بخشی از مقاله
چکیده
نانوذرات پروتئیﲏ آه امروزه جهت انتقال دارو استفاده می شوند اندازه متفاوتی از50 nm تا 300 رادارامی باشند. دراین ﲢقیق نانوذرات ژلاتیﲏ نوع A باروش دومرحله اي ناﳏلول آردن به عنوان سیستم هاي رهایش دارویی ساخته شدند. با توجه به جذب بالاترنانو ذرات آوچکﱰ در سلوﳍاي بدن، هدف از اﳒام این ﲢقیق ساخت وبررسی عوامل ﳐتلفجهت ﲠینه سازي نانو ذرات میباشد. دراین مطالعه اثرات فاآتورهایی نظﲑ دما، غلظت ژلاتﲔ، سرعت ﳘزن، مقدار استون و گلوتارآلدئید برسایزذرات بررسی گردید. روش تاگوچی با تعریف 4 فاآتوردما، غلظت، سرعت ﳘزن و مقدار استون در 4 سطح جهت ﲠینه سازي سایز ذرات استفاده شد. در بﲔ ﲤامی شرایط، دماي 500C، غلظت ژلاتﲔ 45mg/ml، استون 80ml و دورﳘزن600 rpm ﲠﱰین نتایج رادربر داشت و ذرات تولیدي داراي ابعاد170nm بوده است.
کلید واژه: سامانه انتقال دارو، نانوذرات ژلاتﲔ، ﲠینه سازي، روش دو مرحله اي ناﳏلول آردن، روش تاگوچی.
مقدمه
سامانه هاي نوین دارو رسانی با استفاده از ذراتی در ﳏدوده نانو نقش مهمی رادردرمان بیماري هایی نظﲑسرطان بازي می آنند آه قادر به فراهم ﳕودن راههایی جهت رهایش هدفمندوآنﱰل شده داروهادربدن، ﲠبوداثرات درمانی وآاهش اثرات وعوارض جانﱯ داروها میباشد - . - 1هدف اصلی سیستمهاي انتقال دارو،رهایش مستقیم داروبه سلوﳍاي ویژه می باشد - . - 2اندازه نانومﱰي سیستم هاي انتقال باعث مزایاي بسیاري جهت انتقال دارودربدن میگردد - . - 3نانوذرات ژلاتﲔ براي رهایش داروهاي ﳐتلف،رهایش ژن - - 4،به عنوان حامل براي انتقال داروبه ریه ها - - 5ودرهنایت نانو ذرات اصلاح شده ژلاتﲔ براي انتقال هدفمند به لیمفوزیتها - - 6، سلوﳍاي سرطانی lاستفاده می شوند - . - 7
نانوذرات پروتئیﲏ عموماً سایزهاي متفاوتی ازnm 50-300 را دارا می باشند - . - 8 براي به دست آوردن نانو ذرات ژلاتﲔ، بیشﱰازروشدومرحله ناﳏلول سازي استفاده میگردد - . - 9 درآارحاضرمطالعاتی براثرات فاآتورهاي ضروري ﳐتلف برساخت نانوذرات ژلاتیﲏ با روش desolvation دارﱘ. هدف ما بررسی این فاآتورهاوﲠینه سازي سایزذرات وتوزیع سایزي نانو ذرات ژلاتﲔ است. شرایط ساخت موثرنظﲑدما،غلظت ژلاتﲔ،سرعت ﳘزن،میزان استون برساخت چنﲔ نانوذراتی موردبررسی قرارگرفته است. مرحله بعدي مطالعات مااستفاده از روش آماري تاگوچی جهت به دست آوردن شرایط ﲠینه ساخت نانو ذرات ژلاتﲔ می باشد.
مواد و روشها:
ﲤامی مواد شیمیایی استفاده شده بدون خالص سازي ثانویه می باشند. ژلاتﲔ نوع A - از پوست خوك - ، گلوتارآلدئید، HCl و استون از شرآت سیگما ﲥیه شده اند. آب دوبار تقطﲑ شده در ﲤامی آزمایشات استفاده می شود.نانو ذرات ژلاتﲔ با استفاده از روش دو مرحله ناﳏلول سازي ساخته می شوند. 1/25g از ژلاتﲔ نوع A در 25ml آب مقطر حل میگردد سپس 25ml استون اضافه شده تا ژلاتﲔ رسوب دهد. رسوب دوباره در 25ml آب مقطر حل شده، pH ﳏلول به 2/5 رسانده شده واستون به صورت قطره اي و ﳘزدن اضافه میگردد،اﳚاد آدورت نشان دهنده تشکیل نانو ذرات است.در انتهاي فرآیند از گلوتارآلدئید جهت شبکه اي آردن نانو ذرات ژلاتﲔ اضافه می گردد و به صورت شبانه هم زده می شود.ذرات با سه بار سانﱰي فوژ ﲣلیص شده به طوري آه پس از هر بار سانﱰي فوژ ذرات در ﳏلول ٪30 پراآنده می گردند، پس از آخرین مرحله استون توسط تغلیظ آننده تبخﲑ می گردد.براي بررسی مورفولوژي ذرات از میکروسکوپ الکﱰونی روبشی - SEM - و میکروسکوپ نﲑوي اﲤی - - AFM استفاده میشود ﳘچنﲔ براي اندازه گﲑي سایز ذرات از دستگاه پراآنش نور لیزر - - PCS استفاده شده است.
-2 ﲠینه سازي نانوذرات
براي ﲠینه سازي اندازه ذرات از روش آماري تاگوچی با تعریف 4 عامل موثر بر اندازه ذرات در 4 سطح استفاده می شود.براي این آار ابتدا باید عوامل موثر بر اندازه ذرات تعیﲔ گردد. اولﲔ عامل مورد بررسی دما است ، با افزایش دما اندازه ذرات آوچکﱰ میشود. اندازه ذرات ساخته شده برابر 209/1، 158/6 ،nm169/7 به ترتیب دردماهاي 40، 50و60œCاست.عامل بعدي غلظت ژلاتﲔ است افزایش غلظت ژلاتﲔ باعث آوچک شدن قطر ذرات میشود. اندازه ذرات ساخته شده برابر 238، 219/5 ،nm193 به ترتیب درغلظتهاي 45، 50وmg/ml55 ژلاتﲔ است. یکی دیگر از عوامل مورد بررسی میزان گلوتارآلدئید اضافه شده است آه اثر مشخصی بر قطر ذرات ندارد.
در مقادیر 250، 300، ʽl350 گلوتارآلدئید، اندازه ذرات به ترتیب برابر 208، 279/6، 212/4 است. میزان استون افزوده شده دیگر عامل مورد بررسی است آه با نتایج بدست آمده مشخص می گردد آه سایز ذره با مقدار استون رابطه معکوس دارد. در مقادیر 70، 75وml80 استون سایز ذرات 303/5، 253/4و 211/2 است.آخرین عامل ﲢت بررسی میزان دور ﳘزن است آه با افزایش سرعت ﳘزن اندازه ذرات آوچکﱰ میشود. در دور ﳘزن هایی برابر 500، 600 و rpm700 اندازه ذرات 258/7، 213/1 و 203/4 است. با توجه به بررسی هاي صورت گرفته مشخص می گردد آه 4 عامل دما، میزان استون، غلظت ژلاتﲔ و دورﳘزن از عوامل تاثﲑ گذار بر سایز ذره هستند.
براي ﲠینه سازي اندازه ذرات از روش آماري تاگوچی استفاده می شود، در این روش این 4 عامل موثر در 4 سطح در جدول آرایه هاي متعامد قرار داده می شود. تاگوچی براي این حالت 16 آزمایش پیشنهاد میکند آه با بدست آوردن نتایج این آزمایشات و استفاده از نرم افزار تاگوچی شرایط ﲠینه براي داشﱳ آوچکﱰین سایز ذرات به دست میاید. جدول1 جدول آرایه هاي متعامد است تاگوچی با معرﰲ شرایط زیر یعﲏ دماي 500C، غلظت 45mg/ml، میزان استون 80ml و دور ﳘزنی برابر 600rpm سایز ﲠینه ذرات را 170nm نشان می دهد. ﳘچﲔ ﳕونه اي از تصاویر SEM در شکل 1 نشان داده شده.
نتایج
در این مطالعات ما برنانو ذرات ژلاتﲔ متمرآز شده اﱘ آه از آهنا به عنوان حاملهاي دارویی استفاده می گردد. نانو ذرات ژلاتﲔ با استفاده از ژلاتﲔ نوع A و توسط روش دو مرحله اي ناﳏلول سازي ساخته می شوند. نتایج آزمایشات نشان می دهد آه چندین پارامﱰ نظﲑ دما، غلظت ژلاتﲔ، میزان استون و سرعت ﳘزن بیشﱰین اثرات را بر اندازه ذرات دارند اما میزان گلوتارآلدئید به عنوان شبکه ساز تاثﲑي بر قطرذرات ندارد. روش آماري تاگوچی با تعریف 4 سطح و 4 فاآتور براي ﲠینه سازي اندازه ذرات استفاده شد. شرایط ﲠینه دماي 500C، غلظت 45mg/ml، میزان استون 80ml و دور ﳘزنی برابر 600rpm میباشد و اندازه ﲠینه ذرات را 170nm نشان میدهد. آنالیز SEM نشان می دهند آه ذرات آروي و یکنواخت هستند.
