مقاله تاثیر عصاره هیدروالکلی میوه هندوانه ابوجهل بر کاهش بیان ژن سایتوکین های پیش التهابی TNF - α IL - 1βCOX - 2وiNOS در کندروسیت ها و تولید NO و PGE - 2 در سلول های THP - 1 تحریک شده توسط LPS

بخشی از مقاله

چکیده

نقش التهاب در استئوآرتریت شناخته شده است و از این میان سیتوکین های پیش التهابی COX-2 ,TNF-α , IL-1βو iNOS و تولید NO و PGE-2 مورد توجه قرار گرفت. استفاده از گیاهان دارویی به عنوان داروهای ضد درد و ضد التهاب در طب عامیانه ایران متداول است گرچه در بسیاری از بیماری ها، فعالیت اصلی گیاهان ناشناخته است بهر حال بررسی تاثیرات فارماکولوژیکال - داروشناسی - عصارههای خام گیاهی میتواندبه عنوان یک استراتژی تحقیق محلی برای جستچوی داروهای جدید استفاده شود. فعالیت ضد التهابی عصاره هندوانه ابو جهل[ Citrullus colocynthis. - L. - Schrad ] به دلیل حضور فلاونوئیدهای فعال مانند apigenin، کوئرستین، naringein و لوتئولین است . فلاوونوئیدها برای جلوگیری از سنتز پروستاگلندین ها و کاربرد درمانی در التهاب شناخته شده اند.

روش انجام مطالعه : عصاره الکلی هندوانه ابو جهل از مرکز ذخایر ژنتیکی تهیه گردید. برای تهیه سلول ها مفصل و مایع مفصلی متاکارپ اندام حرکتی قدامی گوساله8 ماهه هلشتاین کاملا سالم، بدون مشاهده نشانه های التهاب، خونریزی بلافاصله بعد از کشتار در داخل کیسه استریل و در دمای4 °C به آزمایشگاه ارسال گردید.

مونوسیت ها به صورت فلاسکی حاوی6×106میلیون مونوسیت و60 میلی لیتر محیط کشت غنی شده از انستیتو پاستور تهیه گردید. هریک از انواع سلول ها در شرایط مناسب کشت داده شد و با استفاده از هموسایتومر سلولها شمارش وقدرت زنده مانی - viability - آن ها با روش تریپان بلو ارزیابی شد و پس از تکثیر وتزریق LPS به منظور افزایش سطح سایتوکین ها به وسیله لیپوپلی ساکارید - LPS - تیمار شدند. بعد از کشت مجدد سلولها در دمای 37 درجه سانتی گراد در انکوباتور CO2 دار با رطوبت 90 برای مراحل بعدی نگهداری شد. پس ازجدا سازی RNA و تهیه cDNA انجام RT_PCR & PCR و سپس بااستفاده از روش Real Time- PCR به بررسی میزان بیان ژن های موردنظر پرداخته شد .

نتیجه: عصاره الکلی میوه هندوانه ابوجهل منجر به کاهش بیان ژن TNF-α ,COX-2, iNOS و کاهش تولید NO و PGE-در سلولهای کندروسیت و مونوسیت/ماکروفاژ تحریک شده توسط LPS گشت

-1 مقدمه:

استئوآرتریت رایجترین شکل ورم مفاصل و یکی از علل اصلی ناتوانی است. اغلب استئوآرتریت به عنوان یک بیماری دژنراتیو مفصلی در نظر گرفته میشود، که تعبیرناآشنائیست. به دلیل اینکه یک پروسه ساده سایش و گسیختگی نیست بلکه تغییر وضعیت دادن بافتهای مفصلی تحریک شده توسط یک میزبان واسطههای التهابی در مفاصل تحت تاثیر واقع شده است. با وجود ماهیت جند عاملی استئو آرتریت، تغییرات آسیب شناختی دیده شده در مفاصل ملتهب حاصل از استئوآرتریت - - Osteoarthritic دارای ویژگیهای مشترکی است که به کل ساختمان مفصل تاثیر گذاشته و باعث درد، بدشکلی و از دست دادن عملکرد می شود.

تغییرات آسیب شناسی که در مفاصل استئوآرتریتی دیده میشود شامل تخریب غضروف مفصلی، ضخیم شدن استخوان ساب کندرال ، تشکیل استئوفیت، درجات متغیر التهاب سینوویال، انحطاط رباط و در زانو منیسک و هیپرتروفی کپسول مفصل است. همچنین میتواند تغییراتی در عضلات اطراف مفصل، اعصاب ، بورسا - کیسه کوچک پرشده با مایع - ، لایه چربی موضعی که ممکن است به استئوآرتریت یاعلائم آن کمک کند، وجود داشته باشد.گر چه غضروف مفصلی بالغ عصب و رگ خونی ندارد تغییرات آسیب شناسی در بافتهای غیر اتصالی غضروفی در درک منابع تولید درد در استئوآرتریت مورد توجه است.

شیوع استئوآرتریت در ایران، در مناطق روستایی% 16 و در مناطق شهری% 15 برآورد شده است - دواتچی. - 2006 شیوع آرتروز زانو نیز در مناطق شهری و روستایی % 9/76 تا % 19/ 3 گزارش شده است - دواتچی و همکاران2008، . - 2009 آمار مذکور، مؤید شیوع بالای ابتلا به استئوآرتریت زانو در کشور است - از هر 6/5 نفر 1 نفر - که با توجه به افزایش متوسط سنی جامعه، شیوه زندگی و عادات نادرست قابل توجیه میباشد

استفاده از گیاهان دارویی به عنوان داروهای ضد درد و ضد التهاب در طب عامیانه در ایران متداول است گرچه در بسیاری از بیماریها، فعالیت اصلی گیاهان ناشناخته است بهر حال بررسی تاثیرات فارماکولوژیکال - داروشناسی - عصارههای خام گیاهی میتواندبه عنوان یک استراتژی تحقیق محلی برای جستجوی داروهای جدید استفاده شود

فلات وسیع ایران، از اقلیمهاو محیطهای گوناگونی در قسمت های مختلف برخودار است. به همین دلیل گونههایگیاهی متنوعی در آن انتشار دارد، بهطوریکه جوامع گیاهی منتشردر این فلات هر یک دارای ترکیبی معین از انبوه مختلف گونههاست. در فلات مذکور، پهنه اصلی انتشار جوامع گیاهی متعلق به کشور ایران است و در میان فلور غنی ایران که بیش از 7500گونه را در بر میگیرد، تعدادبسیار زیادی از آنهارا گیاهانی تشکیل میدهند که به دلایلی دارویی نامیده میشوند.

این گیاهان اغلب از دیرباز توسط بشر شناختهشده و مورد استفاده قرارگرفتهاند. از نیمه دوم قرن اخیر، تحقیقات فارماکودینامیک وسیعی روی گیاهان دارویی در بیشتر کشورهای جهان انجامگرفته و بهویژه در چند سال اخیر کشفیات مهمی روی ترکیبات ناشناخته گیاهان مذکور حاصل شده و بر این اساس داروهای فراوانی تهیه و به بازار عرضه گردیدهاست، از این رو ضرورت مطالعه بر روی مواد دارویی مؤثر با فلور غنی، بیش از پیش اهمیت یافتهاست.

زیرا کشف گونههای جدید دارویی از میان گیاهانی که از سرزمینهای دیگر آورده شدهاند و پیبردن به ارزش دارویی این گونهها و یافتن مواد جدیدی از ویتامینها، هورمونها، مواد ضد میکروبی، ضد ویروسی و همچنین ضد توموری در میان آنها، ما را به احتمال حضور موادمؤثره ارزشمند در بین گیاهان دارویی بیش از پیش امیدوار ساختهاست. در این راستا حفظ ذخایر متابولیتی طبیعت و کشت و اصلاح گیاهان دارویی امری اجتناب ناپذیر است.

از آنجا که میتوان مقدار زیادی از این گیاهان دارویی را درمساحت محدود کشت نمود و کمیت و کیفیت مواد مؤثره تشکیلدهنده آنها را به راحتی کنترل کرد - امید بیگی - 1384 در این مطالعه به بررسی نقش ضد التهاب عصاره هیدرو الکلی - 80 - گیاه هندوانه ابوجهل از طریق تاثیر بر بیان ژن  IL-1β    COX-2 ,TNF-α,و il-18, iNOS    در سلول های کندروسیت جدا شده از مفصل carpometacarpal - CMC - گوساله هشت ماهه نژاد هلشتاین PGE-2 , NO, IL-1β,TNF- α درسلولهای THP-1 پرداخته شده است.

:TNF-α - تومور نکروزیس فاکتور آلفا - پروتئین سیگنالی سلولی درگیر درالتهاب سیستمیک و یکی از سیتوکینهای واکنش فاز حاد است. به نظر میرسد بسیاری از اندامهای بدن تحت تاثیر TNF-α قرار می گیرند TNF-α عمدتا توسط ماکروفاژها ی فعال شده تولید میشود.گرچه ممکن است توسط سلولهای دیگر مثل لنفوسیتCD+ 4، سلولهایNK، نوتروفیلها، ماست سلها، ائوزینوفیلها و سلولهای عصبی تولید شود. نقش اصلی TNF-α در تنظیم سلولهای ایمنی است. به عنوان ایجادکننده تب درونزا ، قادر به القا تب، مرگ برنامهریزی شده سلول، سو هاضمه، التهاب و مهار تومورزایی و تکثیر ویروسی و پاسخ به عفونت از طریق سلولهای تولید کننده IL-1 وIL-6 است. اختلال در تنظیم تولید TNF-α در انواع بیماری انسان از جمله آلزایمر، سرطان، افسردگی، و بیماری التهابی روده دخیل است

در پستانداران دو ایزوفرم از این آنزیم، بنام های Cox-1و Cox-2 وجود دارد آنزیم Cox-1 در اکثر بافتها بطور پیوسته بیان می شود، در حالی که  Cox-2به عنوان جزئی از واکنش های التهابی در پاسخ به تحریکات خارج سلولی سریعا القاء میگردد و میزان آن در اغلب بافت های طبیعیغیر قابل سنجش میباشد. به علا وه Cox-2 نقش مهمی در تنظیم تکثیر سلولی، تمایززدایی و سرطان زایی ایفامیکند.در واقع Cox-2 با التهاب، درد، رگ زایی و سرطان ارتباط دارد.

پروستاگلندین : - PGE - 2 - E-2 یک محصول عمده سیکلواکسیژناز 2 است و میتواند در غضروف هم اثر کاتابولیک و هم اثر آنابولیک نشان دهد. پروستاگلندینE-2 همچنین میتواند تخریب پروتئوگلیکان القاشده توسط تحریک IL - 1 β ر کشت غضروفی انسان و گاو را معکوس کند. آزمایشات در غضروف سالم انسان نشان داد که پروستاگلندینE-2 به تنهایی هیچ تاثیری روی تبدیل پروتئوگلیکان در غضروف سالم ندارد.گرچه وقتی در حضور IL - 1 βوTNF-α کشت داده شود تغییرو تبدیل پروتئوگلیکان افزایش مییابد.

افزایش پروستاگلندین E-2این تغییر و تبدیل را افزایش می دهد. وقتی تولید پروستاگلندین E-2 توسط مهار انتخابی سیکلواکسژناز 2 مهار میشود اثرات نامطلوب IL- 1 β وTNF-α معکوس میشود.آزمایشات همچنین نشان دادهاتد که همبستگی منفی بین تولید نیتریک اکسیدو سنتز پروتئوگلیکان و یک همبستگی مثبت بین تولید نیتریک اکسیدو انتشارپروتئوگلیکان وجوددارد. مسیرهای متعددی از جمله تولید نیتریک اکسید احتمالا به پروستاگلندینE-2 کمک میکند، سنتز پروتئوگلیکان را تعدیل کندو دوباره تولید نیتریک اکسید به اثرات کاتابولیک استئوآرتریت ارتباط پیدا میکند