بخشی از مقاله
چکیده
مقدمه: افزایش شیوع انتروکوکهای مقاوم به ونکومایسین - - VRE در محیط های بهداشتی و غیر بهداشتی از جمله فاضلاب های شهری به یکی از مسائل مهم در حوزه بهداشت و درمان تبدیل شده است. در این مطالعه پس از جداسازی انتروکوک های مقاوم به ونکومایسین از فاضلاب و تعیین الگوی مقاومت ضد میکروبی بررسی شد.
مواد و روش ها: پس از نمونه برداری از فاضلاب و فیلتراسیون نمونه ها، ممبران های حاصله بر روی محیط های اختصاصی و حاوی آنتی بیوتیک قرار گرفته و انتروکوک های مقاوم به ونکومایسین خالص سازی گردید. سپس تست های بیوشیمیایی، آنتی بیوگرام و MIC سویه ها در مورد ونکومایسین و چندین آنتی بیوتیک دیگر انجام شد.
یافته های پژوهش: طبق این تحقیق از تمامی محیطهای نمونه گیری شده انتروکوک جداسازی شد و با انجام تست های بیوشیمیایی و نتایج حساسیت میکروبی نشان از مقاومت سطح بالا وچند گانه در بین سویه ها داشت.
نتیجه گیری: به سبب اینکه ژنهای مقاومت به ونکومایسین قابل انتقال بین باکتریها و نیز بین باکتریها و محیط بوده و مخازن محیطی می توانند در انتشار انتروکوک های با مقاومت آنتی بیوتیکی نقش داشته باشند.
مقدمه:
انتروکوک ها، کوکسی های گرم مثبت تخمیری و فلور نرمال دستگاه گوارش انسان و حیوان می باشند. این باکتریها که در گذشته از لحاظ بالینی کم اهمیت تلقی می شدند بدلیل کسب مقاومت اکتسابی به چندین آنتی بیوتیک مهم بالینی مانند ونکومایسین - با شیوع 12 درصد - از اوایل 1970 بعنوان دومین عامل شایع عفونتهای بیمارستانی از جمله اندوکاردیت، عفونتهای ادراری، سپتی سمی و غیره شناخته شدند 1]و.[2 از بین انتروکوک ها دو گونه انتروکوک فکالیس و انتروکوک فسیوم با شیوع بترتیب 85 و 10 درصد، شایعترین عوامل مسبب را تشکیل می دهند
آنتیبیوتیکهای گلیکوپپتیدیونکومایسین و تیکوپلانین آخرین راه درمان عفونتهای جدی ناشی از کوکسی های گرم مثبت مانند انتروکوک، استافیلوکوک اورئوس مقاوم به متی سیلین و کلستریدیوم دیفیسیل در نظر گرفته میشوند. مصرف بی رویه ونکومایسین در 2 دهه گذشته منجر به ظهور سویه های مقاوم انتروکوک به گلیکوپپتیدها شده است
مهمترین ژنهای مقاومت به ونکومایسین در انتروکوک ها شامل vanA، vanB، vanC1 و vanC2/C3 میباشند. ژنهای vanA و vanB بعنوان مهمترین ژنهای مسئول مقاومت، بترتیب بر روی ترانسپوزونهای Tn1546 و Tn1547 قرار دارند که میتوانند روی پلاسمید یا کروموزوم یافت شود. ژنهای vanC1 و vanC2/C3کروموزومی هستند. فنوتیپ vanA از طریق مقاومت اکتسابی سطح بالا هم به ونکومایسین و هم تیکوپلانین مشخص میشود. فنوتیپ vanB از طریق مقاومت اکتسابی سطح متوسط به ونکومایسین - و نه تیکوپلانین - مشخص میشود. فنوتیپ vanC از طریق مقاومت داخلی سطح پایین به ونکومایسین و حساسیت به تیکوپلانین مشخص میشود
انتروکوک های مقاوم به ونکومایسین از تصفیه خانه های شهری، اولین بار در سال 1993 در انگلستان و سپس در شهر کوچکی در آلمان در نمونه های مدفوع خوک و طیور مزرعه دیده شد .
سپس مطالعات فراوانی قابلیت انتشار این سویه ها بهمراه انتقال ژنهای مقاومت را در بین محیط های مختلف تایید کرد به سبب اینکه ژنهای مقاومت به ونکومایسین قابل انتقال بین باکتریها میباشند، بنابراین مخازن محیطی می تواند در انتشار انتروکوک های مقاوم حتی به محیط های درمانی و باکتری های مهم از لحاظ پزشکی نقش داشته باشد، چنانکه انتقال ژنهای مقاومت در بین انتروکوک ها در تصفیه خانه های شهری نیز گزارش شده است
ترانسپوزونهای کنژوگاتیو انتروکوک فسیوم میتوانند مقاومت به ونکومایسین را به استافیلوکوک اورئوس منتقل نمایند .[9] چنانکه سویه های استاف اورئوس مقاوم به ونکومایسین با ژنوتیپ vanA در امریکا گزارش شده است 20]، 21 و .[22 بنابراین بروز این نوع مقاومت در انتروکوک ها مشکلات عمده ای در بروز عفونتهای بیمارستانی ناشی از این ارگانیسم ها و نیز تشخیص و درمان آنها را سبب گردیده است.
مواد و روش ها
نمونه برداری:
نمونه برداری در چندین نوبت از آب تمام رود ها و رودخانه ی ورودی به دریای خزر در شهرستان عباس آباد صورت گرفت ونمونه ها با رعایت شرایط استاندارد به آزمایشگاه منتقل و پس از غنی سازی اولیه در محیط LBبراث، سوسپانسیون میکروبی در محیط کشت اختصاصی کشت داده شدوسپس کشت مجدد برای خالص سازی نمونه ها صورت گرفت.تست های تاییدی انتروکوک از سایر استرپتوکوک ها و تست تشخیصی وبیوشیمیایی برای افتراق گونه ای انتروکوک صورت گرفت.انتروکوک های مقاوم به ونکومایسین توسط آنتی بیوگرام جداسازی وشناسایی گردیدند.
جداسازی باکتری:
ابتدا رقت های 1/10 از نمونه های مورد نظر تهیه شد و سپس با استفاده از ممبرانهای میلی پور - µm - Millipore Cooperation0.45 فیلتر شدند. سپس فیلتر را برداشته و به آرامی بر روی پلیت محیط کشت - Brain Heart Infusion - DIFCO, USA آگار منتقل نموده و به مدت 2 ساعت در ºC37 گرماگذاری شد. سپس مجدداً فیلترها برروی محیط M - Enterococcus agar - ME agar - - DIFCO,USA حاوی µg/ml 8 ونکومایسین قرار گرفتند و بمدت 48 ساعت در ºC42 گرماگذاری شدند. سپس فیلترها بر روی پلیتهای بایل اسکولین آگار - DIFCO,USA - بمدت 2 ساعت در ºC 45 گرماگذاری شدند. پس از این مدت از روی فیلترها، کلنی های سیاه، بر روی بلاد آگار خالص سازی شدند
تعیین هویت بیوشیمیایی:
پس از خالص سازی کلنی ها، تعیین هویت سویهها از طریق تستهای بیوشیمیایی مانند رشد در حضور نمک amide،pyrrolidonyl-B-naphty، 5/6 درصد - - PYR، رشد در ºC 45 و غیره انجام گرفت .[14]
تعیین حساسیت ضد میکروبی:
تعیین حساسیت ضد میکروبی سویه ها انتشار دیسک با آنتی بیوتیکهای و نیز MIC به روش Macrodilution و نیز - E-test - AB Bio Disk, Sweden در مورد ونکومایسین و تیکوپلانین بر طبق استاندارد های CLSI انجام شد
یافته های پژوهش
نتایج حاصل از نمونه برداری:
در این مطالعه از رودخانه های شهرستان عباس آباد در مجموع سه بار نمونه برداری شد. با انجام فیلتراسیون نمونه ها، از بین تقرباًی 300 کلنی مشاهده شده بر روی محیط های اختصاصی، در نهایت 53 کلنی بطور تصادفی جدا و خالص سازی گردید. پس از انجام تستهای بیوشیمیایی تمام ایزولهها بعنوان انتروکوک شناسایی شدند.
نتایج حاصل از تعیین حساسیت ضد میکروبی:
نتایج MIC به روش Macrodilution و همچنین E-test نشان داد 98 درصد سویه ها دارای مقاومت سطح بالا به ونکومایسین بودند MIC≥ - 256 - و تنها یک سویه دارای ≤MIC4 بود. نتایج آنتیبیوگرام در مورد 9 آنتی بیوتیک - جدول - 1 حاکی از آمار بالای مقاومت چندگانه در سویه های مورد نظر دارد.
