بخشی از مقاله
چکیده
زمینه و هدف: تب کیو عفونت زئونوزي است که در سراسر دنیا به جز نیوزیلند شیوع دارد و عامل اتولوژیک آن کوکسیلا بورنتی - Coxiella burnetii - می باشد. هدف از این مطالعه شناسایی ژنومی کوکسیلا بورنتی در گله ي گوسفند و بز در منطقه غرب مازندران به روش واکنش زنجیره اي پلی مراز آشیانه هاي می باشد.
روش تحقیق: این مطالعه مقطعی-توصیفی در سال 1394 در آزمایشگاه دانشگاه آزاد واحد تنکابن انجام شد. جهت بررسی حضور DNA ژنومی کوکسیلا بورنتی در نمونه ها از روش آزمون واکنش زنجیره اي پلیمراز آشیانه اي استفاده شد. نتیج با spss-20 آنالیز شد.
یافته ها: نتایج نشان داد، از مجموع 150 نمونه گوسفند و بز، 21 نمونه 14 - درصد - نمونه از نظر وجود توالی اختصاصی ژن com1 در کوکسیلا بورنتی، مثبت بودند.
نتیجه گیري: شیوع بالاي عفونت پیامدهاي زیانباري را در پی خواهد داشت بنابراین بایستی سیاست هایی جهت کنترل و پیش گیري از این عفونت لحاظ گردد.
مقدمه
کوکسیلا بورنتی یک عامل بالقوه براي سقط جنین در حیوانات اهلی در ایران می باشد و قابل انتقال بین انسان و دام است که که در حیوانات، تحت عنوان کوکسیلوزیس شناخته میشود. این بیماري که با نامهاي تب بالکان و تب کشتارگاه نیز شناخته میشود، در حیوانات معمولاً علائم بالینی مشخصی ایجاد نمیکند ولی در انسان تواندمی یک بیماري حاد عفونی ایجاد نماید که عمدتاً بطور ناگهانی شروع شده و با نشانههایی مشابه آنفلوانزا شامل تب شدید، سردرد، دردهاي عضلانی، لرز، تعرق و بیاشتهایی ادامه مییابد و در صورت عدم درمان میتواند منجر به التهاب ریه، هپاتیت، میوکاردیت و در نهایت مرگ شود
نام تب کیو نخستین بار براي توصیف بیماري تب دار ناشناخته اي در کارگران بسته بندي گوشت در بریسبین استرالیا استفاده شد. عامل این بیماري از کارگران آلوده جدا شد و به عنوان ریکتزیا شناسایی گردیدتقریباً. به طور هم زمان، این ارگانیسم از کنه هاي چوب در مونتانا جدا شد. به افتخار کوکس از آمریکا و بورنت از استرالیا که مطالعات اولیه اي روي این ارگانیسم انجام دادند، آن را کوکسیلا بورنتی - coxiella burnetii - نامیدند
بیماري در حیوانات بیشتر به شکل تحت بالینی است اما امکان بروز نشانه هاي بالینی به ویژه اختلالات تولیدمثلی نظیر سقط، مرده زایی و ناباروري وجود دارد. گاو و گوسفند و بز منابع اصلی بیماري براي انسان به شمار می روند.قالانت عامل به انسان عمدتاً از طریق استنشاق آئروسول هاي آلوده می باشد اما ممکن است در اثر مصرف شیر خام یا محصولات لبنی آلوده هم اتفاق افتد
کوکسیلا بورنتی می تواند انسان، دام هاي اهلی، حیوانات خانگی، وحشی و حشرات را عفونی نماید. از میان حیوانات اهلی، نشخوارکنندگانی چون بز، گوسفند و گاو بیشترین مخازن کوکسیلا بورنتی محسوب می شوند. نشخوارکنندگان در هنگام زایمان یا سقط مقادیر بسیار بالایی از ارگانیسم را به محیط دفع می کنند از این رو این مواد به عنوان اصلی ترین منابع آلودگی محسوب می شوند
نتایج مطالعات نشان می دهد که روش واکنش زنجیره ي پلی مراز تک مرحله اي جهت تشخیص کوکسیلا بورنتی داراي حساسیت کافی نمی باشد و پیشنهاد می شود که از روش واکنش زنجیره ي پلی مراز آشیانه هاي استفاده گردد. این روش نسبت به روش هاي کلاسیک از سرعت، دقت، اختصاصیت و حساسیت بالایی برخوردار است .
گوسفند در انتقال و شیوع هاي انسانی از اهمیت بالایی برخوردار است و موارد متعددي نیز گزارش شده است - Angelakis& . - Raoult., 2010 در مطالعه سخایی و خلیلی - - 2009 در جنوب شرق ایران 29/42 درصد از گله هاي گوسفند انجام از نظر سرولوژیک مثبت بودند
بیماري تب کیو در ایران بسیار جدي بوده و خطرات بالقوه آن در تهدید سلامت و بهداشت حیوانات و بخصوص انسان، احتیاج به توجه و بررسی بسیار بیشتري دارد. هدف از انجام مطالعه حاضر بررسی شناسایی ژنومی کوکسیلا بورنتی در گله ي گوسفند و بز در منطقه غرب مازندران به روش واکنش زنجیره اي پلی مراز آشیانه هاي است، تا با مشخص شدن شیوع بیماري، انجام برنامه کنترل بیماري درجمعیت دامی در دستور کار سیاست گذاران بهداشتی قرار گیرد.
روش تحقیق
این مطالعه مقطعی-توصیفی در سال 1394 در آزمایشگاه دانشگاه آزاد واحد تنکابن انجام شد.
جمع آوري نمونه: نمونه گیري با استفاده از لوله هاي خلا مخصوص و داراي فعال کننده لخته - Clot activator - از 5 گله مختلف و از هر گله 10نمونه به طور کاملاً تصادفی و بدون تفکیک جنسیتی از سه شهر چالوس، تنکابن و رامسر نمونه گیري وریدي به عمل آمد. پس از انتقاد کامل نمونه هاي ارسالی به آزمایشگاه، تمامی نمونه ها به مدت 10 دقیقه با دور 2500 سانتریفیوژ شده و سرم جدا شده تا روز انجام آزمایش در فریزر منهاي 20 درجه سانتی گراد نگه داري شدند.
بررسی ژنومی: جهت بررسی حضور DNA ژنومی کوکسیلا بورنتی در نمونه ها از روش آزمون واکنش زنجیره اي پلیمراز آشیانه اي استفاده شد. استخراج ژن با استفاده از کیت تجاري Gene All cell SV mini 250P ساخت کره جنوبی انجام شد. توالی آغازگر مورد استفاده براي تکثیر ژن com1 که کد کننده پروتئین غشاي خارجی کوکسیلا بورنتی می باشد، بر اساس روش فرتیز و همکاران - 2007 - براي انجام واکنش در مرحله اول، غلظت بهینه مواد به کار رفته در واکنش، در حجم نهایی 25 میکرولیتر به صورت زیر استفاده شد: 2/5 میکرولیتر بافر، 2 میکرولیتر DNA الگو، 1/5 میلی مولار MgCl2، 1 میکرومول از هر پرایمر با غلظت 10 پیکومول، 0/3 واحد آنزیم DNA پلی مراز Taq و 1 میکرولیتر مخلوط .dNTP مخلوط فوق در دستگاه ترموسایکلر قرار داده شد.
برنامه دمایی به صورت ذیل تنظیم شد : 94 درجه سانتی گراد به مدت 3 دقیقه، 30 چرخه دمایی به ترتیب 94 درجه سانتی گراد به مدت 45 ثانیه، 56 درجه سانتی گراد به مدت 45 ثانیه و 72 درجه به مدت 45 ثانیه، در مرحله نهاي دماي 72 درجه به مدت 5 دقیقه صورت گرفت. مرحله دوم نیز ماننده مرحله اول انجام شد. مشخصات پرایمرها در جدول 1 آمده است. محصولات حاصل از واکنش مرحله دوم در ژل آگارز 1 درصد حاوي اتیدیوم بروماید الکتروفورز گردید و با دستگاه تصویربرداري از ژل مشاهده و بررسی شد.
