بخشی از مقاله
چکیده
نیتریک اکساید - - NO بعنوان یک سیگنال بیولوژیکی مهم که هم اثرات درون سلولی و هم اثرات بین سلولی را اعمال میکند،شناخته شده است. نیتریک اکساید بوسیلهی ایزوفرمهای آنزیم نیتریک اکساید سنتاز - - NOS از ال-آرژنین سنتز میشود. این مطالعه برای ارزیابی اثرات مهار نیتریک اکساید سنتاز بر پراکندگی سلولهای کومولوس اووسیتهای گوسفند و بز انجام شده بود. اووسیتها در محیطهای حاوی 0,1، 1 و 10 میلیمولار - L-NAMEمهارکنندهی - NOS کشت داده شده بودند و نرخ پراکندگی سلولهای کومولوس ارزیابی شده بود. در مقایسه با گروه کنترل، L-NAME در بالاترین غلظت - - 10mM، نرخ پراکندگی کامل را در اووسیتهای گوسفند کاهش داده بود. به هر حال هیچ اختلاف معنیداری در میان غلظتهای مهارکننده، در نرخ پراکندگی اووسیتهای بز مشاهده نشده بود. این نتایج احتمالا نشان میدهد که اووسیتهای گوسفند نسبت به اووسیتهای بز حساسیت بیشتری به کمبود نیتریک اکساید دارند.
کلمات کلیدی: نیتریک اکساید سنتاز- پراکندگی سلولهای کومولوس- گوسفند- بز- اووسیت.
مقدمه پراکندگی کومولوس فرایندی است که به موجب آن سلولهای کومولوس هیالورونان ترشح میکنند. گفته شده است که فرم فعال شدهی فاکتور GDF-9 ممکن است ترشح هیالورونان را القا کند . - 9 - این فاکتور همچنین سیکلواکسیژناز 2 را فعال میکند.
سیکلواکسیژناز برای سنتز پروستاگلندین لازم است. مطالعات بعدی نشان داده است که پروستاگلندین E2 برای پراکندگی کومولوس ضروری است . - 4 -
نیتریک اکساید - NO - یک رادیکال آزاد بشدت فعال است که در مسیرهای سیگنالی درون و بینسلولی در مراحل مختلفی از تولیدمثل درگیر میشود. این ترکیب توسط سه ایزوفرم مختلف نیتریک اکساید سنتاز - NOS - از ال-آرژنین تولید میشود - . - 3
مشخص شده است که نیتریک اکساید برای پراکندگی مطلوب سلولهای کومولوس، در اووسیت موش، گاو و خوک 2 - ، 8 و - 10 لازم است.
از آنجا که به نظر میرسد مطالعهای در مورد اثرات نیتریک اکساید بر پراکندگی اووسیتهای گوسفند و بز وجود ندارد، در این مطالعه ما بر آن شدیم تا با استفاده از - L-NAME - 1 -nitro-L-argininemethyl ester که آنالوگی از ال-آرژنین است، کمبود نیتریک اکساید را بر پراکندگی سلولهای کومولوس اووسیت گوسفند و بز بررسی کنیم. مواد و روش کار تخمدانهای گوسفندی و بزی از یک کشتارگاه محلی جمعآوری و به آزمایشگاه منتقل شدند. فولیکولهای با قطر 2-5 میلیمتر
آسپیره شدند. کمپلکسهای کومولوس- اووسیت انتخاب شده 3 بار با محیط شستشو و 2 بار با محیط کشت بلوغ شسته میشدند و سپس برای بلوغ به پتریدیشهای پلاستیکی دارای قطرههای 50ʽl محیط کشت که زیر روغن معدنی بودند منتقل میشدند و به مدت 26 ساعت - برای هر دو گونه - در انکوباتور نگهداری میشدند. محیط کشت بلوغ مورد استفاده TCM-199 بود که با FBS %10، 0.5 ʽg/ml FSH، 5 ʽg/ml LH و پنیسیلین و استرپتومایسین مکمل شده بود. غلظتهای مختلف 0 - ، 1 و 10 میلیمولار - L-NAME برای ارزیابی عملکردش بر پراکندگی کومولوس اووسیتهای گوسفند و بز به محیط کشت بلوغ اضافه شد. چنین غلظتهایی توسط در موش استفاده شده است.
پراکندگی کومولوسها با استفاده از روش به 3 دسته تقسیم میشدند .1 پراکندگی کامل - پراکندگی تمامی سلولهای کومولوس - .2 پراکندگی جزئی - پراکندگی لایههای بیرونی کومولوس - .3 بدون پراکندگی - عدم پاسخ سلولهای کومولوس - . نتایج اثر L-NAME بر پراکندگی سلولهای کومولوس با استفاده از آزمون کای اسکوار ارزیابی شد و بدین منظور از نرم افزار SAS نسخه ی 9/12 استفاده گردید.
نتایج بعد از 26 ساعت کشت، پراکندگی سلولهای کومولوس اووسیت گوسفند با بالاترین غلظت مهارکننده - 10 میلیمولار - متاثر شده بود و درصد کمتری از اووسیتها پراکندگی کامل را نشان داده بودند. به هرحال دیگر غلظتها اختلاف معنیداری با تیمار کنترل نداشتند - جدول. - 1 در مورد اووسیتهای بز هیچ یک از غلظتهای مهار کننده تاثیر معنیداری بر پراکندگی سلولهای کومولوس نداشتند - جدول. - 2
بحث:
این مطالعه نشان داد که بالاترین غلظت 10 - L-NAME میلیمولار - ، درصد اووسیتهای با پراکندگی کامل کومولوس را به طور معنیداری در گوسفند کاهش میدهد. نتایج مشابهی در موش - 1 - ، گاو - 8 - و موش صحرایی - 6 - نیز بدست آمده است. از طرف دیگر، گرچه غلظت بالای مهارکننده تا حدودی توانست پراکندگی کامل را در اووسیتهای بز کاهش دهد اما این تفاوت معنیدار نبود.
نیتریک اکساید یک رادیکال آزاد با عملکردهای فیزیولوژیکی متعدد و حیاتی در سلولهای پستانداران است. به هر حال مکانیسم دقیق تاثیر سیستم NO/NOS بر بلوغ اووسیت به طور کامل یافت نشده است.
مهارکنندهی L-NAME یک مهارکنندهی غیرانتخابی برای NOS است. این مهارکننده فعالیت تمامی ایزوفرمهای NOS را مهار میکند. این مهارکننده در واقع آنالوگی از ال-آرژنین است که به صورت رقابتی باعث مهار NOS میشود.
گزارش شده است که نیتریک اکساید تولید شده از iNOS برای پراکندگی سلولهای کومولوس و بلوغ میوزی اووسیت-های موش ضروری است . - 7 -
115 پیشنهاد کرد که پروستاگلندین - PGE2 - E2 ممکن است نقشی در تحریک پراکندگی سلولهای کومولوس اووسیت موش داشته باشد. علاوه بر این، گزارش کردند که نیتریک اکساید تولید PGE2 را در اووسیت خرگوش تحریک میکند. آنها نشان دادند که تولید تخمدانی PGE2 و PGF2 به طور معنیداری با L-NAME بلوکه میشود و استفاده از نیتریک اکساید با منشا خارجی تولید پروستاگلندینها را تحریک میکند. با توجه به نتایج حاصله از مطالعه اخیر، پیشنهاد می شود که اثرات L-NAME بر پراکندگی کومولوس اووسیت گوسفند ممکن است به دلیل تاثیر مهاری آن بر تولید PGE2 بواسطهی کاهش در تولید نیتریک اکساید باشد. از طرف دیگر ممکن است بالاترین غلظت L-NAME سنتز هیالورونان و دیگر فاکتورهای تولید شده بواسطه کمپلکس کومولوس- اووسیت همچون فاکتور GDF9 که نقش مهمی در پراکندگی سلولهای کومولوس دارد را کاهش داده باشد،
اما عدم تاثیرپذیری اووسیتهای بز به مهار NOS نسبت به اووسیتهای گوسفندی، شاید مقاومت بیشتر اووسیتهای بز به کمبود نیتریک اکساید باشد. همانطور که در مطالعات پیشین - 8 - اووسیتهای گاو نسبت به اووسیت خوک حساسیت بالاتری به یک غلظت مشخص از مهارکننده نشان دادند، به نظر میرسد برای مهار پراکندگی سلولهای کومولوس اووسیت بز نیز به غلظتهای بالاتری از مهارکننده لازم باشد.
در پایان این نتایج نشان میدهد، گرچه اووسیتهای گوسفند و بز برای پراکندگی کامل سلولهای کومولوس به نیتریک اکساید نیاز دارند، اما اووسیتهای گوسفند حساسیت بیشتری به کمبود این ترکیب دارند.
