بخشی از مقاله
چکیده:
هدف از این مطالعه، بررسی اثر ضد باکتریایی اوژنول و اسید استیک برای مهار باکتری لیستریا مونوسیتوژنز است. اوژنول و اسید استیک، با استفاده از تست های حداقل غلظت مهار کنندگی - MIC - به روش استاندارد میکرودایلوشن و حداقل غلظت کشندگی - MBC - در برابر لیستریا مونوسیتوژنز مورد بررسی قرار گرفت. اوژنول اثر مهاری قوی نسبت به اسید استیک نشان داد، و میزان MIC آن ها در برابر این باکتری به ترتیب 0/75 و 1/25 میکرولیتر در میلی لیتر و MBC آن ها به ترتیب 1/5 و 1/25 میکرولیتر در میلی لیتر بود. این نتایج نشان داد که اوژنول و اسید استیک می توانند به عنوان نگه دارنده طبیعی مواد غذایی با فعالیت ضد باکتری بسیار عالی در برابراین باکتری پاتوژن مواد غذایی استفاده شوند.
مقدمه
استفاده از مواد نگهدارنده شیمیایی در مواد غذایی یکی از راه های کنترل رشد میکروبی و کاهش بروز مسمومیت و فساد مواد غذایی است. اخیرا، موجب نگرانی مصرف کنندگان در مورد اثرات منفی این مواد شده است و تمایل به کاهش مواد نگهدارنده شیمیایی برای پیشگیری و کنترل میکروارگانیسم های بیماریزای مواد غذایی دارند - . - 2011Wei, Xiong et al. با این حال، بیشتر اسانسها بعنوان امن ٌ - - GRAS در نظر گرفته شده است و برای مصرف کنندگان قابل قبول است.
آنها طیف گسترده ضد میکروبیایی در برابر باکتری ها، مخمرها و کپک ها دارند. اوژنول باتوجه به اثرات ضد باکتریایی قابل توجه آن، از معروف ترین ترکیبات اسانسها برای استفاده در تست های ضد میکروبیایی می باشد. اوژنول - -4 آلیل- متوکسی فنل - - - ، روغنی مایع روشن به زرد کم رنگ است که از جوانه و برگ میخک و دارچین استخراج شده است. ترکیباتی از این قبیل که آب گریزند موجب حل شدن رنجیرهای آسیل چربی در حوزه آب گریز غشاهای سیتوپلاسمی سلول های باکتریایی می شوند.
اسیدهای آلی مواد طبیعی هستند که در میوه های مختلف و محصولات تخمیری یافت می شوند و فعالیت ضد میکروبی علیه پاتوژن های ناشی از مواد غذایی دارند اسید استیک متداول ترین نگه دارنده مورد استفاده هست. فرآورده هایی مانند ترشی ها، ساورکرات - کلم ترش - و شیرهای تخمیری از طریق فعالیت های تخمیری اسید لاکتیک باکتری های مختلف تهیه می شوند که اسید استیک و سایر اسید ها را تولید می کنند.
اثرات ضد میکروبی اسید های آلی به علت کاهش دادن pH به کمتر از حداقل مورد نیاز برای رشد و بازدارندگی متابولیکی ناشی از مولکول های تفکیک نشده اسید می باشد در این مطالعه، اثر غلظت های مختلف اوژنول 6 - ، 3، 1/5، 0/75، 0/375، 0/187، 0/093، 0/046 میکرولیتر در میلی لیتر - و اسید استیک 10 - ، 5، 2/5، 1/25، 0/625، 0/312، 0/156، 0/039 میکرولیتر در میلی لیتر - در محیط آبگوشت مغز و قلب جهت تعیین حداقل غلظت مهارکنندگی - MIC - 2 به روش استاندارد میکرودایلوشن و همچنین حداقل غلظت کشندگی - MBC - 3 مورد بررسی قرار گرفت.
مواد و روش ها
اوژنول%99 و اسید استیک %100از کمپانی مواد شیمیایی مرک آلمانٌ، محیطهای کشت میکروبی Brain Heart Infusion Agar-BHIA و Brain Heart Infusion Broth- BHIBاز شرکت بیولایف می باشند.
باکتری مورد مطالعه
ابتدا یک گرانول باکتری لیستریا مونوسیتوژنز از لولههای کرایوٍ مورد نظر در شرایط سترون خارج و به 10 میلی لیتر محیط BHI براث منتقل شد و در دمای 37 درجه سانتی گراد نگهداری شد.
تهیه میزان تلقیح باکتری
باکتریها قبل از استفاده به طور متوالی دوبار تجدید کشت گردیدند. برای این منظور 5 - 4 کلنی باکتری از BHI آگار را به 10 میلی لیتر BHI براث منتقل شد و در 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت انکوبه گردید. کشت دوم را با انتقال 100 میکرولیتر از سوسپانسیون باکتری به 10 میلی لیتر BHI براث تهیه و در 37 درجه سانتی گراد به مدت 20 ساعت نگهداری گردید. سپس از کشت 20 ساعته رقت لازم را تهیه و تعداد باکتری روی استاندارد 0/5 مک فارلند معادل cfu/ml تنظیم گردید و با دو بار رقیق سازی به در محیط کشت BHI broth تهیه گردید. تعیین حداقل غلظت مهار کنندگی رشد - MIC - به روش میکرودایلوشن و حداقل غلظت کشندگی برای این روش از میکروپلیت های 96 خانه ای با چاهک ته گرد و با حجم 300 میکرولیتر که دارای 12 ستون و 8 ردیف می باشند استفاده شد. باکتری ها در محیط کشت BHI براث بمدت 20 ساعت انکوبه گذاری شدند و بر روی استاندارد 0/5 مک فارلند تنظیم شدند.
