بخشی از مقاله
چکیده
فنول ها عضوی از خانواده بزرگ متابولیت های ثانویه هستند که به طور منحصر به فردی در بسیاری از گیاهان وجود دارند. این ترکیبات در فعالیت های مختلفی از جمله پاسخ های دفاعی گیاه به تنش های زنده و غیر زنده عمل می کنند. هدف این مطالعه بررسی تاثیر نفت خام بر محتوای فنل، فلاونوئید، فلاونول و آنتوسیانین گیاه Helianthus annuus میکوریزایی می باشد.
پژوهش در شرایط گلخانه ایی انجام شد. دانه رست های H. annuus - گیاهان کنترل و گیاهانی که با نفت و نفت+قارچ تیمارشدند - به خاک های آلوده با غلظت های مختلف نفت 2/5 - ، 5، 7/5 و - %10 در گلدان های پلاستیکی که با 500 گرم خاک پر شدند. پس از 45 روز گیاهان برداشت شدند. نتایج نشان می دهد که محتوای فنل کل و آنتوسیانین در برگ تیمارهای نفتی-میکوریزایی نسبت به تیمارهای نفتی-غیرمیکوریزایی افزایشی می باشد در حالیکه در ریشه تیمارهای نفتی- میکوریزایی نسبت به کنترل معنی دار می باشد. بنابراین می توان قارچ گلوموس موسه آ را در براه اندازی فعالیت آنتی اکسیدان های غیرآنزیم برای مقابله با تنش نفتی در غلظت های بالا موثر دانست.
-1مقدمه
گیاه پالایی، از گیاهان برای تخریب آلاینده های آلی استفاده می کند. بعضی گیاهان به هیدروکربن های نفتی مقاوم هستند.
این ممکن است به علت فعالیت میکروفلورهای ریزوسفر باشد که در تخریب و نیز معدنی کردن آلاینده های آلی خاک مشارکت می کنند و سبب حفظ رشد گیاه در غلظت های بالای نفتی می شوند. در دهه های اخیر اگر چه دانش های محیطی بر روی دانش های فیتوتکنولوﮊی و اکوفیزیولوﮊی متمرکز شده اند اما هنوز نیاز می باشد که واکنش های فیزیولوﮊیکی و عملکرد گیاهانی که در خاک های آلوده به نفت خام رشد می کنند را بشناسیم . - Noori et al., 2012 - فلاونوئیدها گروه بزرگی از ترکیبات پلی فنل می باشند که در سیتوپلاسم و نیز سطح سیتوپلاسمی شبکه آندوپلاسمی سنتز می شوند و به طور وسیعی در سلسله گیاهی توزیع شده اند
. - Pourcel et al 2007 - فلاونول ها و آنتوسیانین ها از جمله فلاونوئیدها می باشند. فلاونوئیدها همانند بسیاری دیگر از پلی فنل ها به دلیل داشتن گروههای دهنده الکترون یا هیدروﮊن در جمع کردن رادیکال های آزاد بسیار توانمند هستند - Molina et al ., 2003; . - Seyoum et al 2006 بنابراین در برابر تنش های زیستی و غیر زیستی نقش حفاظتی دارند . - Pourcel et al 2007 - با توجه به نکات ذکر شده، هدف ما در این مطالعه یررسی تاثیر قارچ میکوریزا آرباسکولار گلوموس موسه آبر محتوای فنل کل، فلاونوئید، آنتوسیانین و فلاونول می باشد.
-2مواد و روش ها
1-2 آماده سازی بستر و کاشت گیاه
این پژوهش بصورت کشت گلدانی در گلخانه دانشگاه تربیت مدرس در دمای بین - 15-30ₒCروز و شب - ، رطوبت 15-21% و شرایط نوری 15 ساعت روزانه در طی 40 الی 45 روز انجام شد. ترکیبی از شن - %61 - ، سیلت - %34 - و رس - %5 - به عنوان بستر آزمایش تهیه شد و در اتوکلاو 121ₒC به مدت 2 ساعت استریل شد. میزان pH خاک 7/52، هدایت الکتریکی 500 - µs/cm - ، مواد محلول جامد 250 - Mg/l - ، شوری - 0/2 - ppt خاک بوده است.
نفت خام از پالایشگاه نفت تهران تهیه شد. قارچ میکوریزایی تلقیح شده در این تحقیق که از نوع Glomus mossaea بود که از شرکت کلینیک گیاه پزشکی ارگانیک اسدآباد همدان تهیه شد. هر گرم خاک میانگین دارای 45 اسپور بود.
ابتدا دانه های گیاه H. annuus توسط هیپوکلرت سدیم %5 به مدت 10 دقیقه و الکل %50 به مدت 30 ثانیه استریل شد. برای رسیدن به مرحله دانه رست به مدت 4 روز در شرایط تاریکی قرار گرفت. سپس، دانه رست های H. annuus به گلدان های 500 گرمی پلاستیکی منتقل شد و 5 عدد دانه رست در هر گلدان به فاصله مساوی در 8 تکرار در هر تیمار کاشته شد.
2-2 طرح آزمایش
این پژوهش در طرحکاملاً تصادفی با درصدهای نفتی 2/5، 5، 7/5 و - w/w - %10 به عنوان فاکتور ثابت و50 گرم اینوکلوم قارچ به عنوان فاکتور متغییر انجام شد.
تیمارها شامل، تیمار شاهد غیر نفتی-غیرمیکوریزا - NM0 - ، تیمار غیر نفتی-میکوریزایی - M0 - ، تیمار نفتی-غیرمیکوریزایی - NM2.5% - %2/5، تیمار نفتی-میکوریزایی - M2.5% - %2/5، تیمار نفتی-غیرمیکوریزایی %5 - NM5% - ، تیمار نفتی-میکوریزایی - M5% - %5، تیمار نفتی-غیرمیکوریزایی - NM7.5% - %7/5، تیمار نفتی-میکوریزایی %7/5 - M7.5% - ، تیمار نفتی-غیرمیکوریزایی - NM10% - %10 و تیمار نفتی-میکوریزایی - M10% - %10 بوده است.
نفت خام با 500 گرم خاک در تیمارهای نفتی غیرمیکوریزایی و 450 گرم خاک در تیمارهای نفتی میکوریزایی ترکیب شد و به مدت دو هفته قبل از کاشت گیاه آفتابگردانجهت تبادل کاتیونی در محیط گلخانه نگهداری شد. 10 گرم از اینوکلوم قارچ گلوموس موسه آ به هر یک از دانه رست های آفتابگردان اضافه شد. تعداد دانه رست ها در هر گلدان 5 عدد بوده است. آبیاری گیاهان به صورت روزانه و با آب شهری انجام شد. آنالیزها با نرم افزار SPSS ورﮊن 22 انجام شد.
3-2 تهیه عصاره متانولی جهت سنجش فنل، فلاونول و فلاونوئید
برای تهیه عصاره متانولی، 0/2 کرم وزن تر بافت با 3میلی لیتر متانول در هاون یکنواخت شد و به مدت 20 دقیقه، در دمای 10 درجه سانتی گراد و 5000 دور بر دقیقه سانتریفیوﮊ شد.
1-3-2 سنجش فلاونوئید کل
به 0/5 میلی لیتر از عصاره متانولی 100 میکرولیتر از محلول 10 درصد آلومینیوم کلراید، 100 میکرولیتر پتاسیم استات 1مولار، 1/5 میلی لیتر متانول 80 درصد و 2/8 میلی لیتر آب دیونیزه اضافه گردید. جذب هر یک از نمونه ها بعد از قرار گرفتن در دمای اتاق به مدت 30 دقیقه، با اسپکتوفتومتر Hitachi مدل U-2800 در طول موج 415 نانومتر قرائت شد. غلظت نهایی با توجه به منحنی استاندارد روتین - Rutin - تعیین شد . - Akkol et al., 2008 -
2-3-2 سنجش محتوای فلاونول
به 1 میلی لیتر عصاره متانولی 1 میلی لیتر عصاره متانولی آلومینیوم کلراید .دو.درصد و 3 میلی لیتر سدیم استات 5 درصد اضافه شد و به مدت 2/5 ساعت در دمای اتاق قرار گرفتند. سپس جذب آنها با اسپکتوفتومتر Hitachi مدل U-2800 در طول موج 440 نانومتر قرائت شد. غلظت نهایی با توجه به منحنی استاندارد روتین تعیین شد
