بخشی از مقاله
چکیده
براي انجام پیوندمغزاستخوان نیازبه دوز ایده آل ازسلولهاي بنیادي خونساز - - HSCاست حال آنکه براي کم کردن ریسک پس زدن پیوند باید بفکر کمترین دستورزي ژنتیکی در تکنیکهاي مهندسی ژنتیک بودکه براي فردگیرنده نیزایمن باشد. براي مثال درکشت دوبعدي دکسترباخونسازي غیرطبیعی مواجه هستیم و یا حتی تکثیر بی رویه می تواند منجر به آنیوپلوئید و سرطانی شدن شود. بنابراین نیازبه خلق شرایط نرمال براي کاهش خطراست. دربدن، HSCها، دربستري ازسلولهاي استرومال قراردارندبطوري که تماس سلولی بصورت سه بعدي است.داربست از مغز استخوان تهیه شده و با کمک تیمار اسیدي مواد معدنی آن حذف گشته تا ماتریکس پروتئینی بسترآشکار شودو براي پوشش داده شدن باUSSC مناسب گردد.
هدف
تکثیرسلولهاي HSC باکمک سلولهاي بنیادي سوماتیک غیر محدود شده که سلولهاي استرومالی هستندوتنها ازخون بندناف جداسازي می شوند-دراین حالت شبیه سازي in vivo بصورت Ex vivo انجام می شود. روش:جداسازي سلولهاي USSC ازخون بندناف، انجام تستهاي تشخیصی - تمایز به چربی واستخوان - ، رنگ آمیزي اختصاصی، پوشش دادن سلولهاي USSC روي داربست، جداسازي سلولهايCD34+جفت انسانی با روش MACS،انجام هم کشتی این دو رده سلولی،شمارش سلولها طی3هفته تکثیر، بررسی با فلوسایتومتري.
نتیجه
تکثیر سلولهاي خونساز خون بند ناف، زمانی که باداربست De-mineralized شده ونیز پوشیده شده با USSC انجام شد، به نحوقابل توجهی افزایش یافت. سلولهاي USSCانسانی برروي داربست DBMبهترکاشت می شوند بطوري که باسطح پروتئینی که دراثر حذف موادمعدنی بااسیددرمعرض نمایش درآمده اند،آشناتر هستندوباتولید بیشتري ازسیتوکاینهاي خونساز،ماتریکس خارج سلولی ومولکولهاي اتصالی همراه خواهند بود.این مدل محیط مناسبی براي تکثیرHSCاست که نسبت به کشت دوبعدي می تواند مدل جایگزین باشد.
کلمات کلیدي: داربستDBM، سلولهايUSSC، تکثیر برون تن، سلولهاي بنیادي خون بندناف
مقدمه
پیوند مغز استخوان یک روش درمانی انتخابی مهم براي بسیاري ازبیماريهاي مادرزادي واکتسابی خونی به حساب میآید. این پیوند به دوصورت انجام می گیرد : اتولوگ وآلوژنیک. براي سلولهاي بنیادي یا سلولهاي پیش سازخونی مورد نیاز است که از نظر مارکرهاي سلولی باوجود شاخصهاي در سطح سلول شناسایی می شوند.طرح پیشنهادي براي غلبه بر مشکل محدودیت تعداد این سلولها، تزایددرشرایط Ex vivo وافزایش نسبت سطح به حجم محیط کشت یاداربستهاهستند.دراینجاکشت حالت سه بعدي داردوسعی درتقلیدازمیکرومحیط یاهمان niche اطراف سلولهاي بنیادي شده است.
زیرا سلولها در بدن حالت سه بعدي راتجربه می کنندودر اطراف آنها سلولهاي دیگري نیز وجود دارند. بنابراین براي بهتر شدن کارایی کشت می توان از کشت سه بعدي استفاده کرد.این کشت داراي مزایاي دیگري می باشد: دراین نوع کشت مورفولوژي شبیه in vivoاست، برهمکنش بین سلولی بهتر انجام می شود،ازلحاظ بیولوژي و عملکرد بسیار شبیه به حالت واقعی است که می توان رفتار سلولها را در این نوع کشت ارزیابی و بررسی کرده وآن را به حالت in vivo تعمیم داد.
داربست
این داربست یا اسکافولد با منشا بافت استخوانی بوده و داراي پایداري مکانیکی و توانایی انتقال سیگنالهاي اختصاصی براي تحریک و تقسیم سلول هاي استخوانی وتولید سلولهاي بنیادي است. مطالعات انجام شده روي DBM نشان داده است که این ماده را می توان براي پیوند استخوان بکاربرد زیرا که کارایی بیشتر نسبت به روش هاي گذشته و سایر مواد داشته است. بطوري که خود داراي قدرت تحریک کنندگی براي بافت استخوان است زیراکه DBM با کمک استخراج اسیدي از بافت مغز استخوان بدست می آیدو داراي پروتئین هاي زمینه اي کلاژن و نیز فاکتور هاي رشد مثل خانواده ي TGF می باشد که باعث وجود خاصیت تحریک کنندگی در این داربست شده است.
داربست DBM با ساختارهندسی و توپوگرافی سه بعدي که دارد در صورت کوت شدن با سلول هاي چسبنده استرومال می تواند تا حدودي میکرومحیط سه بعدي مغز استخوان را تقلید کند. سلولهاي استرومال براي سلول هاي بنیادي خونی بعنوان کوکالچر مطرح هستند با افزایش چگالی این سلول ها منطقه خونی به وجود می آید. سلولهاي پروژنیتور مزانشیمی یا سلولهاي بنیادي سوماتیک غیر محدود شده درکنار ساختار استخوانی، متخلخل و سه بعدي DBM می توانند شرایط محدودي از تولید فاکتورهاي رشد و ایجاد غلظت کانونی از فاکتورهاي رشد اتوکراین، پاراکراین و اگزوکراین را فراهم سازند.
