بخشی از مقاله
چکیده
پنیرک - - Malva Sylvestrisگیاهی دو لپه از خانواده Malvaceae است که در صنایع داروسازی و آرایشی و بهداشتی اهمیت فراوان دارد. از نظر ترکیبات شیمیایی در برگ های پنیرک کبیر تانن یافت شده و به علاوه دارای ویتامین A,B,Cاست.برگ پنیرک به عنوان یکی از گیاهان مؤثر در عوارض سرماخوردگی به ویژه سرفه در تعداد زیادی ازفرمولاسیون مخلوط با گیاهان دیگر وجود دارد. هدف از این تحقیق انتخاب محیط کشت مناسب به منظور تولید کالوس است.
در تحقیق حاضر اثر محیط کشت تغییر داده شده LS - کینتین وایندول استیک اسید و نفتالین استیک اسید به ترتیب 1، 3و - mg.L-1 3 وB5 - بنزیل آدنین و نفتالین استیک به ترتیب 0/225 و - mg .L-1 1/86 برمقدار تولید کالوس از قطعات جداکشت برگ پنیرک کبیر مورد بررسی قرار گرفت و در نهایت محیط بهینه بکاررفته جهت رسم منحنی رشد استفاده گردید. بالا ترین وزن ترکالوس در قطعات جداکشت در محیط کشتLS دیده شد.
مقدمه
گیاهی پایا، دو لپه ای و علفی از خانواده Malvaceae به ارتفاع 30 تا 60 سانتیمتراست که البته بلندی آن بسته به شرایط اقلیمی محل رویش متفاوت است. ساقه آن، خزنده، پوشیده از کرک، راست و استوانه ای شکل می باشد. برگ هایی متناوب، بزرگ با دمبرگ دراز و بریدگی عمیق، قلبی شکل با 5 تا 6 لوب دندانه دار داشته و رگبرگ های پنجه ای دارند. در قاعده هر برگ دو گوشواره قرار دارد .گل های آن منظم، هرمافردیت، درشت و به رنگ گلی مایل به بنفش با تزئیناتی از خطوط تیره می باشد .کاسه گل از سه کاسبرگ آزاد و منظم و جام از پنج گلبرگ آزاد منظم و سفید رنگ تشکیل یافته است. مادگی آن مرکب از 10 تا 12 برچه می باشد که هریک پس از رسیدن منحصرا دارای یک دانه می باشند
دراواخر بهار اولین گل ها پدیدار شده تا اواخر تابستان ادامه می یابد.میوه پنیرک ،گرد فشرده با سطح خارجی ناصاف و خشن، کپسول ،مسطح و ده قسمتی بوده و دارای خا نه ها ی متعدد و مشخص است که در هر خانه، یک دانه قرار دارد - زرگری،قهرمان - . در گل پنیرک مقدار کمی ماده رنگی به نام مالوین یافت می شود که در اثر هیدرولیز به گلوکز و مالوی نین تجزیه می گردد.
در تمام اندام گیاه مقدار قابل ملاحظه ای لعاب وجود دارد که که شامل مواد ال - آربینوز، ال - رامنوز، دی - گالاکتوزرونیک اسید می باشد .گل ها دارای موادموسیلاژی هستند .این موسیلاژ در اثر هیدرولیز،تبدیل به گالاکتوز، آرابینوز، گلوکز رامنوز و اسید گالاکتورونیک می شود . همچنین گل های پنیرک حاوی مقدار کمی تانن و حدود یک دهم درصد لوکوآنتوسیانین ها وآنتوسیانین است - عبادی - . با بهره گیری از فن کشت سلول با توجه به اینکه گیاه از قدرت بالای تکثیر برخوردار می شود، می توان از گیاه هدف مواد شیمیایی، دارویی و اسانس های مختلف ومورد نظر را استخراج نمود. هدف از تحقیق حاضر انتخاب محیط کشت مناسب برای استقرار سلول های پنیرک و رسم منحنی رشد آن می باشد.
شکل .1 گیاه پنیرک کبیر
مواد وروش ها
در اواسط مرداد ماه گیاه پنیرک از محوطه دانشگاه جمع آوری گردید و برای شستشو با مایع ظرفشویی برگ ها جدا و قطعات ساقه کوچکتر شدند. پس از قرار گرفتن در جریان آب شهر به مدت 15 دقیقه در محلول هیپر کلریت سدیم 20 درصد قرار کرفت وپس از انتقال به زیر هود لامینار و شستشو با آب استریل در الکل 70درصد قرار کرفته وپس از شستشو با آب استریل، در آب استریل قرار گرفته وپس از خشک نمودن آن ها با کاغذ خشک کن استریل، قطعات تقریبا 1×1 سانتیمتر مربع به محیط کشت جامد تغییر یافته LS و - Gamborget al.,1968 - - Linsmaier & Skoog 1965 - B5 قرار گرفته ودر تاریکی در دمای 25 در داخل فیتوتورون نگهداری شدند.
جدول - 1 ترکیباLS و B5 تغییر داده شده
تهیه محیط کشت مایع LS برای انتقال سلول ها از محیط جامد به مایع جهت رسم منحنی رشدانجام شد . بهترین زمان برای واکشت و برداشت سلولها در محیط جامد از حدود روز7 تا 10 می باشد که سلولها در فاز لگاریتمی رشد هستند. کشت های تعلیقی با قرار دادن قطعات کوچک کالوس در 30 میلی لیتر محیطLS تغییر یافته در ارلن 100میلی لیتری بنیان گذاری شد و در دمای 2°C 25 سانتی گراد در تاریکی و بر روی شیکر با 123 دور در دقیقه نگهداری شدو پس از چند بار واکشت سپس منحنی رشد رسم گرید.
نتایج
تقریبا در هر دو نوع محیط کشت کالزایی اتفاق افتاد اما بیشترین مقدار وزن تر در محیط LS دیده شدکه به رنگ کرم روشن بود - شکل 2 و - 3 ولی رنگ کالوسها در محیط B5 تیره تر بود.
