بخشی از مقاله
چکیده
هدف از انجام این آزمایش بررسی اثر تجمعی دانه جو و کنجاله سویا بر میزان پروتئین قابل استفاده ورودي به روده باریک با استفاده از روش برون تنی بود. تیمار آزمایشی به ترتیب عبارت بودند از: - 1 سویا - 2 جو 0/75 - 3 جو 0/25 + سویا 0/50 - 4 جو 0/50 + سویا 0/25 - 5 جو 0/75 + سویا. نسبتهاي مختلف دانه جو و کنجاله سویا در محیط برون تنی و طی زمانهاي 8، 24 و 48 ساعت در دماي 39 درجه با استفاده از 30 سی سی محیط کشت تحت شرایط بی هوازي کشت داده شدند و پس از اتمام زمانهاي فوق ازت آمونیاکی آنها اندازه گیري شد. بین تیمارهاي مختلف از حیث مقدار پروتئین خام قابل استفاده مؤثر در تمام نرخهاي عبور تفاوت معنی داري وجود داشت
در نرخ عبور 10 درصد در ساعت مقدار پیشساز پروتئین متابولیسمی فراهم شده در تیمار سویا با تیمار جو و سویا - به نسبت مساوي - مشابه بود. کشت دانه جو در محیط حاوي ازت آمونیاکی با نرخ عبور 2 تا 8 درصد در ساعت مقدار پروتئین خام قابل استفاده مؤثر بیشتري نسبت به کنجاله سویا فراهم کرد
مقادیر اندازه گیري شده پروتئین خام قابل استفاده در نسبتهاي مختلف دانه جو و کنجاله سویا با میزان محاسبه شده آن بر اساس کشت جداگانه دانه جو و سویا متفاوت بود و حداکثر اثر تجمعی مثبت در ساعت 24 و تیمار حاوي دانه جو و سویا با نسبت یکسان وجود داشت. به طور کلی نتایج این مطالعه نشان داد روش برون تنی مبتنی بر غلظت ازت آمونیاکی می تواند قبل از تغذیه، مقدار فراهمی پیشساز پروتئین متابولیسمی در روده باریک را در جیرههاي مخلوط با دقت بالایی برآورد کرد.
مقدمه
سیستم پروتئین متابولیسمی در نشخوارکنندگان بر مبناي اندازه گیري ضرایب تجریه پذیري پروتئین خام می باشد که با استفاده از روش کیسه هاي نایلونی انجام می شود
در این روش ضرایب تجزیه پذیري و تجزیه پذیري مؤثر پروتئین یک خوراك به تنهایی آزمایش و محاسبه می گردد و از این ضرایب براي محاسبه پروتئین قابل متابولیسم یک جیره کامل استفاده می شود و پروتئین میکروبی بخشی از پروتئین قابل متابولیسم فراهم شده در روده باریک بوده که به انرژي متابولیسمی قابل تخمیر در شکمبه بستگی دارد اما در این سیستم رفتار تجمعی خوراك هاي مختلف، بازچرخ اوره و آمونیاك به داخل شکمبه و تاثیر آن بر میزان پروتئین میکروبی در محاسبه نادیده گرفته میشود.
نتایج مطالعه ژائو و همکاران - - 14 نشان داد مقدار پروتئین قابل استفاده در روده باریک یک جیره مخلوط به روش برون تنی با مقدار محاسباتی ناشی از کشت جداگانه اجزاي خوراك متفاوت بود که می تواند بدلیل اثرات تجمعی خوراك ها در جیره براي فراهم سازي پروتئین متابولیسمی باشد.
ادموندز و همکاران - 4 - نیز براي تعیین پروتئین قابل استفاده 1 - uCP - در روده باریک، مقدار نیتروژن آمونیاکی در زمان هاي 8 ،24 و 48 ساعت در محیط کشت برون تنی شکمبهاي را اندازه گیري کردند. در این روش مجموع پروتئین میکروبی 2 - MCP - و پروتئین غیر قابل تجزیه 3 - RUP - نشان دهنده میزان پروتئین قابل استفاده یک خوراك و یا جیره مخلوط بود. آزمایشات مشابه درون تنی در حیوانات نشان داد رتبه جیره ها در فراهمی ازت غیر آمونیاکی وارد شده به هزارلا که در آزمایشات درون تنی اندازه گیري شده بود با رتبه آنها در میزان پروتئین قابل استفاده در روده باریک مطابقت داشت
علاوه بر این برخی از معایب روش کیسه هاي نایلونی نظیر خروج ذرات ریز خوراکی از کیسه، آلودگیهاي میکروبی، تکرار پذیري پایین، نیاز به هزینه بالا و نیروي انسانی را نیز کاهش میدهد . - 3 - هدف از انجام این مطالعه تخمین برون تنی میزان پیش ساز پروتئین متابولیسمی دانه جو و کنجاله سویا به صورت جداگانه و یا مخلوط با نسبتهاي متفاوت بود.
مواد و روش ها آماده سازي نمونه هاي خوراکی
کنجاله سویا و دانه جو با استفاده از آسیاب چکشی مجهز به توري با منافذ 1 میلی متر آسیاب شدند. تیمارهاي آزمایشی عبارت بودند از: - 1 سویا - 2 جو 0/75 - 3 جو 0/25 + سویا 0/50 - 4 جو 0/50 + سویا 0/25 - 5 جو 0/75 + سویا.
آزمایش برون تنی
براي اندازه گیري پروتئین قابل استفاده در روده باریک از روش برون تنی شکمبه اي استفاده شد . - 4 - دو ساعت قبل از وعده خوراك دهی صبح از دو راس گاو فیستوله که با جیره نگهداري 60 درصد علوفه و 40 درصد کنسانتره تغذیه شده بودند مایع شکمبه گرفته شد و با استفاده از پارچه متقال دو لایه تحت گازدهی مداوم دي اکسید کربن کاملا صاف شد. مقدار 200 میلی گرم از نمونههاي خوراکی در نسبت هاي مختلف در بطريهاي 120 سی سی و با استفاده از 30 سی سی مخلوط مایع شکمبه و بافر به نسبت 1 به 2 در حمام آب گرم 39 درجه سانتی گراد کشت داده شد.
این آزمایش در قالب طرح کاملا تصادفی با 5 تیمار و 9 تکرار 3 - تکرار براي زمان هاي 8 ،24 ، - 48 انجام شد. براي اطمینان از رعایت نسبتهاي مد نظر، هر ماده خوراکی به صورت جداگانه و طبق نسبت مربوطه توزین و به بطري مخصوص منتقل شد . همچنین براي هر زمان انکوباسیون تعداد 3 بطري بلانک - بدون خوراك - در نظر گرفته شد.
پس از آن بطري ها در زمان هاي 8 ،24 و 48 ساعت پس از کشت از بن ماري خارج و تا دماي 4 درجه سانتی گراد سرد شدند و محتویات آنها با دور 3000 به مدت 10 دقیقه - دور بر دقیقه - سانتریفیوژ شدند. در مرحله بعد 10 سی سی از مایع رویی به داخل ظروف شیشهاي حاوي حجم مساوي 10 - سی سی - اسیدکلریدریک 0/2 نرمال منتقل شد و پس از بستن درب آنها بطريهاي مربوطه تا زمان اندازه گیري ازت آمونیاکی در دماي 4 درجه سانتی گراد نگهداري شدند.
ماده خشک و آنالیز شیمیایی
پس از آسیاب با استفاده از آون و دماي 105 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت ماده خشک نمونهها تعیین شد. براي تعیین پروتئین خام، چربی خام و ماده آلی نمونههاي دانه جو و کنجاله سویا از روش استاندارد - 1 - و براي فیبر نامحلول در شوینده اسیدي از روش ون سوست و همکاران - 13 - استفاده شد و پس از کسر مقدار خاکستر آن، فیبر نامحلول در شوینده اسیدي فاقد خاکستر نیز سنجش شد. ازت آمونیاکی مربوط به زمان هاي 8، 24 و 48 ساعت با استفاده از دستگاه میکروکلدال اندازه گیري شد.
پروتئین قابل استفاده و پروتئین قابل استفاده موثر
میزان پروتئین قابل استفاده در دوازدهه بر حسب گرم در کیلوگرم ماده خشک با استفاده از معادله زیر محاسبه شد:
:NH3N blank مقدار ازت آمونیاکی در بلانک، : N sample مقدار کل ازت آمونیاکی، :NH3 N sample مقدار ازت آمونیاکی نمونه.
مقادیر پروتئین قابلاستفاده در برابر لگاریتم نپري - Ln - زمانهاي مذکور ترسیم شدند و سپس معادله رگرسیون به دست آمد که از آن براي اندازهگیري پروتئین قابلاستفاده مؤثر در دوازدهه - Effective uCP - در نرخهاي عبور مختلف - ساعت - مطابق با معادله ي زیر استفاده گردید:
در این معادله y و a به ترتیب عرض از مبدأ، شیب خط و kp نرخ عبور می باشد.
مدل آماري و آنالیز دادهها
داده ها در قالب طرح کاملا تصادفی با استفاده از مدل زیر آنالیز شد:
Yij؛ متغیر وابسته μ؛ میانگین کل Ti؛ اثر تیمار eij؛ اثر خطاي آزمایشی
براي تجزیه داده از نرم افزار SAS نسخه 9/1 با رویه يGLM استفاده شد. مقایسه میانگین ها با آزمون دانکن در سطح آلفا 0/05 انجام شد.
نتایج و بحث
ترکیبات شیمیایی مواد خوراکی مورد استفاده در آزمایش در جدول 1 ارائه شده است.
جدول :1 ترکیبا ت شیمیایی کنجاله سویا و دانه جو
مقادیر پروتئین خام قابل استفاده ورودي به روده باریک - uCP - در سه زمان مختلف کشت شده به تفکیک در جدول 2 بیان شده است. طبق نتایج بین پروتئین قابل استفاده تیمارها اختلاف معنی داري وجود داشت و این اختلاف در هر سه زمان مورد مطالعه مشاهده گردید . - P<0/01 - مقدار عددي پروتئین قابل استفاده در روده باریک کنجاله سویا 210 /2 - گرم در کیلوگرم ماده خشک - در 8 ساعت پس از آغاز کشت نسبت به پروتئین خام 398 /3 - گرم در کیلوگرم ماده خشک - آن کاهش یافته بود که بیانگر 47 درصد تجزیه شکمبهاي این منبع خوراکی در این زمان می باشد.
جدول: 2 مقادیر پروتئین قابل استفاده - گرم در کیلوگرم ماده خشک - در زمان هاي مختلف در ترکیب هاي مختلف دانه جو و کنجاله سویا
