بخشی از مقاله
چکیده
در این بررسی از جمعیت در حال تفکیک F2 براي شناسایی نشانگر مولکولی پیوسته با ژن مقاومت به بیماري ویروسی ریزومانیاي چغندرقند استفاده گردید. در این تحقیق از آغازگرهاي تصادفی ده نوکلئوتیدي به صورت تکی و جفتی براي آزمون RAPD بر روي DNA بالک مقاوم و حساس بر اساس تجزیه تفرق توده - BSA - استفاده شد.
تعدادي از جفت آغازگرها در بالک هاي DNA تولید چند شکلی نمودند، پس از آزمون این جفت آغازگرها بر روي DNA تک بوته بالک هاي حساس و مقاوم، تعدادي از آنها انتخاب و در تک بوته هاي جمعیت نیز ارزیابی شدند. سپس فواصل نشانگرها و ژن ایجاد مقاومت با استفاده از روش فراوانی بوته هاي نوترکیب تعیین گردید. از بین نشانگرهاي منتخب نشانگر ناجفت PN7-1 با فاصله حدود 17 سانتی مورگان بدست آمد.
مقدمه
چغندر قند گیاهی از خانواده آمارانتاسه - - Amaranthace، جنس بتا - - Beta و گونه ولگاریس - - Vulgaris میباشد.[3] بیماري ریزومانیا - ریشه گنایی - یکی از مخربترین بیماري هاي چغندرقند در جهان است. ریزومانیا باعث تکثیر بیش از حد ریشههاي موئین در نتیجه آلودگی ریشهها با ویروس زردي نکروتیک رگبرگ چغندر قند Beet Necrotic YellowVein - - BNYVV - - Virusمی گردد .[4] یکی از روشهاي مقابله با این بیماري استفاده از ارقام مقاوم است. به منظور یافتن یک نشانگر مولکولی که بتواند با ژن مقاومت به ریزومانیا پیوستگی داشته باشد، این بررسی در یک توده در حال تفرق چغندرقند انجام گرفت.
مواد و روش ها
براي شناسایی نشانگرهاي RAPD پیوسته با ژن Rz1 مقاومت به ریزومانیا، DNA هفت گیاه با کمترین مقادیر جذب الایزا - توده مقاوم - و هفت گیاه با بیشترین مقادیر جذب الایزا - توده حساس - در جمعیت - F 2 تحقیقات امیري - 1382 مربوط به Holly، - F2-A1-110 - با نسبت مساوي، مخلوط گردید. سپس مخلوط DNA ي تهیه شده براي گیاهان مقاوم و حساس مورد آزمون مولکولی قرار گرفت. در صورت به دست آمدن فاصله کم از ژن مورد نظر ادامه آزمایش روي سایر افراد جمعیت انجام شد.
نتایج و بحث
نشانگر منتخب در این آزمایش PN7-1 میباشد. این نشانگر داراي باندي در اندازة 1280 bp - جفت باز - است. ابتدا دو بالک حساس و مقاوم مورد آزمون مولکولی قرار گرفتند - شکل - 1 و پس از تایید نتیجه، ادامه بررسیها روي جمعیت F2 صورت گرفت - شکل - 2 و فاصله این نشانگر از ژن مربوطه روي 32 بوته از جمعیت F2، با استفاده از روش بارزن 17/75 سانتیمورگان برآورد شد.[1][2]
