بخشی از مقاله
چکیده:
پراکسیدازها متعلق به خانواده بزرگی از آنزیم ها هستند که دارای گروه پروستتیک فری پروتوپورفیرین 9 می باشند و اکسیداسیون دامنه وسیعی از ترکیبات فنلی شامل گایاکول، پیروگالول، اسید کلروژنیک و کاتکول را در حضور هیدروژن پراکسید یا هیدروپراکسیدهای آلی کاتالیز می کنند. کاربردهای گسترده پراکسیداز در زمینه های مختلف بیوشیمی پزشکی، بیوتکنولوژی، صنعت غذا و ... جذابیت مطالعه بر روی آنها را افزایش می دهد.
هدف از انجام این پژوهش بررسی تاثیر عصاره های متانولی گیاهان آقطی و دارواش بر میزان فعالیت آنزیم پراکسیداز کلم بروکلی می باشد. برای این منظور ابتدا عصاره متانولی دو گیاه آقطی و دارواش تهیه گردید. اثر مهاری عصاره ها بر روی آنزیم پراکسیداز، در غلظت های 0/1، 0/25 ، 0/5، 0/75 و 1 میلی گرم بر میلی لیتر در طول موج 414 نانومتر مورد سنجش قرار گرفت.
برای سنجش فعالیت آنزیم پراکسیداز از هیدروژن پراکسید به عنوان سوبسترا و ABTS به عنوان معرف رنگی استفاده گردید. نتایج این مطالعه نشان داد عصاره متانولی در غلظت 1 میلی گرم بر میلی لیتر برای آقطی و دارواش دارای اثرات قابل توجهی بودند. مطابق نتایج مطالعات سینتیک مهار آنزیمی، نوع مهار برای عصاره متانولی آقطی از نوع غیر رقابتی، و برای عصاره متانولی دارواش از نوع رقابتی می باشد. بنابراین تلاش برای جداسازی آنها موضوع مناسبی برای پژوهش های آینده با هدف دستیابی به مهارکننده های دارای کاربرد دارویی و صنعتی می باشد.
1-1 مقدمه:
پراکسیدازها - EC 1.11 .1.7 - پروتئین های هم داری هستند که شامل فری پروتوپورفیرین IX به عنوان یک گروه پروستتیک می باشند - Nouren et al., 2013 - و اکسیداسیون دامنه وسیعی از ترکیبات آلی و غیر آلی را در حضور پراکسید هیدروژن انجام می دهند. فرم های مختلف پراکسیداز به طور گسترده ای در موجودات زنده پراکنده شده است. پراکسیدازهای گیاهی بیشتر درون تونوپلاست ها، پلاسمالما و داخل و خارج دیواره سلولی قرار گرفته اند - Marzouki et al., 2005 - و در فعالیت های متعددی شامل حذف پراکسید هیدروژن، بیوسنتز و تخریب لیگنین در دیواره سلولی، متابولیسم اکسین، پاسخ دفاعی به جراحت ها، پاتوژن ها و حشرات شرکت دارند
آنزیم پراکسیداز رایج ترین آنزیم های مورد استفاده در زمینه تشخیص های آزمایشگاهی و ایمونواسی بوده و فرم کونژوگه آنزیم پراکسیداز با آنتی بادی ها در تحقیقات ایمونوسیتوشیمیایی و شناسایی آنتی ژن های بافتی کاربرد دارد. از این آنزیم برای اندازه گیری کلسترول، اوریک اسید، گالاکتوز و گلوکز خون نیز استفاده می شود و در بیوتکنولوژی جهت مشخص نمودن ترتیب ژن ها و در صنعت پلیمرها نیز جهت پلیمریزاسیون فنل ها و دپلیمریزاسیون لیگنین کاربرد دارد
امروزه به خوبی روشن شده است که تخریب اکسیداتیو ناشی از فعالیت گونه های واکنشگر اکسیژن از قبیل رادیکال های سوپراکسید، هیدروکسیل و هیدروژن پراکسید موجب بروز و پیشرفت چندین بیماری مزمن از قبیل بیماری های قلبی- عروقی، آترواسکلروز، سرطان، آلزایمر، پارکینسون، کاتاراکت و التهاب می شود
تحقیق در مورد اثرات بازدارندگی یا فعال کنندگی داروها و بسیاری از ترکیبات شیمیایی دیگر بر روی آنزیم ها نه تنها در صنایع بلکه در داروسازی، پزشکی و عرصه بیوشیمی اهمیت فراوان یافته است
گیاهان به علت تنوع زیستی و ساختمان اجزایشان، منابع منحصر به فرد و تجدید شدنی برای کشف داروهای جدید هستند. در کشورهای صنعتی حدود 50 درصد از داروهای تجویز شده از گیاهان مشتق شده است و طبق اعلام سازمان بهداشت جهانی، گیاهان برای حدود 3,4 میلیارد نفر به عنوان اولین منبع دارویی در کشورهای در حال توسعه محسوب می شوند
استفاده از گیاهان دارویی به صورت سنتی در جوامع مختلف به منظور پیشگیری و درمان بسیاری از بیماری ها معمول است. اخیرا تحقیق و پژوهش بر روی خواص آنتی اکسیدانی گیاهان دارویی که می توانند به عنوان عامل موثر در بهبود سلامتی انسان مطرح باشد، مورد توجه محققان قرار گرفته است
هدف از مطالعه حاضر بررسی عصاره متانولی گیاهان آقطی - Sambucus sebulus - و دارواش - Viscum album - از نظر توانایی مهار کنندگی آنزیم پراکسیداز می باشد. برای این منظور فعالیت آنزیم پراکسیداز در حضور پراکسید هیدروژن به عنوان سوبسترا، ABTS به عنوان معرف رنگی و عصاره ی متانولی آقطی و دارواش در بافر سیترات فسفات اندازه گیری شد. در این روش ABTS تحت تاثیر آنزیم و H2O2 به رادیکال ABTS.+ سبز رنگ تبدیل شده که توسط دستگاه اسپکتروفتومتر قابل اندازه گیری می باشد
2-1 مواد و روش ها
آنزیم پراکسیداز استخراج شده از کلم بروکلی ، 2 و -2 آزینو- بیس -3 - اتیل بنزوتیازولین- -6 سولفونیک اسید - - ABTS - ، پراکسید هیدروژن، بافر سیترات فسفات و متانول.
1-2-1 جمع آورری گیاهان
گیاه آقطی و دارواش از مناطق جنگلی شهر بابل الزی جمع آوری و به آزمایشگاه منتقل شد. پس از شناسایی و رده بندی، توسط دکتر زیست شناسی گیاهی، بخش ها و اندام های مختلف به طور کامل جداسازی شده و بلافاصله به آزمایشگاه منتقل شدند. گیاهان جمع آوری شده در سایه و دمای محیط آزمایشگاه خشک شدند. قبل از تهیه پودر از نمونه ها، آنها از لحاظ نظافت و عدم آلودگی به خاک و یا سایر گیاهان بررسی شدند. سپس به قطعات کوچکی خرد شده و بوسیله آسیاب خانگی مولینکس به صورت پودر نرم در آمدند.
