بخشی از پاورپوینت
اسلاید 1 :
گروه صنایع غذایی
آزمایشگاه میکروب شناسی مواد غذایی
(دوره کارشناسی)
جلسه چهارم :آزمون گرم
اسلاید 3 :
مقدمه
یکی از مهمترین ومتداولترین روشهای رنگ آمیزی در میکروبیولوژی است که اولین بار توسط کریستین گرم ابداع شد. دراین رنگ آمیزی باکتریها بر مبنای رنگ باکتری پس ازرنگ آمیزی به دودسته گرم مثبت و گرم منفی تقسیم میشوند. رنگ باکتری پس ازرنگ آمیزی به توانایی حفظ رنگ اول وبه عبارتی به ساختمان دیواره سلولی باکتری بستگی دارد.
اسلاید 4 :
رنگ امیزی گرم
در رنگ آمیزی گرم باکتریهای گرم مثبت پس ازرنگ آمیزی به رنگ بنفش وباکتریهای گرم منفی به رنگ قرمز مشاهده میشود. گرچه هر دو گروه یعنی باکتریهای گرم مثبت و منفی دارای دیواره میباشند ولی فرق بین این دو گروه مربوط به خواصی است که در ساختمان دیواره سلولی آنها وجود دارد. اساس ساختمان در دیواره سلولی باکتریهای گرم مثبت مربوط به لایه ضخیمیاست بنام پپتیدوگلیکان، ولی در باکتریهای گرم منفی ضخامت این لایه به حداقل میرسد.
اسلاید 5 :
مقایسه دیواره باکتری گرم منفی و مثبت
اسلاید 6 :
روش رنگآمیزی گرم
پیش از آغاز رنگ آمیزی نخست باید یک گستره ای از محیط کشت خالص باکتری بر روی لام تهیّه کنیم، در ادامه مراحل رنگ آمیزی گرم به قرار زیر هستند: نخست رنگ کریستال ویوله رابه مدت ۳۰ تا ۴۵ ثانیه برروی فروتی باکتری روی لام می ریزیم، درنتیجه همه باکتریها به رنگ بنفش درخواهد درآمد.
پس از شستشوی فروتی با آب، رنگ کریستال ویوله را با افزودن لوگول به مدّت ۳۰ تا ۴۵ ثانیه تثبیت می کنیم. لوگل باکریستال ویوله ترکیب شده وایجاد کمپلکسهایی مینمایید که باعث تثبیت رنگ کریستال ویوله درداخل دیواره سلولی باکتری میشود. پس ازاین مرحله، همه باکتریها کماکان به رنگ بنفش مشاهده میشوند .
اسلاید 7 :
مرحله رنگ زدایی:
مهمترین مرحله رنگ آمیزی است. دراین مرحله پس از شستشو لام با آب لام به مدت ۱۵ تا۲۰ ثانیه در معرض موادرنگ زدا مانند الکل استون قرار میگیرد سپس با آب مورد شستشو قرار میگیرد. درباکتریهای گرم منفی که دارای لایههای پپتیدو گلیکان محدود وغشای خارجی غنی از چربی هستند این حلال باعث حذف این لایهها وغشا میگردد وباکتری رنگ مراحل قبل راازدست میدهد. ولی درباکتریهای گرم مثبت به علت ضخامت زیاد لایهٔ پپتیدوگلیکانی وعدم وجود لیپید فراوان در غشا رنگ مرحله قبل ازغشا خارج نمیشود .درنتیجه پس ازاین مرحله باکتریهای گرم منفی بی رنگ ولی باکتریهای گرم مثبت کماکان بنفش باقی خواهند ماند .
اسلاید 8 :
مرحله رنگ آمیزی مجدد:
در انتها سطح گستره راباسافرانین یا فوشین (قرمز رنگ) به مدت ۳۰ تا ۴۵ ثانیه میپوشانیم سپس باآب شستشو داده و پس از خشک شدن بامیکروسکوپ مورد بررسی قرار میگیرد. دراین مرحله باکتریهای بی رنگ (باکتریهای گرم منفی) به رنگ قرمز درمیآیند وباکتریهای بنفش (باکتریهای گرم مثبت) بدون تغییر رنگ باقی میمانند .
اسلاید 9 :
مراحل رنگآمیزی گرم بصورت شماتیک
اسلاید 10 :
میکروارگانیسم ها در زیر میکروسکوپ
اسلاید 12 :
انواع رنگهای مورد استفاده
