بخشی از مقاله
جداسازي ژن PR8 در گياه به پس از تيمار با ماده محرک BTH
چکيده
بيماري آتشک از قديميترين بيماريهاي باکتريايي مهم و خطرناک درختان ميوه دانهدار در جهان و ايران است که عامل آن باکتري Erwinia Amylivora ميباشد. گياهان مکانيسمهاي دفاعي ساختماني و بيوشيميايي مختلفي را به منظور مواجهه با عوامل تنشزاي زنده و غيرزنده کسب نمودهاند. در اين ميان ژنهاي مرتبط با بيماريزايي (PR genes) در ايجاد مقاومت به بيماريها نقش برجستهاي دارند. در اين تحقيق نقش ژن دفاعي PR8 با تحريک بيان آن با ماده BTH در مقاومت القايي در درخت به مورد بررسي قرار ميگيرد. بدين منظور درختچه هاي دوساله به رقم اصفهان تحت تيمار با ماده BTH قرار گرفت و روز بعد RNA از گياهان تيمار شده و شاهد استخراج و از روي آن cDNA ساخته شد. تکثير ژن PR8 توسط آغازگرهاي عمومي براي اين ژن ، به وسيله واکنش PCR انجام گرفت . باند مورد انتظار پس از جداسازي از ژل روي ناقل الحاق و تعيين توالي شد. مقايسه توالي آن با ساير تواليهاي موجود در بانک اطلاعات نشان داد که تشابه بالايي با ژنهاي شناخته شده در سيب و گلابي دارد. اين بررسي ادامه دارد.
واژههاي کليدي: به ، آتشک ، PR پروتئينها، BTH
مقدمه
بيماري آتشک مهمترين بيماري درختان ميوه سيب ، به و گلابي در جهان است . عامل اين بيماري باکتري Erwinia amylovora است که باعث سوختگي سرشاخهها در گياهان ميزبان ميگردد. گسترش اين باکتري در سرشاخهها باعث ايجاد علائم نکروز در گياهان ميزبان ميشود (3). انتشار سريع باکتري در بافتهاي گياهان حساس در شرايط اقليمي مناسب باعث از بين رفتن گياه در طي فصل رشد ميشود. مکانهاي اصلي اين باکتري براي نفوذ به گياه از راه شکوفههاي گلآذين و زخم هاي موجود در گياه است . تجمع باکتري در داخل آوندهاي چوب باعث بسته شدن اين آوندها و در نتيجه مانع نقل و انتقال آب و مواد غذايي به اندامهاي آلوده شده ميگردد (5). روشهاي متعددي براي مهار بيماري، مورد توجه قرار گرفته است ولي تاکنون هيچکدام از اين روشها به عنوان روش مبارزه قطعي مؤثر واقع نشده است . در بين روشهاي مبارزه ، اقتصاديترين روش استفاده از ارقام مقاوم به بيماري است (1). گياهان براي مقابله با عوامل بيماريزا از طيف وسيعي از مکانيسمها استفاده ميکنند. نتيجه برهمکنش گياه با عوامل بيماريزا، القا بيان ژنهاي درگير در مقاومت و در نتيجه کاهش زخم و آسيب توسط بيمارگر ميباشد (2). پروتئينهاي مرتبط با بيماريزايي (Pathogenesis related proteins; PR)، دستهاي از. پروتئينها محسوب ميشوند که در اثر حمله پاتوژنها و يا مواد مرتبط با بيمارگر همچون محرک ها در گياه توليد ميشوند (6). بيان اين پروتئينها به صورت موضعي و سيستميک در گياه در نتيجه برهمکنشهاي سازگار جزئي و ناسازگار صورت ميگيرد. PR8 ها جزء کيتينازها هستند و متشکل از پروتئينهاي مختلف ميباشند. پروتئينهاي مرتبط با بيماريزايي همچون کيتيناز نقش ضد باکتريايي و ضد قارچي دارند. آنزيمهاي هيدرولازي نظير کيتيناز و گلوکاناز باعث نابودي و فروپاشيدن ساختار سلولي عوامل بيماريزايي گياهي ميگردد. از آنجا که ديواره سلولي، نخستين و مهمترين سد در برابر آنزيمهاي هيدرولازي است از بين بردن اجزاي تشکيلدهنده ديواره قارچي از جمله کيتين و گلوکان وظيفه اختصاصي بسياري از اين آنزيمها ميباشد (4).
کيتينازها لينکاژهاي بتا- 1و4 بين باقي ماندههاي N-acetyl glucosamine در کيتين را هيدروليز ميکنند. توليد گياهان مقاوم به عوامل بيماريزاي قارچي، باکتريايي و ويروسي با فعال کردن ژنهاي کدکننده مواد ضد ميکروبي، روش اميدوار کنندهاي براي مبارزه با بيماريهاي گياهي است (7). لذا اين تحقيق با هدف بررسي اثر تيمار درخت به با ماده شيميايي بيون (BTH) بر روي سطح بيان ژن PR8 انجام ميگردد.
مواد و روشها
- مواد گياهي، سويههاي باکتري و پلاسميد مورد استفاده :
