بخشی از مقاله
چکیده
کانژوگاسسیون ستوکسیمب با استفاده از شلاتورDOTA-NHS-ester و نشاندارسازی با 37 مگابکرل ایندیوم 111 انجام شد، پراکنش زیستی رادیو دارو در ارگان های مختلف در رت های سالم - n=3 - در4 و 24 ساعت بررسی شد ، خلوص رادیونوکلئیدی ایندیوم 111 با استفاده از دستگاه گاما کانترHPGe بررسی شد ، خلوص رادیوشیمیای %80 در 40 دقیقه در 37 درجه سانتیگراد بوسیله ی دستگاه RTLC اسکنر به دست آمد ، مطالعات پایداری در سرم خون تا 24 ساعت انجام شد ، نتایج پراکنش زیستی در مورد رادیو دارو مناسب گزارش شد .
مقدمه
ستوکسیمب یک آنتی بادی منوکلونال با پیوستگی بالاتر از فاکتور رشد اپیدرمال - - EGFR به گیرنده های این فاکتور در سطح سلول متصل می شود ، این آنتی بادی در درمانهای بالینی برای بیماران مبتلا به سرطانهای ریه، سر، گردن و کولورکتال موفق عمل کرده [1] و همچنین در موارد تحقیقاتی بر روی سرطان سینه دارای اثر مثبت بوده[2]، این تحقیق با هدف نشاندارسازی ستوکسیمب با ایندیوم 111 به وسیله ی شلاتور-DOTA-NHS ester انجام شد ، راندمان نشاندار سازی با استفاده از دستگاه RTLC انجام شد ، آزمایش های مربوط به پایداری و همچنین پراکنش زیستی انجام شد.
روش کار
پس از تهیه ایندیوم 111 بصورت ایندیوم کلراید در پژوهشکده پزشکی هسته ای کرج خلوص رادیو نوکلئیدی ایندیوم 111 با استفاده از دستگاه HPGe گاماکانتر انجام شد . خالص سازی آنتی بادی با استفاده از فیلتر های ویوا اسپین 30 کیلو دالتون به این صورت که هر بار 600 ماکرو لیتر معادل 3 میلی گرم به ستون اضافه و سانتریفیوژ می کنیم و پس از 3 بار شستشو با بافر بیکربنات 9/2 : pH محصول نهایی جمع آوری و با استفاده از دستگاه بایو فتومتر میزان ریکاوری اندازه گیری شد.
کانژوگاسیون - اتصال شلاتور DOTA-NHS به آنتی بادی ستوکسیمب - : به ویال حاوی 3 میلی گرم آنتی بادی خالص شده 1/3 میلی گرم از شلاتور DOTA-NHS اضافه کرده و به مدت 24 ساعت در دمای اتاق Vortex میکنیم ، و کانژوگاسیون با نسبت مولار اضافی 1به 50 انجام می شود [3]. نشاندار سازی : کانژوگه تهیه شده در مرحله قبل را با استفاده از فیلتر ویوا اسپین و بافر آمونیوم استات 5/5 : pH تغییر بافر می دهیم ، این تغییر در بافر به منظور اتمام واکنش کانژوگاسیون و آماده شدن برای واکنش نشاندار سازی انجام می شود . - شکل - 1
1 میلی کوری از ایندیوم 111 تحت فلو نیتروژن خشک می کنیم و میزان 200 میکرو لیتر از بافر آمونیوم استات به آن اضافه کرده و سپس 500 میکرو لیتر از کانژوگه تهیه شده را به آن اضافه کرده و 30 دقیقه در دمای 37 درجه در حرارت غیر مستقیم می گذاریم تا واکنش نشاندار سازی کامل شود و سپس اقدام به نمونه برداری میکنیم [4]. بررسی پایداری رادیو دارو در سرم خون و بافر فسفات سالین : سرم خون و بافر را که قبلا تهیه کردیم به میزان 500 میکرو لیتر در دو میکروتیوپ میریزیم و میزان 100 میکرولیتر حاوی حدود 100 میکرو کوری از رادیو داروی تولید شده به آنها اضافه کرده و درون اینکوباتور با دمای 37 درجه سانتی گراد قرار میدهیم ، از میکروتیوپ حاوی رادیودارو در سرم خون و بافر با فواصل زمانی مشخص - 1 ،2 ، 3، 4 و... - تا 24 ساعت با توجه به نیمه عمر عنصر مورد استفاده در رادیو دارو نمونه برداری می کنیم و بروی کاغذ TLC لکه گذاری کرد و توسط دستگاه RTLC اسکن می کنیم تا میزان نشاندار و پایداری دارو در فواصل زمانی مشخص بررسی شود .
بررسی پراکنش زیستی و نحوه محاسبه اکتیویته تجمعی در اندام های مختلف در پیکر موش صحرایی :
به منظور بررسی نحوه توزیع ، تجمع و دفع ایندیوم آزاد و رادیو دارو تهیه شده در موش ، 180 میلی کوری را برای هر موش میزان 100 میکرو لیتر توسط سرنگ انسولین ار طریق سیاهرگ دمی تزریق نموده ، در زمان های 4 ، و 24 ساعت پس از تزریق ، کشتار موش ها و تصویر برداری و تشریح و نمونه برداری از اندام های مختلف انجام می پذیرد ، پس از تزریق وریدی رادیو دارو ، عمل تشریح موش ها در بازه ی زمانی مشخص انجام می پذیرد. اندام های مورد نظر جداسازی شده توسط دستگاه HPGe گاما کانتر میزان اکتیویته هر بافت اندازه گیری می شود ، میزان اکتیویته تجمع یافته در هر اندام با عامل %ID/g بیان میشود و طبق روابط زیر محاسبه می گردد،
نتیجه گیری
خالص سازی آنتی بادی ستوکسیمب با راندمان بالا انجام و همچنین نشاندار سازی این آنتی بادی بر اساس پیک های حاصل از %80 RTLC گزارش شد ، پایداری رادیو داروی 111In-DOTA-Cetuximab در سرم خون تا 24 ساعت در 37 درجه سانتی گراد مناسب بوده ، پراکنش زیستی رادیوداروی تهیه شده مناسب بوده و تمایز مورد نظر با ایندیوم آزاد در معده مشاهده شد و در ارگان کبد و ریه جذب بیشتری را دارا بود .
