بخشی از مقاله
چکیده
در این مطالعه اثر تغذیه پوسته پسته بهجای یونجه بر جمعیت باکتریهای تجزیه کننده سلولز در مایع شکمبه گوسفندان بلوچی بررسی شد. از 6 رأس گوسفند بلوچی دارای فیستولای شکمبهای با میانگین وزنی 40/1 1/8 - kg - در قالب طرح مربع لاتین چرخشی در 3 دوره 21 روزه استفاده شد. سه تیمار آزمایشی عبارت بودند از: - 1 جیره کنترل، 50 - 2 درصد از یونجه در جیره اهد با پوست پسته جایگزین شد 100 - 3 - LPH - درصد از یونجه در جیره شاهد با پوست پسته جایگزین شد . - HPH - جمعیت باکتریایی بهوسیله استخراج DNA نمونههای مایع شکمبه و انجام Real Time PCR اندازهگیری شدند. با افزایش مقدار پوست پسته در جیره جمعیت کل باکتریها، باکتریهای فیبروباکترسوکسینوژنز و رومینوکوکوس آلبوس موجود درشکمبه کاهش یافت . - P<0/01 - در عین حال پوست پسته تأثیری بر جمعیت رومینوکوکوس فلاووفیسنز موجود در شکمبه نداشت.
کلمات کلیدی: پوسته پسته، جمعیت میکروبی، تانن، گوسفند بلوچی.
مقدمه
یکی از محصولات فرعی فیبری که در کشور ما به مقدار زیادی یافت میشود، پوست پسته است. اگرچه استفاده از این محصولات فرعی در کشور رو به افزایش است و میتوانند به مقدار زیادی جایگزین بخش علوفهای و یا کنسانترهای جیره شوند، با این وجود اطلاعات کمی در خصوص تأثیر آنها بر عملکرد دام و بهویژه شرایط شکمبه و جمعیت میکروبی، وجود دارد .وجود ترکیبات ضد تغذیهای همانند ترکیبات فنلی مثل تانن در پوسته پسته میتواند منجر به کاهش تجزیهپذیری و قابلیت هضم جیرههای حاوی این ترکیبات شود . - Bohluli & Naserian., 2007 - درصد ترکیبات فنولیک و تانن پوست پسته به ترتیب، 7/5-9/5 و 3/5-4/5 درصد گزارش شده است . - Bohluli et al., 2007 - محصولات فرعی پسته شامل، پوسته خارجی، ساقه، برگ و مقدار کمی قشر میانی غلاف میوه و مغز میوه است . - Bohluli et al., 2007 - درصد پروتئین خام، چربی خام، الیاف نامحلول در شوینده خنثی و الیاف نامحلول در شوینده اسیدی پوسته پسته به ترتیب 16/21 0/55، 6/32 0/88، 25 0/01 و 20/37 0/3 گزارش شده است . - Behgar et al., 2009 - با وجود تلاشهای صورت گرفته در مورد تأثیر گیاهان غنی از تانن بر جمعیت میکروبی موجود در شکمبه، اطلاعات چندانی در مورد تأثیر پوسته پسته بر جمعیت باکتریهای سلولولتیک در شکمبه وجود ندارد. هدف از این آزمایش بررسی تأثیر جایگزینی پوسته پسته با یونجه در جیره گوسفندان بلوچی بر جمعیت باکتریهای سلولولتیک در شکمبه است.
مواد و روشها
3 تیمار غذایی به 6 رأس گوسفند نژاد بلوچی با میانگین وزنی 40/1 1/8 - kg - و در قالب طرح مربع لاتین چرخشی اختصاص داده شد. از 3 دوره آزمایشی استفاده شد و طول هر دوره 21 روز در نظر گرفته شد که 14 روز بهمنظور عادتپذیری و 7 روز بهعنوان جمعآوری نمونه بود. سه جیره آزمایشی شامل - 1 شاهد 50 - 2 درصد از یونجه در جیره شاهد با پوست پسته جایگزین شد 100 - 3 - LPH - درصد از یونجه در جیره شاهد با پوست پسته جایگزین شد . - HPH - جیرهها برای هر گوسفند، در اول هر دوره برای کل دوره تهیه و نگهداری میشدند .جیره پایه شامل، 400 گرم یونجه، 200 گرم کاه گندم و 200 گرم کنسانتره بر پایه جو بود - جدول . - 1
جدول -1 اجزاء و ترکیب شیمیایی جیره های آزمایشی - براساس ماده خشک - .
25 LPH1درصد از یونجه در جیره شاهد با پوست پسته جایگزین شد 50 HPH2 درصد از یونجه در جیره شاهد با پوست پسته جایگزین شد.
از مایع شکمبه قبل از خوراک صبحگاهی - گوسفندهای تغذیه شده با سه جیره آزمایشی، جهت تعیین باکتریهای آزاد در مایع شکمبه نمونهبرداری گردید و استخراج DNA بر روی آنها انجام شد. با استفاده از روش، Real-Time PCR جمعیت کل باکتری های آزاد، فیبروباکتر سوکسینوژنز، رومینوکوکوس فلاووفیسنز و رومینوکوکوس آلبوس در مایع شکمبه گوسفندان قبل از خوراک صبحگاهی مورد بررسی قرار گرفتند. واکنش PCR با استفاده از پرایمرهای مختص گونهای مربوط به 16. S rDNA انجام شد.
واکنشهای تکثیر Real-Time PCR با استفاده از دستگاه - fast Real-Time PCR Systems, AppliedBiosystem - ABI 7300و پلتها 96 خانهای انجام شد. برای انجام واکنشها از کیتهای پیش ساخته Real Time-PCR حاوی سایبرگرین شرکت سینتول روسیه استفاده شد . - SYBRGreen I qPCR Master Mix, Syntol -
شرایط واکنش PCR برای باکتریهای تجزیهکننده سلولز و باکتریهای عمومی شامل یک چرخه بهمدت 5 دقیقه با درجه حرارت 95 درجه سانتیگراد بهمنظور واسرشت سازی 35 DNA چرخه شامل: 95 درجه سانتیگراد بهمدت 15 ثانیه، 61 درجه سانتیگراد بهمدت 15ثانیه ، بهمنظور اتصال پرایمر به DNA ، 72 درجه سانتیگراد بهمنظور بسط DNA هدف بهمدت 30 ثانیه بود. در انتهای هر چرخه از دمای 81 درجه سانتیگراد بهمدت 30 ثانیه بهمنظور جمعآوری دادهها توسط دستگاه استفاده شد همچنین در انتهای هر آزمایش از Melting Curve بهمنظور بررسی احتمال تکثیر غیر اختصاصی در هر نمونه استفاده شد. داده های حاصل از دستگاه ABI با نرم افزار SDS آنالیز شد. تغییر در جمعیت باکتریهای تجزیه کننده سلولز در گوسفندان مصرف کننده تیمارهای آزمایشی در مقایسه با گوسفندان مصرف کننده جیره کنترل در همان دوره با استفاده از روش نسبی محاسبه شد =2- &W تغییر نسبی در DNA نسبت به شاهد، در این فرمول، &W برابر است با Ct گروه تیمار منهای Ct گروه شاهد و t عبارت است از سیکلی که در آن سیکل تولید فلورسنس در واکنش به حد آستانه می رسد. برای رسیدن به نتایج مناسب، تمام مقایسات نسبی براساس مقدار ثابتی از DNA استخراج شده انجام شدند. جمعیت باکتریهای تجزیهکننده سلولز بهصورت تغییر در DNA نسبت به شاهد به ازاء هر میکرولیتر DNA استخراج شده بیان گردید و غلظت کل باکتریهای شکمبهای با استفاده از منحنی استاندارد و به صورت نانوگرم در هر میکرولیتر از DNA استخراج شده بیان گردید. تجزیه آماری دادههای جمعیت باکتریایی حاصل از گوسفندان با استفاده از مدل طرح چرخشی در غالب مربع لاتین با استفاده از رویه آماری GLM به صورت زیر در نرمافزار SAS انجام شد و مقایسه میانگینها به روش توکی در سطح احتمال 5 درصد انجام شد.
