بخشی از مقاله
چکیده
بیماري نیوآاسل از ﲨله بیماري هاي بسیار مسري میباشد آه عامل آن ویروس نیوآاسل بوده و ﲤامی گونه پرندگان را به بیماري مبتلا آند. ویروس نیوآاسل به سه پاتوتیپ مزوژنیک ،ولوژنیک و لنتوژنیک تقسیم میشود. پروتئﲔ ﳘوگلوتنﲔ-نورامینیدازموجود در ویروس نیوآاسل از پروتئﲔ هاي غشائی و داراي عملکرد مهم وچندگانه میباشد آه نقش آلیدي در اتصال ویروس ، خاصیت نورامینیدازي و اتصال را ایفا میکند. ژن HN شش جایگاه گلیکوزیله شونده دارد آه دو تا از آهنا براي اضافه شدن آربوهیدرات استفاده نشده اند نقش واقعی چهار ﳏل گلیکوزیله شونده فعال در پاتوژنز ویروس تا به حال ناشناخته باقیمانده است .
عمل سیالیداز یا نورامینیداز ها اتصال و هیدرولیز اسید سیالیک انتهائی گلایکو آانژوگیت هاي متعدد و بدین شکل نقش ایفا آردن در پاتوژنز ویروس میباشد . در این مطالعه تواﱄ اسید آمینه اي پروتئﲔ سیالیداز ویروس هاي بیماریزا - ولوژنیک - جداشده از ایران مورد آنالیز قرار گرفته و با اسﱰین هاي غﲑ بیماریزه - لنتوژن - مورد مقایسه قرار گرفت. بدین منظور یک جفت پراﳝر جهت تکثﲑ قطعه اي به طول 1000 جفت باز از ژن HN طراحی شد. بعد از تواﱄ یابی ژن HN و ترﲨه آن ، تواﱄ اسیدآمینه اي ﳕونه هاي بیماریزاي ایران با سویه هاي غﲑ بیماریزا مورد مقایسه قرار گرفت ونتایج نشان داد آه 16 اسید آمینه در پروتئﲔ سیالیداز بﲔ دوگروه ﳕونه از ویروس ها الگوي اختصاصی دارا میباشد .
این الگو در ویروس هاي واآسینال ، غﲑبیماریزا - Arg269, Ile404 ,Ser432 ,Gly494 ,Val495 ,Ala502, Thr540, Asn550 - و در ویروس هاي بیماریزا یا ولوژنیک - Ser269 ,Val404 , Tyr432 ,Asp494 ,Glu495 ,Ser502 ,Ala540 ,Asp550 - بود. ﳘچنﲔ شاخص آنتیژنیک با روش Jameson-Wolf ﲣمﲔ زده شد و نشان داد آه تغیﲑ در 8 اسید آمینه موجب تغیﲑ شاخص آنتیژنیکی پروتئﲔ HN میشود . جالب توجه آنکه تفاوت اسیدآمینه اي در موقعیت هاي 432، 479 و 540 در اطراف سه ﳏل گلیکوزیله شونده میباشد . بنظر ما این 8 اسید آمینه خصوصا سه اسید آمینه موقعیت هاي 432، 479 و 540 احتمالا با پروتئﲔ فیوژن اثر متقابل داشته و نقش موثري در پاتوژنز ویروس نیوآاسل دارند.
مقدمه:
بیماري نیوآاسل از ﲨله بیماري هاي بسیار مسري و آشنده میباشد آه عامل آن ویروس نیوآاسل بوده و ﲤامی گونه پرندگان را به بیماري مبتلا آند. ویروس نیوآاسل به سه پاتوتیپ مزوژنیک آه حدت متوسط داشته و تلفات آمی اﳚاد میکند ،ولوژنیک آه حدت زیاد داشته و تلفات سنگﲔ و فرم عصﱯ بیماري را اﳚاد میکند و لنتوژنیک بدون حدت آه آلودگی خفیف تنفسی را اﳚاد میکند تقسیم میشوند - NDV . - 1 متعلق به جنس Avulavirus وخانواده Paramyxoviridae و شاخه Mononegavirales میباشد 5 - و. - 9 ژنوم ویروس نیوآاسل از جنس RNA تک رشته است با پلاریته منفی - - 9 به طول 15186 باز . - 2 - ژنوم ویروس شامل 6 ژن است آه هفت پروتئﲔ ویروس را رمز گزاري میکند - . - 10
سه پروتئﲔ NP , P وL در نوآلئو آپسید ویروس یافت میشوند . دو پروتئﲔ غشائ خارجی پروتئﲔ F و HN میباشد داخلی ترین پروتئﲔ ویروس پروتئﲔ M میباشد. دو پروتئﲔ دیگر یعﲏ V ,W در پروسه نسخه برداري از ژن P اﳚاد میگردد . پروتئﲔ HN نقش مهمی در سیکل زندگی ویروس دارد. ایفاي نقش در اتصال ویروس به سلول میزبان . ﳘچنﲔ جدا آردن رسپتورهاي اسید سیالیک از سطح ویروس و سلول ، ﳘچنﲔ پیشگﲑي از اتصال ویروس ها به یکدیگر یا اتصال آنان به غشا سلوﱄ . - 4 - نقش گلیکوزیله شدن در فعالیت بیولوژیک این پرو تئﲔ مشخص شده است - . - 6 جاﲜا آردن ژن HN بﲔ ویروس هاي بدون حدت با ویروس هاي حاد نقش این ژن را در پاتوژنز ویروس نشان داده است - 7و - 8 مطالعات اخﲑ نشان داده است در القا اینﱰفرون آلفا و فاآتور ﲣریب تومور نقش دارد . - 11 - با مشخص شدن تاثﲑات اﳝونولوژیک HN مطالعه برروي این پروتئﲔ در جهت ارتقاء واآسنهاي NDV میتواند مفید باشد.
مواد و روشها:
نمونها:
تعداد بیست و هفت ﳕونه ویروس بیماریزا جدا شده در ایران و سه ﳕونه واآسینال یا لنتوژن B1 , Lasota , V4 از ﲞش تشخیص بیماري هاي طیور و تولید واآسن هاي طیور موسسه رازي ﲨه آوري شد.طراحی پرایمر وانجام :RT-PCRدو پراﳝرجلودار - 'F1 - 5'-ttc aca acc tcc gtt cta cc-3 و - F2 - 5'- aag tct tgc agt gtg agt gc- 3' وسه پراﳝر برگشﱵ, - 'R1 - 5' –ttg cac tca cac tgc aag ac-3' - , R2 - 5'-tga gat gtc cct act gtg ag -3R3 - 5'-tca tct ttg agg atc tca ac-3' - جهت تکثﲑ قطعات به طول 1000 500،800 و1800 جفت باز طراحی شد.RNA ویروسی از مایع آلانتوئیک بوسیله آیت ﲣلیص RNA شرآت Roche ﲣلیص شد. واآنش RT-PCR در حجم 50 میکرولیﱰ حاوي 2/5 میلی مولار dNTP ،1/5 میلی مولار Mgcl2، 1 میکرولیﱰ آنزﱘ AMV , PWO ، 2/5 میکرولیﱰ DTT،10 پیکامول از دو پراﳝر و 1 میکروگرم . RNA با برنامه PCR شامل 50 درجه سانتیگراد ﲟدت 30 دقیقه، 94 درجه ﲟدت 3 دقیقه ، 52 درجه ﲟدت 1 دقیقه و 72 درجه 1 دقیقه با تکرار 30 سیکل اﳒام شد.
توالی یابی محصول :PCR
ﳏصول RT-PCR بوسیله آیت ﲣلیص ﳏصول PCR شرآت Roche ﲣلیص شد و جهت تواﱄ یابی به شرآت MWG آﳌان ارسال شد .
بحث و نتایج:
نتایج حاصل از تواﱄ یابی در دو سطح نوآلئوتیدي و پروتئیﲏ با نرم افزار Megalign مورد آنالیز قرار گرفت .مقایسه توالی اسید هاي آمینه پروتئین HN بین ایزوله هاي ایران با سوش هاي واآسینال در شکل بالا آمده است از ایزوله هاي ایران آه همگی الگوي ثابت داشتند تنها یک توالی بعنوان الگو آورده شده است تواﱄ اسید آمینه اي HN بﲔ اسﱰینهاي واآسینال شامل B1 ,Lasota , V4 با ایزوله هاي ولوژنیک ایران آاملا متفاوت هستند. بیشﱰین درصد تشابه - - %98 ﳕونه هاي ایران با دو ایزوله روسی بنام هاي Vol95 , ASTR74 و آمﱰین تشابه را با سوشهاي واآسینال - B1, Lasota ,V4 - 82% ﳏاسبه شد.نتایج نشان میدهد آه 16 اسید آمینه در دو گروه ویروس بیماریزا و غﲑ
بیماریزا داراي الگوي آاملا اختصاصی میباشند .
این الگو در ویروس هاي واآسینال ، غﲑ بیماریزا ,Val495 ,Ala502, Thr540, Asn550 - - Arg269, Ile404 ,Ser432 ,Gly494و در ویروس هاي بیماریزا یا ولوژنیک ,Asp494 ,Glu495 ,Ser502 - Ser269 ,Val404 ,Tyr432,Ala540 ,Asp550 - بود. ﳘچنﲔ شاخص آنتیژنیک با روش Jameson-Wolf ﲣمﲔ زده شد ونشان داد آه تغیﲑ در 8 اسید آمینه موجب تغیﲑ شاخص آنتیژنیکی پروتئﲔ HN میشود . جالب توجه آنکه تفاوت اسیدآمینه اي در موقعیت هاي 432 ، 479 و 540 در اطراف سه ﳏل گلیکوزیله شونده میباشد . بنظر ما این 8 اسید آمینه خصوصا سه اسید آمینه موقعیت هاي 432، 479 و 540 احتمالا با پروتئﲔ فیوژن اثر متقابل داشته و نقش موثري در پاتوژنز ویروس نیوآاسل دارند.
تشکر و قدر دانی:
بدینوسیله از آلیه ﳘکاران ﲞش تشخیص بیماري هاي طیور و ﲞش تولید واآسن هاي طیور موسسه رازي آه ﳕونه هاي مورد مطالعه را در اختیار اینجانب قرار دادند ،سپاسگزاري میشود.
