بخشی از مقاله
چکیده
یکی از جدیدترین روش ها که می تواند باعث بهبود صحت پیش بینی و پاسخ به انتخاب شود، انتخاب براساس نشانگرها است. ژن پرولاکتین در بررسی چند قلوزایی و افزایش وزن به عنوان ژن کاندید مطرح می باشد. به منظور بررسی چند شکلی ژن پرولاکتین از 150 گوسفند نژاد بلوچی خونگیري به عمل آمد. استخراج DNA به روش نمکی بهینه یافته انجام و از واکنش زنجیره اي پلی مراز جهت تکثیر یک قطعه 161 جفت بازي از ناحیه پرو موتور این ژن استفاده شد.
جهت تعیین ژنوتیپ از تکنیک PCR-SSCP استفاده شد که چهار ژنوتیپ AA - ، AB، AC و - AD به ترتیب با فراوانی هاي 0/1، 0/64، 0/253 و 0/007 و چهار آلل A، B، C و D با فراوانی هر یک به ترتیب 0/55، 0/32، 0/12 و 0/003 مشاهده شد. جهت برآورد همبستگی بین ژنوتیپ هاي مشاهده شده با صفت چند قلوزایی از برنامه SAS نسخه 9/1 استفاده شد. آنالیز آماري داده ها، عدم تاثیر ژنوتیپ هاي مشاهده شده در این جایگاه ژنی بر صفات مورد مطالعه در جمعیت گوسفند بلوچی را نشان داد.
مقدمه
پرولاکتین یک هورمون مترشحه از هیپوفیز قدامی می باشد که در بسیاري از فعالیت هاي حیاتی، تولید مثلی و تولیدي درگیر می باشد 7 - ، 9، . - 12 تمام این فعالیت ها به واسطه گیرنده پرولاکتین - PRLR - 1 انجام می گیرد. جایگاه ژن گیرنده پرولاکتین روي کروموزوم 16 قرار دارد 8 - ، . - 10 جایگاه گیرنده پرولاکتین نیز به عنوان ژن اصلی تاثیر گذار در باروري بالا در گوسفند مطرح می باشد و یا می تواند با دیگر ژن هاي تاثیر گذار در باروري بالا پیوستگی داشته باشد . - 3 - جهش در ژن پرولاکتین با میزان جوجه درآوري در طیور رابطه معنی داري دارد 4 - ، 11، - 13 گزارش شده است.
هدف از این مطالعه ابتدا شناسایی چند شکلی هاي تک نوکلئوتیدي2 در ناحیه پرو موتور ژن پرولاکتین و تعیین همبستگی بین چند شکلی هاي این ژن و صفات چند قلو زایی با استفاده از تکنیک PCR- SSCP3 بوده است. مواد و روش ها در این تحقیق از تعداد 150 راس از میش هاي نژاد بلوچی موجود در مرکز اصلاح نژاد عباس آباد وابسته به سازمان جهاد کشاورزي استان خراسان رضوي خونگیري به عمل آمد. نمونه هاي گرفته شده بلافاصله با حفظ شرایط زنجیره سرد به آزمایشگاه منتقل و تا زمان استخراج DNA در دماي 4 درجه سانتی گراد نگهداري شد. استخراج DNA به روش نمکی بهینه یافته انجام شد . - 6 - جهت تکثیر قطعه مورد نظر از ناحیه پروموتور این ژن از پرایمر اختصاصی استفاده شد - جدول . - 1
جهت انجام واکنش زنجیره اي پلی مراز از دستورالعمل PCR استاندارد استفاده شد و سپس رویت سازي محصولات PCR روي ژل آگارز 2 درصد انجام گرفت. براي شناسایی SNP هاي احتمالی 2 میکرولیتر از محصول PCR به همراه 8 میکرولیتر بافر بارگذاري تک رشتهاي شده و سپس روي ژل پلی اکریل آمید 15 درصد در دماي 4 درجه سانتی گراد به مدت 7 ساعت الکتروفورز شدند. باندها با استفاده از رنگ آمیزي نیترات نقره مشاهده و تعیین ژنوتیپ شدند.
نتایج
قطعه مورد نظر با استفاده از پرایمر هاي اختصاصی تکثیر و ژنوتیپ ها با استفاده از روش PCR-SSCP مورد شناسایی قرار گرفتند. پس از آنالیز، چهار ژنوتیپ AA - ، AB، AC و - AD با فراوانی هر یک به ترتیب 0/1، 0/64، 0/253 و 0/007 و نیز چهار آلل A، B، C و D با فراوانی هر یک به ترتیب 0/55، 0/32، 0/12 و 0/003 مشاهده شد. براي بررسی تعادل هاردي- واینبرگ از آزمون کاي-اسکور استفاده شد. با توجه به کی دو بدست آمده - 99/59 - و مقایسه آن با مقدار جدول - - 12/6 در سطح 5 درصد با درجه آزادي 6 مشخص شد که جمعیت مورد مطالعه براي ژن پرولاکتین در تعادل هاردي- واینبرگ قرار ندارد. این نتیجه احتمالا می تواند به دلیل کوچک بودن اندازه جمعیت مورد مطالعه باشد.
بحث هدف از تحقیق حاضر که براي نخستین بار در ایران انجام می پذیرد بررسی چند شکلی هاي موجود در ژن پرولاکتین در گوسفند بلوچی و رابطه آن با صفت چند قلوزایی بوده است. براي آنالیز چند شکلی در این تحقیق از روش پی سی آر- اس اس سی پی و ژل پلی اکریل آمید استفاده شد. اگر چه چند شکلی تک نوکلئوتیدي در جایگاه پروموتور ژن پرولاکتین در جمعیت مورد مطالعه مشاهده شد اما آنالیز آماري عدم وجود رابطه معنی داري بین این ژن و صفت بره زایی را نشان داد.
چو و همکارن در سال 2009 براي نخستین بار رابطه معنی داري بین این جایگاه و دو قلوزائی در گوسفدان دم کوتاه هان را گزارش دادند - 2 - که با نتایج تحقیق حاضر مغایرت دارد. برایم و همکاران در سال 2005 تحقیقی روي اگزون 4 ژن پرولاکتین گاو انجام دادند که یک SNP در این ناحیه مشاهده کردند . - 1 - کوي, ژانگ و لیانگ و همکاران در سال هاي 2005 و 2006 یک ناحیه حذفی 24 جفت بازي را در ژن پرولاکتین طیور مشاهده کردند 4 - ، 11، . - 13 انجام تحقیقات بیشتر و گسترده تر در رابطه با جایگاه هاي مرتبط به ژن پرولاکتین و گیرنده آن در گوسفندان می تواند اطلاعات جامع تري را در اختیار ما قرار دهد.
