بخشی از مقاله
چکیده
بروسلوز یا تب مالت یکی از شایعترین بیماري هاي مشترك بین انسان و دام است که در بسیاري از کشورهاي خاورمیانه من جمله ایران به عنوان یک معضل بهداشتی و اقتصادي مورد توجه ویژه قرار دارد. هدف از بررسی حاضر جستجوي بروسلا ملیتنسیس در نمونه هاي سواب واژینال گوسفندان با سابقه سقط جنین در شهرستان خرم آباد با روشMultiplex Pcr بود. در این مطالعه مقطعی– توصیفی طی ماههاي بهمن تا اردیبهشت سال 1396در مجموع 80 نمونه جمع آوري گردید. براي اثبات حضور جنس بروسلا در کلیه نمونهها ازمون PCR منفرد با استفاده از پرایمرهاي اختصاصی B4 وB5 و براي جستجوي بروسلا ملیتنسیس با بهرهگیري از پرایمرهاي اختصاصی از آزمون PCR چندگانه انجام گرفت. نتایج نشان داد که 13 نمونه 16/25 - درصد - به بروسلا آلوده هستند. با توجه به شیوه نگهداري سنتی دام و جمعیت بالاي گوسفندان شهرستان این باکتري مهمترین علت بروسلوز انسانی در منطقه می باشد.
واژه هاي کلیدي: سقط جنین بروسلایی-گوسفند- خرمآباد- Multiplex Pcr
مقدمه
بروسلوز یا تب مالت یکی ازشایعترین بیمارهاي باکتریایی مشترك بین انسان و دام است که در ایران و بسیاري از کشورهاي دیگر بومی بوده و طیف وسیعی از پستانداران را درگیر میکند. در جنس بروسلا دوازده گونه وجود دارد که گونههاي، آبورتوس و ملیتنسیس گونههاي اصلی آلوده کننده انسان میباشند - . - 6 بروسلوز در دامها با بروز اختلالات تولید مثلی نظیر سقطجنین، جفت ماندگی، نازایی و کاهش 10 الی 20 درصدي تولید شیر همراه است. تشخیص بروسلوز در انسان و دامها بر پایه انجام تستهاي باکتریولوژیک و ایمونولوژیک می باشد لیکن استفاده از تستهاي سرولوژیکی به طور غیر مستقیم براي تشخیص بیماري توصیه می شود.
بسیاري از تستهاي سرولوژیکی از نظر حساسیت نتایج مثبت کاذب دارند و از نظر اختصاصیت داراي نتایج منفی کاذب هستند. استاندارد طلایی جداسازي ارگانیسم است اما نیاز به دوره انکوباسیون طولانی مدت دارد و حساسیت آن به خصوص در موارد مزمن کم است. کاربرد روشهاي نوین تشخیصی نظیر واکنش زنجیرهاي پلیمراز که ساده، سریع و حساس و نیز اختصاصیت بیشتري نسبت به تستهاي سرولوژیکی دارد براي تشخیص پیشنهاد می شود . - 5 - شناسایی دقیق گونههاي بروسلا جهت مطالعات اپیدمیولوژیکی در انسان و حیوانات اهلی، به منظور به کارگیري راههاي کنترلی مناسب اهمیت دارد.
اهداف
بلحاظ معضلات مهم بهداشتی و اقتصادي ناشی از بیماري این مطالعه با هدف بررسی بروسلا در نمونه هاي سواب واژینال گوسفندان با سابقه سقط جنین در شهرستان خرم آباد با روش Multiplex Pcr انجام گرفت.
روش کار
در این مطالعه مقطعی - توصیفی از بهمن تا اردیبهشت ماه سال 1396 در مجموع تعداد 80 نمونه سواب واژینال گوسفندان با سابقه سقط جنین در شهرستان خرم آباد جمعآوري شد. جهت استخراج DNA، از کیت - Gene All cell SV mini 250 - طبق دستورالعمل شرکت سازنده استفاده شد. براي اثبات حضور جنس بروسلا در نمونههاي شیر، آزمون PCR با استفاده از پرایمرهاي B4 و B5 ارائه شده توسط Baily و همکاران - جدول - 1 انجام گردید . - 5 - این پرایمرها که موجب تکثیر ژن محافظت شده - bcsp31 ژن کد کننده پروتئین غشاء 31کیلو دالتونی بروسلا آبورتوس - می شود، اختصاصی جنس بروسلا می باشد. برنامه زمانی و دمایی ترمالسایکلر مطابق با جدول 2 انجام گردید.مخلوط نهایی براي انجام آزمون Multiplex PCR براي هر نمونه، 25 میکرولیتر بوده است. به جزء پرایمرها، مخلوط واکنشگرهامطابق با آزمون PCR تعیین جنس بروسلا بود. در این بررسی از سویه واکسن - Razi institute, Iran - Rev.1به عنوان کنترل مثبت براي بروسلا ملیتنسیس و براي کنترل منفی از آب دیونیزه استفاده گردید.
نتایج و بحث
نتایج بدست آمده از PCR نمونهها نشان داد که از مجموع 80 نمونه ، 13 نمونه 16/25 - درصد - از نظر وجود توالی اختصاصی ژنBcsp31 در بروسلا مثبت بودند. در کلیه نمونههاي مثبت باند 223 bp تکثیر و مشاهده شد - شکل . - 1 نتایج حاصل از Multiplex PCR با پرایمرهاي اختصاصی تعیین گونه نشان داد که هر 13 نمونه مثبت، واجد باند 731 bp گونه بروسلا ملی تنسیس بودند - شکلسقط جنین از نظر اقتصادي بسیار با اهمیت و زیان هاي اقتصادي آن قابل توجه است زیرا صرف نظر از کاهش تولد بره و بزغاله باعث وارد آمدن زیان هاي اقتصادي سنگینی بر اثر کاهش تولید شیر و عوارض ثانویه آن پس از سقط جنین از جمله ناباروري و سایر زیان هاي مدیریتی به دامدار می شود. عو امل مسبب سقط جنین در دو گروه عفونی و غیر عفونی طبقه بندي می شوند ولی غالب موارد تشخیص داده شده را عوامل عفونی تشکیل داده و کمتر به عوامل غیر عفونی توجه می شود.
از آنجایی که روش PCRتشخیص باکتري هاي کند رشد و پر مشکل را تسهیل کرده و امکان تمایز بین گونه ها و سویه ها نیز فراهم شده است. این روش در تشخیص بروسلاها تکنیکی حساس نسبت به کشت خون و روش هاي سرولوژي می باشد. در مطالعه شریف زاده وهمکاران - 1388 - از میان 38 نمونه جنین سقط شده از گله هاي مختلف گوسفند در استان چهارمحال وبختیاري 5 مورد - %13/1 - آلودگی به بروسلا گزارش نمودند . - 2 - حسن آبادي وهمکاران - 1389 - به بررسی فراوانی سقط جنین هاي بروسلایی در گوسفنداري هاي اطراف تبریز باروشهايPCRوELISA پرداختند و از 100نمونه آلوده 12 نمونه را آلوده به بروسلا در هردو روش یافتند . - 1 -
