بخشی از مقاله
چکیده
در این پژوهش ،کاربرد نانوذرات گوگرد به کمک شیوه DLLME تلفیق شده با اسپکتروفلوئوریمتری جهت استخراج، پیش تغلیظ و آنالیز جم فیبروزیل، مد نظر بوده است. حلال میکرو استخراج و حلال پراکنده ساز حاوی نانوذرات، مستقیمأ به داخل محلول آبی حاوی - TCتیوکروم - تزریق گردید .بعد از سانتریفوژ کردن آن، شاهد جداسازی فازها، با راسب شدن قطرات ریز حلال میکرواستخراج در ته یک لوله آزمایش بودیم.
فاز ته نشین شده برای اندازه گیری جم فیبروزیل به داخل یک اسپکتروفلوئوریمتر با طول موجهای تحریک/نشر برابر با375/438 nm انتقال یافت. تحت شرایط بهینه تجربی، نتایج این روش به این صورت بدست آمد: محدوده خطی پویا: 0.2-100 ng/ml، محدوده تشخیص:0.06ng/ml، و انحراف استاندارد نسبی:. %3.0 این روش به طور مطلوبی جهت اندازه گیریهای مربوط به ادرار انسان و فرمولاسیونهای داروئی قابل کاربرد است. صحت نتایج حاصله از طریق سنجش ریکاوری و با مقایسه با سایر روشها سنجیده و بسیار مطلوب تشخیص داده شد.
-1مقدمه
جم فیبروزیل یا 5 - -5،-2دی متیل فنوکسی - -2،-2دی متیل پنتانوئیک اسید،یک مشتق بنزنی والریک اسید با خصلت چربی دوستی و حلالیت ضعیف در آب،می باشد.روشهای آنالیتیکی متعددی،برای اندازه گیری جم فیبروزیل ، هم در نمونه های بیولوژیکی و هم در سنتزهای داروئی وجود دارند. تعدادی ازاین روشها عبارتند از اسپکتروفتومتری و اسپکتروفلوئوریمتری - 1-3 - ، HPLC و ولتامتری. تعدادی از این روشهائی که برای اندازه گیری جم فیبروزیل به کار می روند،زمان بر،خسته کننده یا غیرحساس و غیر مقرون به صرفه اقتصادی میباشند.
علاوه بر آن،سطح جم فیبروزیل در بعضی نمونه های حقیقی،پائینتر از محدوده تشخیص این تکنیکها است.با توجه به این موارد،نیاز به روشی جهت اندازه گیری جم فیبروزیل در نمونه های داروئی و بیولوژیکی است که دارای مزایائی از قبیل ساده بودن،حساس بودن،مقرون به صرفه اقتصادی بودن و بدون داشتن مراحل زمان بر،باشد.
ازینرو،استفاده از روشی که شامل مراحل جداسازی و پیش تغلیظ بوده و بر پایه روش میکرواستخراج مایع-مایع پراکنده استوار است،روشی است بسیار مناسب وکاربرد آن با توجه به مزایائی از قبیل کارآمدی،ارزان و ساده بودن،بر سایر روشها ترجیح داده می شود.اصول،مزایا وکاربردهای DLLME، در سالیان اخیر به خوبی شناخته شده است.
روش DLLME، به نحو مناسبی جهت پیش تغلیظ و میکرواستخراج محدوده وسیعی از ترکیبات آلی و یونهای فلزی در نمونه های متفاوت،به کار برده میشود. DLLME، یک روش کار آمد استخراج حلال اصلاح شده است و نسبت فاز پذیرنده به دهنده،به نحو چشمگیری در مقایسه با سایر روشهای استخراج،پائین است.سادگی کار،سرعت عمل،حجم نمونه پائین، هزینه پائین و فاکتور غنی بالا،بعضی از مزایای این روش است.
از سوی دیگر،روشهای اسپکتروفلوئوریمتری،یکی از متداولترین روشهاست و بواسطه داشتن مزایائی از قبیل سادگی روش اجرا،حساسیت،سرعت،دقت و صحت بالا،و در دسترس بودن دستگاهوری از محبوبیت بالائی برخوردار است.مزایای آنالیتیکی کاربرد فلوئورسانس برای اندازه گیری جم فیبروزیل عبارتند از:گزینش پذیری بالا،حساسیت مطلوب و محدوده پویای وسیع.
علاوه بر آن، DLLME، از کارآمدی بالا در استخراج برخوردار است.در این تحقیق،برای اولین بار،یک روش ترکیبی شامل استفاده از نانوذرات گوگرد به کمک روش DLLME و اندازه گیری فلوئوریمتریک جم فیبروزیل مورد استفاده قرار گرفته است.نتایج بدست آمده نشان داد که این روش برای پیشگوئی غلظتهای جم فیبروزیل در دوزهای داروئی و نمونه های ادرار انسان بدون آماده سازی اولیه و خسته کننده، بسیار مطلوب میباشد.
-2بخش تجربی
-1-2دستگاهوری: تمام اندازه گیریهای فلوئورسانس، با استفاده از یک اسپکتروفلوئوریمتر:LS 5،پرکین المر مجهز به لامپ تخلیه زنون و میکروسل کوآرتز،با یک طول مسیر10 mm= و حجم55 l = ،انجام میگیرد.شکافهای تحریک ونشر،هر دو،15nm میباشند.یک سانتریفوژ از شرکت هتیچ آلمانی جهت عمل سانتریفوژ و یک PHمتر هریسائوی سوئیس مدل 692،با یک الکترود ترکیبی شیشه ای و معرف یونیورسال PHاز مرک آلمان،برای اندازه گیریهایPH بکار برده شد.یک سمپلر قابل تنظیم - - 10- 100 ʽl ،از شرکت اپندورف،هامبورگ،آلمان و یک سرنگ 1میلی لیتری از هامیلتون،آمریکا.
-2-2روش کار:برای نانو ذرات گوگرد در تلفیق با DLLME، تحت شرایط بهینه ،10/0 میلی لیتر محلول نمونه شامل آنالیت با PH=13 به داخل یک لوله آزمایش شیشه ای با ته مخروطی،منتقل گردید.بعد از چند ثانیه،0/50میلی لیتر استن - حلال پراکنده ساز - شامل 122 میکرولیتر کلروفرم - حلال میکرواستخراج - به سرعت به داخل یک محلول نمونه با استفاده از یک سرنگ ا میلی لیتری تزریق گردید.یک محلول ابری شکل - آب،استن،کلروفرم - در لوله آزمایش تشکیل شد.
سپس نانوذرات افزوده شدند.سپس به مدت 2 دقیقه ، مخلوط را در سرعت4000 rpm سانتریفوژ کردیم سپس،قطرات ریز پراکنده کلروفرم،در ته لوله آزمایش مخروطی شکل راسب شدند - - 60 l وسپس این فاز ته نشین شده با استفاده از یک سمپلر برداشته شد.نهایتأ،میکروسل در اسپکتروفلوئوریمتر،جهت حصول طیفهای مربوطه قرار گرفت.شدت فلوئورسانس،با توجه به طول موج تحریک 375 nm اندازه گیری شد و 438nm بدست آمد.
-3نتایج و بحث
در این روش تلفیقی DLLME با اسپکتروفلوئوریمتری، جم فیبروزیل به عنوان آنالیت نمونه،جهت بررسی میزان قابلیت عملی این تلفیق،انتخاب شد.جم فیبروزیل با فری سیانید در محیط قلیائی واکنش کرده و متعاقبأ در یک حجم پائین از حلال میکرواستخراج به دست آمده واز فاز آبی یا مخلوط بیولوژیکی جدا می گردد.
اثر عوامل مختلف اثرگذار بر شرایط استخراج،نظیر نوع حلال میکرواستخراج و حلال پراکنده ساز وحجم،قدرت یونی و زمان استخراج آنها مطالعه شد و مورد بهینه سازی هم قرار گرفتند. علاوه بر آن،تلاش شد بین عواملی نظیرفاکتور پیش تغلیظ، حساسیت، سادگی و تکرارپذیری نتایج تعاملی مناسب پدید آید.
در این پژوهش،کلروفرم - دانسیته - 1/48g/ml=، تتراکلریدکربن - دانسیته - 1/58g/ml=، دی سولفیدکربن - دانسیته - 1/26g/ml= به عنوان حلالهای میکرواستخراج انتخاب شدند. %ER - درصد ریکاوری استخراج - با استفاده از کلروفرم،تتراکلریدکربن و دی سولفیدکربن،به ترتیب عبارتست از:%69/2،%42/7 و .%36/8نتایج نشان داد که کلروفرم دارای بالاترین درصد ریکاوری اسخراج در مقایسه با سایر حلالها میباشد. در نتیجه این امر،کلروفرم به عنوان حلال مناسب انتخاب شد.
-1-3بررسی اثر:PH اثر PHبر روی کارآمدی اکسیداسیون جم فیبروزیل در محدوده 13-2 با استفاده از هیدروکلریک اسید و سدیم هیدروکسید بررسی گردید و نهایتأ،PH=13 بهترین مقدار جهت حصول تعامل مناسب بین حساسیت ،کارآمدی اکسیداسیون،سرعت و تکرارپذیری نتایج برگزیده شد.
-2-3طیفهای تحریک/نشر:TC این مسئله بخوبی دانسته شده که اکثر ترکیبات آلی که شدت فلوئورسانس از خود نشان می دهند دارای سیستم حلقوی و ساختارهای مزدوج شامل سیستم الکترون- ،می باشند.طول موج تحریک و نشر ماکزیمم TC،در 375 و438 نانومتر بدست آمد.تحریک ونشر معرف بلانک ،هیچ اثری بر اندازه گیری جم فیبروزیل ندارد.لذا،طول موجهای بکار رفته به ترتیب به عنوان شرایط تحریک ونشر،برگزیده شدند.
-4جمع بندی
نانو ذرات گوگرد، به کمک شیوه تلفیقی -DLLMEاسپکتروفتومتری،روشی سهل،سریع،دقیق،قابل اتکاء جهت اندازه گیری جم فیبروزیل در سنتزهای داروئی تجاری و ادرار انسان بکار میرود.صحت این روش با انجام تست ریکاوری تأئید شد و در نتیجه با روش ولتامتریک مقایسه گردید.بعلاوه،روش پیشنهادی حساسیت را در مرحله پیش تغلیظ ارتقا میبخشد و چشم انداز مناسبی را در حوزه داروشناسی و تست نمونه ادرار با هزینه پائین و سادگی در اجرا را به نمایش می گذارد
