادفی انجام میشد .برای تنظیم پتانسیل ها که هم آمیخته یک آنالیز از کوواریانس ها انجام شد. ارتباط بین متغیرها با آنالیز دو متغیره آزمون در افراد ارزیابی شد.اهمیت برای همه ی آزمایش ها بصورت p<0.05 تنظیم شد .

اسلاید 14 :

نتایج :
ویژگی های زیرگروه ها
در ابتدا 98مورد از افراد در مطالعه شرکت کردند که 17 مورد قبل از مطالعه و یک نفر طی مطالعه برکنار شد . در کل 80 مورد با T2D(دیابت تیپ دو) هشت هفته از مصاحبه را کامل کردند . شش مورد CRP با حساسیت بالا را قبل و بعد از مصاحبه به میزان بالای ده داشتند که سپس برای آزمایش های بعدی مد نظر گرفته شدند.
که این رویداد با توجه به گایدلاین قلب آمریکا به عنوان CRP با حساسیت بالا(10<)به عنوان شواهدی از عفونت فعال یا یک التهاب درنظر گرفته شده اند. 74 مورد در آزمایشات نهایی در نظر گرفته شدند.همه ی ویژگی های اولیه بین گروه ها قابل مقایسه بودند. طبق مصاحبه ها ، BMI بین گروه ها متفاوت بود به طوری که BMI به دنبال 6 قسمت در مصاحبه به طور قابل توجهی افزایش یافت.

اسلاید 15 :

اگرچه اثراین تغیرات در BMI به صورت جداگانه بوسیله ی آنالیز بعدی کوواریانس ها نیز انجام شد و مشخص شد که در نتایج اثری ندارد.HbA1C نیز کاهش یافت
مصرف میوه و سبزی :
مصرف میوه و سبزی در دو رژیم 7 روزه محاسبه شد در حالیکه مصرف میوه و سبزی به صورت واضح تفاوت داشت .
رژیم دریافتی :
طبق مصاحبه ها کل انرژی دریافتی در گروه ها تفاوتی نداشت اگرچه کربوهیدرات ها و شکر واضحا در بین گروه ها تفاوت داشت.
غلظت ApoAI :
برطبق مصاحبه ApoAI بین گروه ها تفاوتی نداشت .
غلظت کاروتنوئید :
برطبق مصاحبه ها آلفا کاروتن سرم و B-cryptoxanthin و لوتئین و zeaxanthin افرایش یافت به طوری که 8 درصد در آلفاکاروتن و 25 درصد B-cryptoxanthinو25 درصد لوتئین و افرایش غیر قابل توجه در zeaxanthin داشتیم .

اسلاید 16 :

فعالیت PON1:
براساس بررسی ،فعالیت PON1 سرم در >6vs.1portion بدون تغییر بود . علی رغم اینکه فعالیت PON1 سرم در 66vs.1portion فعالیت PON1 بدون تغییر بود اما در HDL3 فعالیت PON1 به صورت قابل ملاحظه ای افرایش یافت به طوری که در >6por ،سیزده درصد و در 1-por ،4% افزایش یافت .
فعالیت LCAT:
فعالیت LCAT سرم در >6vs.1portion بدون تغییر بود . همانند PON1 فعالیت LCAT سرم در >6por ،8% افزایش یافت در HDL2 فعالیت LCAT >6vs.1portion بدون تغییر بود .در HDL3 فعالیت LCAT در >6vs.1portion افرایش یافت .

اسلاید 17 :

غلظت hsCRP و SAA:
در >6vs.1portion ،hsCRP سرم و HDL2 سرم و HDL3-SAA شبیه بودند و حتی SAA ،32% کاهش نشان داد .
ارتباط بین تغییر در دریافت میوه و سبزیجات و تغیرات سطج آنتی اکسیدانی کاروتنوئید و تغییرات در فعالیت آنزیم های مرتبط با HDL.
تغییرات در دریافت میوه و سبزیجات کاملا مرتبط با تغییر در HDL2-B-cryptoxanthin، HDL3-a-carotene،HDL3-B-cryptoxantin،HDL3lutein میباشد.که تغییرات در HDL3-B-cryptoxantinمرتبط با HDL3 pon1 میباشد.

اسلاید 18 :

بحث:
کاروتنوئید ها و تاثیر افزایش مصرف میوه و سبزیجات :
این مطالعه نشان میدهد که افرایش مصرف میوه و سبزیجات سطح کاروتنوئید سرم را افرایش میدهد و موضوع مطالعه و بررسی های قبلی در زمینه ی T2D را تاثیر میدهند ما برای اولین بار در این جمعیت T2D نشان دادیم که این افزایش منجر به افرایش همزمان در محتوی کاروتنوئید و HDL2,3 میشود که به طور مشخصی در آلفا کاروتن و B-cryptoxantinو لوتئین و لوکوپن و HDL3 وجود دارد.این لوکوپن یافته های قبلی ما را تایید میکند تا جایی که ما نشان دادیم لوکوپن کاهش دهنده ی اکسیژن در بین کاروتنوئید های طبیعی است و در HDL2,3 افزایش میابد.پس ما در این بررسی نشان دادیم افرایش کاروتنوئید ها مقادیر آنتی اکسیدان را در HDL افزایش میدهد همانگونه که در T2D که رژیم غنی از پلی فنول داشتد سطح پلاسمایی malondialdehyde که نوعی lipid peroxidation است کاهش میابد.بعلاوه بر اساس یافته های ما phyllo quinoneکه یک مولکول قابل حل میباشد و در گیاهان با برگ سبز وجود دارد ،مارکرهای مرتبط با مقاومت به انسولین و دیابت را بهبود میبخشد.

اسلاید 19 :

بعلاوه در رژیم های مدیترانه ای از لحاظ محتوی متابولیک در بیماران دیابتیک غنی میباشد و حتی میتواند عوامل مستعد کننده ی ژنتیکی را متعادل سازد پس به طور کلی افزایش آنتی اکسیدان ها در HDL به خصوص پتانسیل های آنتی اکسیدان را بهبود میبخشد .
فعالیت PON1 و LCAT و تاثیر افزایش مصرف میوه و سبزیجات :
افرایش مصرف میوه و سبزیجات بطور قابل ملاحظه ای فعالیت PON1و LCAT را بیشتر میکند که مجددا یافته های قبلی ما را در مورد رژیم های غنی از لیکوپن را تایید میکند .بنابراین به عنوان یکی از عملکردهای اصلی آنتی آتروژنیک HDL این است که لیپید های peroxidised که از لیپید های حاوی آپولیپو پروتئین بتا آزاد میشود .بوسیله ی خاصیت دهنده ی پروتون بودن PON1و گستردگی کمتر LCAT افرایش فعالیت این آنزیم ها باعث خاصیت آنتی آتروژنیک آنها میشود و در بیماران T2D این خاصیت کاهش میابد.

اسلاید 20 :

این یافته ها تایید یافته های قبلی میباشد جایی که querletin،glubridin ، PON1 را در مقابل اکسیدان های وابسته به سن محافظت میکند آب انار که غنی از کاروتنوئید ها است فعالیت آن را در مردان رافزایش میدهد پس به طور کلی افزایش آنتی اکسیدان خاصیت دهندگی پروتون را به خصوص در HDL3بهبود میبخشد و این حالت خاصیت آنتی آتروژنیک HDL را در T2D افزایش میدهد.
در مورد LCAT هم همانند PON1 بسیار مرتبط با HDL3 میباشد و خاصیت آنتی اکسیدانی آن مرتبط با خاصیت دهندگی پروتون میباشد.ما نشان دادیم که افزایش مصرف میوه و سبزیجات فعالیت سرمی LCAT را به خصوص در HDL3 در بیماران T2D افزایش میدهد این افزایش فعالیت ممکن است مرتبط با افزایش خاصیت دهندگی پروتون که با افزایش دریافت آنتی اکسیدانهای میوه و سبزیجات حاصل می شود می باشد.