بخشی از پاورپوینت
اسلاید 2 :
عنوان:
بررسی درمان هم افزایی پی پرین و ممانتین درکاهش علائم افسردگی و افزایش بیان BDNF در آمیگدال و هیپوکامپ مغز موش صحرایی در مدل افسردگی اضطرابی ناشی از کورتیکوسترون
اسلاید 3 :
مقدمه
بررسی متون
اهداف و فرضیات
طراحی تحقیق و روش اجرا
ملاحظات اخلاقی
افسردگی یکی از شایعترین اختلالات روانی می باشد و 10 تا 20 درصد عموم مردم، افسردگي در حد خفيف تا شديد را تجربه مي كنند و اين اختلال، بيماري شايعي است كه 15 درصد افراد حداقل يكبار در طول زندگي با آن مواجه مي شوند
درمان های دارویی در دسترس برای اختلال افسردگی شامل گروه داروهای چند حلقه ای، گروه داروهای مهارکننده اختصاصی بازجذب سروتونین(SSRI) ، گروه داروهای مهار کنندۀ آنزیم مونوآمین اکسیداز (MAOI) و چند نمونه داروی غیرنوعی جدید مانند بوپروپیون، نفازودون، ونلافاکسین و غیره می باشند
داروها عمدتاً از طریق تغییر میزان آزاد شدن انتقال دهنده های عصبی (نوروترانسمیترها) و یا فعال یا غیرفعال کردن گیرنده ها آثار خود را اعمال می نمایند(2). عموماً داروهای در دسترس واجد عوارض جانبی ناخواسته مزاحم و گاهی خطرناک می باشند. لذا جهت گیری به سمت معرفی داروهای مؤثر و در عین حال با عوارض جانبی کمتر، منطقی به نظر می رسد.
اسلاید 4 :
بررسی متون
اهداف و فرضیات
طراحی تحقیق و روش اجرا
ملاحظات اخلاقی
پي پرين آلکالوئيدي است که به طور طبيعي در Piper nigrum و Piper longum يافت مي شود. Piper longum، Piper nigrum و Pipercubeba درخت هاي گلداري شبيه درخت مو flowering vines مي باشند که در تيره پيپراسه قرار دارند(2). در سالهای اخیر مطالعاتی در خصوص اثرات آنتی اکسیدانت و محافظت عصبی پی پرین و بخصوص در بیماری افسردگی انجام یافته و حتی نتایجی در ارتباط با تاثیر پی پرین در افسردگی بدست امده است
NMDA گيرندهای برای نوروترانسميتر تحريکی گلوتامات است که متعاقب تحريک دردناک محيطی آزاد میشود. گيرنده گلوتامات NMDA در حقيقت يکی از گيرندههای مهم کانال یونی است که واسطه انتقالات عصبی تحريکی سريع در سيستم اعصاب مرکزی بوده و نقش مهمی را در پديده حساس شدگی مرکزی central sensitization ايفا میکند.در سالهای اخیر نقش این رسپتور و داروهای محرک یا مهار کننده آن در برخی از بیماریهای نورودژنراتیو از جمله الزایمر و همچنین افسردگی بررسی و تائید گردیده است(4). بطوریکه برخی مطالعات نشان داده که ممانتین به عنوان آنتاگونیست رسپتور NMDA خواص ضد افسردگی دارد(5)
مقدمه
اسلاید 5 :
اگرچه مطالعاتی در رابطه با مکانیسم ضد افسردگی پی پرین وجود دارد اما مکانیسم دقیق ضد افسردگی پی پرین مشخص نیست بخصوص آنکه بررسی تداخل مسیر NMDA در افزایش بیان BDNF توسط پی پرین در نواحی مزولیمبیک مغز وجود ندارد و این مطالعه برای اولین با به بررسی این تداخل مسیر بخوص در مدل افسردگی اضطرابی در موش می پردازد. در واقع در این طرح بدنبال بررسی اثر هم افزایی پیپرین و ممانتین در بهبود رفتاری علائم افسردگی و ارتباط آن در افزایش بیان BNDF در مغز می باشیم.همچنین در خصوص ممانتین به عنوان آنتاگونیست NMDA اگرچه مطالعاتی در خصوص کاهش علائم اضطرابی وجود دارد اما در خصوص تداخل آن با پی پرین در افزایش بیان BDNF مطالعاتی وجود ندارد و این مطالعه به عنوان اولین بار به بررسی این موضوع می پردازد.
اسلاید 6 :
بیان مسئله
در سال 2014 Maoو همکارانش در مطالعه ای به بررسی میزان فاکتور نوروتروفیک مغزی به عنوان واسطه در تاثیر ضدافسردگی پی پرین در موش های تحت استرس مزمن پرداختند. نتایج نشان داد که استرس خفیف مزمن غیرقابل پیش بینی باعث بروز رفتارهای افسردگی در موش ها می شود که نشان از کاهش معنی دار مصرف ساکارز و افزایش زمان بی تحرکی در تست شنا اجباری دارد. همچنین مشخص شد که بیان پروتئین BDNF در هیپوکامپ و قشر فرونتال در موشهای تحت درمان با CUMS chronic unpredictable mild stress)) کاهش یافته است. piperine در موش در معرض استرس مزمن غیر قابل پیش بینی خفیف (CUMS) در دوز 10mg / کیلوگرم به طور قابل توجهی زمان بی حرکتی را در آزمون شنای اجباری در موش را کاهش داده است. همچنین به به موازات، درمان piperine به طور قابل توجهی بیان پروتئین BDNF در هیپوکامپ و قشر فرونتال افزایش یافته است. آن ها دریافتند که روی هم رفته ، این مطالعه نشان می دهد که سیگنالینگ BDNF واسطه ای اساسی برای اثر ضد افسردگی مانند پیپرین است(2).
اسلاید 7 :
Mao و همکاران در سال 2012 به بررسی تاثیر معکوس پی پرین بر اثرات کورتیکواسترون بر رفتار و بروز BDNF در موش ها پرداختند. نتایج نشان داد که تزریق کورتیکواسترون 3 هفته ای باعث ایجاد رفتارهایی مانند افسردگی در موش ها شد که نشان از کاهش معنی دار مصرف ساکارز و افزایش زمان بی تحرکی در آزمایش اجباری شنا و تعلیق دم دارد. علاوه بر این، مشخص شد که سطح ژن BDNF در هیپوکامپ در موشهای تحت درمان با کورتیکوسترون کاهش معنی دار دارد. آن ها دریافتند که پی پرین یک اثر ضد افسردگی مانند در موشهای تحت درمان با کورتیکواسترون تولید می کند، که احتمالا به واسطه افزایش بیان BDNF در هیپوکامپ است(1).
اسلاید 8 :
Wattanathornو همکاران در سال 2008 به بررسی پی پرین به عنوان ماده عملکردی برای خلق و خو و اختلالات شناختی پرداختند. بررسی اثر ضد افسردگی piperine در موش دچاراسترس خفیف مزمن غیر قابل پیش بینی CUMS نشان داد که پس از تجویز 21 روز، piperine در غلظت های 10 و 20 میلی گرم / کیلوگرم به طور قابل توجهی باعث بهبود اختلالات رفتاری گردید.
اسلاید 9 :
هدف کلی طرح
اهداف اختصاصی طرح
فرضیه (یا سوال تحقیق)
بررسی درمان هم افزایی پی پرین و ممانتین درکاهش علائم افسردگی و افزایش بیان BDNF در آمیگدال و هیپوکامپ مغز موش صحرایی در مدل افسردگی اضطرابی ناشی از کورتیکوسترون
1- ایجاد مدل افسردگی اضطرابی در موش صحرایی توسط کورتیکوسترون
2-تعیین اثر پی پرین در افزایش یا کاهش بیان BDNF در ناحیه هیپوکامپ و آمیگدال مغز موش صحرایی
3-تعیین تداخل آنتاگونیست NMDA ( ممانتین ) با پی پرین در افزایش یا کاهش بیان BDNF در ناحیه هیپوکامپ و آمیگدال مغز موش صحرایی
1- آیا تداخل مسیر NMDA ) توسط ممانتین ) با پی پرین باعث تغییر در بیان ژن BDNF در مغز موش صحرایی می شود ؟
2- آیا تداخل مسیر NMDA ) توسط ممانتین ) با پی پرین باعث تغییر علایم افسردگی در موش صحرایی می شود؟
اسلاید 10 :
نوع پژوهش
مطالعه حاضر یک مطالعه تجربی است و بر روی جمعیت موش ها انجام شده است.
جامعه آماری پژوهش
حيوانات مورد استفاده موش صحرایی (رت ) از نژاد ویستار با وزن 200 الي 250 گرم بود. موش ها در حيوانخانه مجتمع پروش حیوانات در درجه حرارت ٢±٢٣ درجه سانتيگراد با سيكل روشنايي خاموشي ١٢ ساعته نگهداري مي شوندد و آب و غذاي استاندارد موش (پارس، ايران) هميشه به جز در هنگام آزمايشات در اختيار حيوانات قرار مي گیرد و از هر حيوان نيز فقط يكبار استفاده مي شود.
اسلاید 11 :
مشخصات واحد پژوهش
موش صحرایی (رت ) از نژاد ویستار با وزن 200 الي 250 گرم
معیار های ورود به مطالعه
معیار های خروج از مطالعه
مرگ هر یک از نمونه ها در طی مطالعه
اسلاید 12 :
حجم نمونه
حیوانات در 4 گروه 5 تایی مورد مطالعه قرار می گیرند که یک گروه بعنوان گروه کنترل می باشد. این تعداد و حجم نمونه بر اساس مطالعات قبلی در بیان ژن و پروتئین در مدل افسردگی تنظیم شده است(43). حیوانات در 4 گروه 5 عددی مورد مطالعه قرار گرفتند. داروهای مورد استفاده شامل کورتیکوسترون –ممانتین –پی پرین می باشد.
اسلاید 13 :
ابزار گردآوری داده ها و روش اجرای مطالعه
جهت ایجاد مدل افسردگی کورتیکوسترون در PBS حاوی Tween-80 0.1% بصورت سوسپانسیون در آمده و به موشها در دوز 20 میلی گرم بر کیلوگرم بصورت داخل صفاقی به مدت سه هفته متمادی تزریق شد . 1- تجویز پی پرین در دوز 10 میلی گرم بر کیلوگرم بصورت داخل صفاقی به مدت 3 هفته همزمان با کورتیکوسترون به موش های گروه درمانی تجویز شد. تجویز ممانتین 15 دقیقه قبل از پی پرین به مقدار 3 میلی گرم بر کیلوگرم بطور داخل صفاقی تجویز می شود.
اسلاید 14 :
ابزار گردآوری داده ها و روش اجرای مطالعه
گروه های درمانی:
گروه کنترل که هیچ دارویی به آن ها تزریق نشده است.
گروه دوم فقط تحت کورتیکواسترون طی 3 هفته قرار گرفتند.
گروه سوم شامل موش هایی می شود که علاوه بر دریافت کورتیکوسترون به مدت 3 هفته، پی پرین در دوز 10 mg/kg بصورت داخل صفاقی به مدت سه هفته به این موشها تجویز شد. پی پرین نیم ساعت قبل از کورتیکوسترون تجویز می شود.
گروه چهارم شامل موش هایی می شود که تحت کورتیکوسترون قرار گرفته و سپس به آن ها پی پرین و ممانتین تزریق شد. در گروه دریافت کننده ممانتین، ممانتین 15 دقیقه قبل از پی پرین به ترتیب به مقدار 2,3,5mg/kg بطور داخل صفاقی تجویز شد.
اسلاید 15 :
ابزار گردآوری داده ها و روش اجرای مطالعه
پس از اتمام دوره تجویز دارو ابتدا جهت تایید اثر دارو و ایجاد مدل افسردگی اضطرابی توسط کورتیکوسترون آزمون شنای اجباری صورت پذیرفت. سپس موشها با گیوتین کشته شده و مغز خارج و درRNA Later قرار داده و در فریز -70 قرار داده شد و جهت مطالعات سلولی و PCR تحت مطالعه قرار گرفت. پس از کشتن موشها جمجه موشها با تیغ جراحی برش زده و مغز بطور کامل خارج و پس از برش عرضی مغز از ناحیه میانی زیر نظر متخصص آناتومی یا فیزیولوژی حیوانات ازمایشگاهی ناحیه آمیگدال، هیپوکامپ و فرونتال کورتکس مغز خارج و برای بررسی بیان ژن در RNA later بافر محافظ (RNA) قرار داده می شود.
اسلاید 16 :
آنالیز آماری
تمام یافتههای آماری با کمک نرم افزار نسخه 18 spss مورد تجزیه و تحلیل قرارگرفت.
برای آنالیز نتایج مربوط به بررسی کمی بیان ژن، بیان ژن هاي BDNFو به وسيله بیان ژن GAPDH به عنوان ژن مرجع نرمال سازي شد. اطلاعات آماري با به کار بردن متد -2 ∆∆CT نمایش داده شد ومتوسط متغیرها بیان شد. پس از اطمینان از نرمال بودن توضیع داده توسط آزمون kolmogorov smirnov ، اختلافات برای بیان ژن بین گروه کنترل و گروه مورد به وسیله آزمون آماری T مورد تخمین قرار گرفت.)جهت محاسبه اختلاف معنی دار در گروههای مختلف ازP-value استفاده شد. مقادیر P کمتر از 0/05 معنی دار تلقی گردید.
اسلاید 17 :
ملاحظات اخلاقی
1- پس از بررسی طرح در کمیته اخلاق دانشگاه، کد اخلاق از دانشگاه علوم پزشکی مازندران اخذ گردید.
2- هماهنگی و اخذ مجوز از مسئولین دانشگاه علوم پزشکی مازندران جهت ورود به محیط پژوهش و ارائه معرفی نامه کتبی صورت گردید.
3- طراحی و اجرای این پژوهش منطبق با اصول علمی پذیرفته شده براساس دانش روز و مبتنی بر مرور کامل منابع علمی موجود صورت گرفت.
4- هزینه سنجش متغیرهای مربوط به تحقیق از محل اعتبار طرح تامین گردید.
5- مجری پایان نامه در مورد انتشار نتایج تحقیق تعهد اخلاقی دارد و خود را موظف می داند که نتایج پژوهش خود را، در دسترس عموم قرار دهد و مسئول کامل بودن و صحت گزارش های خود می باشد.
6- پژوهشگر نتایج پژوهش های خود را صادقانه، دقیق، و کامل منتشر می کند.
7- با توجه به نوع تحقیق و انجام مراحل مطالعه بر طبق روش های علمی کلیه مسائل اخلاقی در هنگام کار با حیوان مورد توجه قرار می گیرد.
اسلاید 18 :
نتایج و نتیجه گیری
در جدول زیر میانگین و انحراف استاندارد نتایج پلاس میز و شنای اجباری نمایش داده شده است. از آزمون One-way ANOVA جهت مقایسه میانگین ها استفاده شد. این آزمون نشان داد که تفاوت معناداری در هر متغیر بین گروه ها وجود دارد از آزمون دانکن جهت آزمون تعقیبی استفاده شد . این آزمون نشان داد که تفاوت معناداری در تست پلاس میز بین گروه کنترل و دو گروه کورتکوسترون و پی پرین و گروه کورتیکوسترون و پی پرین و ممانتین وجود دارد (p value<0.05). همچنین این آزمون نشان داد که تفاوت معناداری در تست شنای اجباری بین گروه کنترل و کورتیکوسترون با دو گروه دیگر وجود دارد (p value<0.05).
نتایج مطالعات رفتاری
اسلاید 20 :
نمودار پلاس میز یا تست اضطرابی – محور Y نسبت مدت زمان اقامت در بازوی روشن نسبت به کل زمان اقامت در بازوی روشن و تاریک بر اساس ثانیه
1-گروه کنترل
2- گروه کورتیکوسترون
3- گروه کورتیکوسترون و پی پرین
4- گروه کورتیکوسترون پی پرین و ممانتین
در نمودار مقابل که مربوط به تست پلاس میز می باشد مدت زمان اقامت در بازوی روشن به کل اقامت در بازوی روشن و تاریک بر حسب ثانیه در گروه های مختلف نشان داده شده است. اقامت بیشتر در بازوی روشن بیانگر کاهش اضطراب است. کمترین زمان اقامت در بازوی روشن در گروه کورتیکوسترون + پی پرین می باشد که نشان دهنده بیشترین میزان اضطراب در این گروه است و بیشترین زمان اقامت در بازوی روشن در گروه کنترل می باشد که نشان دهنده ی کمترین میزان اضظراب است.
