بخشی از مقاله
چکیده
تب کیو یک بیماری مشترک بین انسان و دام با انتشار جهانی است که در نواحی جغرافیایی با آب و هوای متفاوت گزارش شده است. گلههای گوسفند عمدهترین مخازن این بیماری هستند. هدف از بررسی حاضر جستجوی ژنومی کوکسیلا بورنتی در نمونه های سواب واژینال گوسفندان با سابقه سقط جنین در شهرستان خرم آباد بود. در این مطالعه مقطعی - توصیفی طی ماههای بهمن تا اردیبهشت سال 1396در مجموع 80 نمونه جمع آوری گردید. برای اثبات حضور کوکسیلا واکنش زنجیرهای پلیمراز آشیانهای انجام گرفت. نتایج نشان داد که 10 نمونه 12/5 - درصد - به کوکسیلا آلوده هستند. با توجه به شیوه نگهداری سنتی دام و جمعیت بالای گوسفندان شهرستان این باکتری یکی از مهمترین علل سقط جنین در این منطقه می باشد.
کلمات کلیدی: سقط جنین کوکسیلایی،گوسفند، خرمآباد، Nested-PCR
مقدمه
کوکسیلوز یکی از شایعترین بیمارهای باکتریایی مشترک بین انسان و دام است که در ایران بومی بوده و طیف میزبانی وسیعی دارد. نشخوار کنندگان به عنوان منبع اصلی برای ایجاد عفونت در انسان در نظر گرفته می شوند. سقط جنین و خروج ترشحات عفونی از جفت، مهمترین تظاهر بالینی مهم این باکتری در حیوانات است. تشخیص بیماری در انسان و دامها بر پایه انجام تستهای باکتریولوژیک و ایمونولوژیک میباشد. استاندارد طلایی جداسازی ارگانیسم است اما با توجه به مقاومت بالای عامل بیماری زا در محیط و انتقال آن ازطریق هوا کوکسیلا در زمرهی پاتوژنهای کلاس سه ایمنی زیستی است و کشت آن باید با دقت بسیاری انجام شود.
بنابراین کاربرد روشهای نوین تشخیصی نظیر واکنش زنجیرهای پلیمراز که ساده، سریع و حساس و نیز اختصاصیت بیشتری دارد برای تشخیص پیشنهاد میشود. مطالعات پراکنده انجام شده در ایران نشان می دهد که تب کیو، احتمالا یک عفونت اندمیک در ایران است و نقش آن تهدید سلامتی حیوانات و انسان، به خاطر فراوانی موارد تحت بالینی و عدم تمایز موارد بالینی از بیماری هایی نظیر تب مالت و انفلوانزا، بسیار دست کم گرفته شده است. این بررسی با هدف تعیین میزان حضور ژنومی کوکسیلا بورنتی در ترشحات واژینال گوسفندان سقط کرده در شهرستان خرم آباد با روش Nested-PCR انجام خواهد شد.
روش کار
در این مطالعه مقطعی - توصیفی از بهمن تا اردیبهشت ماه سال 1396 در مجموع تعداد 80 نمونه سواب واژینال گوسفندان با سابقه سقط جنین در شهرستان خرم آباد جمعآوری شد. جهت استخراج DNA، از کیت - Gene All cell SV mini 250 - طبق دستورالعمل شرکت سازنده استفاده شد. کیفیت DNA استخراج شده با استفاده از دستگاه نانودراپ در طول موج 260 به 280 نانومتر مورد ارزیابی قرار گرفت. برای بررسی حضور DNA ژنومی کوکسیلا بورنتی در نمونهها، از واکنش زنجیرهای پلیمراز آشیانهای - Nested-PCR - استفاده میشود. توالی آغازگرهای مورد استفاده برای تکثیر ژن com1 که کد کننده پروتئین غشای خارجی کوکسیلا بورنتی میباشد ، مطابق با جدول 1 براساس مطالعه Zhang و همکاران - 1998 - و Fretz و همکاران - 2007 - انتخاب گردید . - 1 -
برای انجام PCR غلظت بهینه مواد به کار رفته در واکنش، در حجم نهایی 25 میکرولیتر استفاده میشود. برنامه زمانی و دمایی ترمالسایکلر مطابق با جدول 2 انجام گردید. برای NestedPCR از پرایمرهای OMP3-OMP4 استفاده میشود.در این مرحله همه شرایط از قبیل مخلوط واکنشگرهای PCR و برنامه زمانی و دمایی مطابق مرحله PCR اجرا شد با این تفاوت که DNA الگو در این مرحله، 2 میکرولیتر از محصول PCR مرحله اول میباشد که به نسبت 1 به 200 رقیق و به مخلوط واکنش اضافه میشود. در این بررسی، کنترل مثبت DNA ژنومی کوکسیلا بورنتی استاندارد - Genekam Biotechnology AG, Duisburg, Germany - Serial Number: 3154 و کنترل منفی شامل مخلوط کلیه واکنشگرهای PCR بدون حضور DNA در نظر گرفته و به جایDNA، آب مقطر استریل به لولهها اضافه خواهد شد.
نتایج
نتایج بدست آمده از PCR نمونهها نشان داد که از مجموع 80 نمونه ، 10 نمونه 12/5 - درصد - از نظر وجود توالی اختصاصی ژن Com مثبت بودند. در کلیه نمونههای مثبت باند 438 bp تکثیر و مشاهده شد - شکل . - 1
