بخشی از مقاله
چکیده :
مقدمه: ظهور باکتری مقاوم به آنتی بیوتیک در مناطقی که آنتی بیوتیک استفاده می شود شایع است، اما ظهور این باکتریها به طور فزاینده در محیط های آبی نیز رخ میدهد، افزایش شیوع انتروکوکها در محیط های بهداشتی وغیر بهداشتی از جمله پساب های شهری به یکی از مسائل مهم در حوزه بهداشت و درمان تبدیل شده است. هدف این تحقیق جداسازی و بررسی بیوشیمیایی انتروکوک جدا شده از دهانه رودخانه های واریزی به دریای خزر در شهرستان عباس آباد هست.
مواد و روشها : نمونه برداری در چندین نوبت از آب تمام رود ها و رودخانه ی ورودی به دریای خزر در شهرستان عباس آباد صورت گرفت ونمونه ها با رعایت شرایط استاندارد به آزمایشگاه منتقل و پس از غنی سازی اولیه در محیط LBبراث، سوسپانسیون میکروبی در محیط کشت اختصاصی کشت داده شدوسپس کشت مجدد برای خالص سازی نمونه ها صورت گرفت.تست های تاییدی انتروکوک از سایر استرپتوکوک ها و تست تشخیصی وبیوشیمیایی برای افتراق گونه ای انتروکوک صورت گرفت.
نتایج: طبق این تحقیق از تمامی محیطهای نمونه گیری شده انتروکوک جداسازی شد و با انجام تست های بیوشیمیایی، بیشترین تعداد انتروکوک مربوط به سویه ی انتروکوک فکالیس - %40.32 - 25 و انتروکوک فسیوم - % 27.41 - 17 بود ودر جایگاه های بعدی انتروکوک گالیناروم - %14.51 - 9 ، انتروکوک آویوم - %6.45 - 4 ،انتروکوک سودوآویوم - %4.83 - 3 انتروکوک دورانس - % 3.22 - 2 وانتروکوک هیرائه - %3.22 - 2 قرار داشتند.
کلید واژه:جداسازی،بیوشیمیایی،انتروکوک،رودخانه
-1مقدمه:
انتروکوک یکی از از عوامل اصلی بیماری و مرگ ومیر در میان بیماران بستری شده در ایالات متحده می باشد وسویه های انتروکوک به عنوان دومین پاتوزن شایع در بیمارستانهای ایالات متحده در سالهای 2007- 2006 شناخته شده اند. - دونابدیان وهمکاران، - 2010عفونتهای انتروکوکی رایج ترین عفونتی است که توسط فلور کومنسال انسان ایجاد می شود و فراوانترین کوکسی گرم مثبت در مدفوع انسان می باشند - آبریل وهمکاران ، - 2008عفونتهای انتروکوکی شامل عفونتهای مجاری ادراری، اندوکاردیت، آبسه های داخل شکمی ، عفونتهای زخم ، باکتریمی ، سپسیس نوزادان و ... هستند.
قدرت بیماری زایی انتروکوک ها بیش از آنکه به علت فاکتورهای ویرولانس آن باشد به علت وجود مقاومت به آنتی بیوتیکهای مختلف است. انتروکوک ها به عنوان دومین ارگانیسم معمول در ایجاد عفونت دستگاه ادراری و زخم وسومین عامل ایجاد کننده باکتریمی در بیمارستانها می باشند - فیشر، - 2009گونه های مختلفی از انتروکوک وجود دارد ولی اغلب عفونتهای انتروکوکی در انسان توسط 2 گونه بوجود می آیند،انتروکوک فکالیس و انتروکوک فسیوم E.faecalis E.faecium انتروکوک فکالیس در عفونتهای انسانی شیوع بیشتری نسبت به انتروکوک فسیوم دارد ،ولی توانایی فسیوم برای کسب مقاومت دارویی بیشتر است . - ماروتی وهمکاران، - 2005
اعتقاد بر این است که انتروکوکوسها ارتباط بیشتری نسبت به کلی فرمهای مدفوعی با پاتوژنهای انسانی که اغلب در فاضلابها یافت می شوند ،دارند.در ایران برای شمارش انتروکوک های روده ای از شمارش صافی غشایی استفاده میشود. وجود ارگانیسمهای مدفوعی در آبهای ساحلی و دریایی از مدلهای پیچیده تبعیت میکند، که از پارامترهای مهمی که میبایست مدنظر قرار داد، میتوان به چنین مواردی اشاره کرد: ورودیهای به آب دریا، مدت زمان اقامت - residence time - و مقاومت میکروبی در برابر شرایط محیط زیست دریایی. توازن در میان این عوامل، بود و نبود آلودگی مدفوعی پاتوژنیک را مشخص میسازد.هنگام بارندگی، آب شیرین و آلودگیها به مناطق ساحلی هجوم آورده و این متغیر بر مدت زمان اقامت، که کاهش مییابد، غلبه میکند و آلودگی مدفوعی ماحصل پدیده فیزیکی خواهد بود.
سپس هنگامی که ورودی آب شیرین کاهش مییابد، مدت زمان اقامت فزونی یافته و اثر بیولوژیک برجسته میشود. هر چند که شرایط شیمیایی و فیزیکی محیطهای زیستی دریایی - درجه حرارت، شوری، محتوای مواد آلی، اکسیژن،PH وغیره - و نیز شرایط جوی - عمدتاً تابش اشعه خورشید - بر حیات ارگانیسمهای مدفوعی در آب دریا مؤثرند؛ اما نشان داده شده است که پابرجایی طولانی اشرشیاکلی در محیطهای فاضلابی، میتواند متابولیسم ارگانیسم را تغییر داده و آن را برای بقاء در شرایط نامساعد دریایی آماده تر سازد.در میان گونه های انتروکوک نیز حضورانتروکوک فکالیس وانتروکوک فسیوم در آب آشامیدنی به اثبات رسیده است، این باکتریها بیش از دیگر باکتریها در آب زنده مانده که دلیل آن بعلت توانایی تحمل شرایط نمک طعام 6.5 درصد وتحمل دمای 10 تا 60 درجه وفاکتورهای دیگر است. - ژانگ وهمکاران، - 2009
-2مواد وروش ها:
-2-1جمع آوری نمونه:
در این تحقیق تعداد 62 نمونه آب رودخانه های سطحی و مصب های های کوچک وبزرگ ورودی به دریا در شهرستان عباس آباد مان ند: رودخانه کاظم رود،امرج کلا،رود زیر بازار ماهی فروش ها، نشتارود ، رودخانه تیلرود سر،اسبچین ،جمشید آباد، کلارآباد و...، برای جداسازی وارزیابی انتروکوک ها از سواحل دریای خزر، در طی 6 ماه جمع آوری شد.نمونه گیری از آب رودخانه توسط لوله های استریل فالکون واعماق مختلف رودخانه صورت گرفت.
-2-2انتقال نمونه ها به آزمایشگاه :
تمام نمونه ها به طور جداگانه و در طول هفته جمع آوری شده ودر کوتاهترین زمان - کمتر از 24 ساعت - در یونولیت حاوی یخ خشک ودر شرایط استریل به آزمایشگاه منتقل و مورد آزمایش قرار گرفتند.در ارلن مایر 250 سی سی آماده شده واتوکلاو می شود برای استریل شدن محیط کشت و بعداز سرد شدن مقدار 10 سی سی از نمونه ای رودخانه را در کنار شعله به آن اضافه کرده و کمی تکان می دهیم تا مخلوط شود،سپس به انکوباتور 37 درجه منتقل کرده و 24 ساعت میماند تا باکتری ها خوب رشد کنند.
-2-3تلقیح سوسپانسیون از محیط مایع به محیط جامد:
بعد از آماده شدن محیط های جامد،با استفاده از سمپلر زرد مقدار 100 لاندا از سوسپانسیون باکتری در محیط lBبراث رابرداشته و در کنار شعله و با رعایت شرایط استریل در وسط پلیت اضافه می کنیم.سپس با استفاده از پیپت پاستور که به شکل L با استفاده از شعله درآمده،آن را پخش کرده و کشت سفره ای میدهیم.برای هر نمونه تعداد 4 پلیت جداگانه کشت سفره ای صورت گرفت و بعد پلیت ها به انکوباتور 37 درجه سانتی گراد منتقل شد.به مدت 24 تا 48 ساعت میماند تا کلنی ها رشد کنند.
-3نتایج:
-3-1نتایج تست کاتالاز:
تست کاتالاز برای تمام نمونه های خالص انتروکوک انجام شد،تمام کلنی های مورد بررسی کاتالاز منفی بودند.برای کنترل مثبت نمونه ی استاف اورئوس مورد استفاده قرار گرفت که کاتالاز مثبت می باشد.
-3-2مشاهده تست اکسیداز:
تمام نمونه های جدا سازی شده ی انترکوکی رویشان تست اکسیداز صورت گرفت وتمام نمونه ها اکسیداز منفی مشاهده وگزارش شدند ،برای کنترل مثبت از سودوموناس آئروژینوزا استفاده شد که اکسداز مثبت است .
-3-3مشاهده ی نتایج تست تحمل نمک : %6.5
سوسپانسیون باکتری در لوله ها پس از 24 ساعت انکوبه مشاهده شدند ،رنگ مایع از حالت شفاف به کدر در آمده بود. برای اطمینان بیشتر 100لاندا از سوسپانسیون را با سمپلر بر روی محیط بلاد آگار تلقیح کرده و24 ساعت دیگر انکوبه کردیم ،روی تمام پلیت ها انتروکوک ها رشد کرده بودند.
-3-4نتایج تست :API
بعد از 24 ساعت انکوبه ویادداشت نتایج در دفترچه شروع به تفسیر نتایج کردیم،این تست برای 62 نمونه صورت گرفت که از این تعداد 25 نمونه - %40.32 - انتروکوک فکالیس و17 نمونه - - %27.41 انتروکوک فسیوم و9نمونه - - %14.51 انتروکوک گالیناروم ، 4 نمونه - - %6.45 انتروکوک آویوم، 3 نمونه - %4.83 - انتروکوک سودوآویوم و 2 نمونه - %3.22 - انتروکوک دورانس و 2 نمونه هم - %3.22 - انتروکوک هیرائه بدست آمد.
