بخشی از مقاله
چکیده
RNAهای بلند غیرکننده رونوشتهای بلندتر از 222 نوکلئوتید هستند که هیچ پروتئینی کد نمی کنند. یافته های اخیر که حاکی از عملکرد آنها در جوانب مختلف بیولوژی سلولی است توجهات زیادی را در مورد پتانسیل آنها در ایجاد بیماریها به خود جلب کرده است.
هدف از این مطالعه بررسی ارتباط بیان HOXD-AS1 با سرطان پستان است. بدین منظور، نمونه های توموری سرطان پستان و حاشیه توموری آنها از بیماران مبتال به سرطان پستان که در بیمارستان امام رضا تبریز بستری شدند جمع آوری شد.
RNA تام نمونه ها توسط تریزول استخراج و cDNA آنها تو کیت سنتز cDNA سنتز گردید. در نهایت بیان HOXD-AS1 به روش کمی توسط Real time PCR بررسی شد. نتایج حاصل نشان داد که بیان HOXD-AS1 در نمونه های توموری پستان در مقایسه با نمونه های حاشیه توموری افزایش معنی داری نشان می دهد. این یافته ها، دخالت HOXD-AS1 را در تشکیل و پیشرفت سرطان، بیشتر گوشزد می نماید.
مقدمه:
سرطان، بیماری پیچیدهای است که بیان ژن در آن بهصورت نامتعادل انجام میپذیرد. عوامل ژنتیکی درگیر در ایجاد سرطان، به نحو قابل توجهی مورد مطالعه قرار گرفتهاند. با این وجود، شواهد نشان دادهاند که بخش چشم-گیری از عوامل مستعدکننده به سرطان را نمیتوان به تغییر در توالی کدکننده پروتئین نسبت داد. شناسایی شمار زیادی از RNAهای غیر کدکننده بلند
lncRNA - با طول بیشتر از 222 جفت باز در انسان، به پردهبرداری از جایگاه این مولکولها در آسیبشناسی سرطان و نقش آنها به عنوان اجزای مهم در تومورزایی، کمک شایانی نمودهاست
نقش lncRNAها بهعنوان عوامل سرکوبگر تومور یا انکوژنها، در انواع متعددی از سرطانهای شایع به اثبات رسیدهاست. مطالعات اخیر نشان میدهند که چندین جایگاه خطر موثر در ایجاد سرطان، به lncRNAها رونویسی میشوند و رونوشتهای حاصل، نقشهای کلیدی در فرآیند تومورزایی ایفا میکنند
در این مطالعه، بررسی های ما در سطح ژن های HOX انجام گرفته است. ژنهای HOX جز ژنهای housekeeping میباشند، این ژنها فعالیت دیگر ژنهای مسئول رشد اولیه یک ارگانیسم را کنترل مینمایند و بهطور تکاملی توالی آنها در میان انسانها و سایر گونههای جانوری حفاظت شده است. در ناحیه ژنی HOXDیک lncRNA تحت عنوان HOXD_AS1 شناخته شده است و شامل نواحی آنتیسنس هستند که در دسته ژنی HOX یا هومئوباکس قرار دارد
با توجه به این که بخش قابل توجهی از آسیبشناسی سرطان، معطوف به lncRNAها است، در مطالعه ی حاضر، میزان بیان RNA غیر کدکننده HOXD-AS در نمونه های سرطان پستان و حاشیه توموری آن مورد بررسی قرار می گیرد.
مواد و روش:
نمونه های مورد بررسی در این پژوهش، نمونه های توموری سرطان پستان و حاشیه توموری آن ها بوده اند که از بیماران مبتال به سرطان پستان که در بیمارستان امام رضا تبریز بستری بودند جمع آوری شده اند. نمونه ها با رضایت بیمار، چک لیست اطالعات دموگرافیک کامل از بیمار اخذ شده اند که، از قطعات ی بیوپسی تومور و حاشیه ی تومور 2/5 - تا 42 میلی گرم - توسط جراح مربوطه اخذ گردید. نمونه های اخذ شده، در یک ویال اپندروف استریل حاوی محلولی که از تخریب RNA های سلول جلوگیری می کند - RNALater - ، قرار داده شده و بالفاصله به آزمایشگاه انتقال و در فریزر 22- درجهسانتیگراد نگهداری شدند تا برای استخراج RNA مورد استفاده قرار گیرند.
جهت بررسی بیان ژن هدف از روش Real - time PCR استفاده شد. بدین منظور، ابتدا RNA تام سلولی2 از بافتهای سرطانی و حاشیه توموری استخراج گردید در مرحله ی بعد، استخراج RNA، انجام پذیرفت و سپس از ژل آگاروز جهت بررسی RNA های استخراج شده استفاده گردید. پس از حصول اطمینان از سالم بودن RNA، واکنش رونویسی معکوس4انجام شد و cDNAتولیدشده بهعنوان الگو برای انجام واکنش PCRمورد استفاده قرار گرفت. از ژن GAPDH به عنوان کنترل داخلی استفاده شد.
