بخشی از مقاله
چکیده
دیابت اختلال متابولیکی مزمنی است که در چند دهه گذشته افزایش شیوع قابل توجهی داشته است.یکی از عوارض شایع دیابت قندی ، ترمیم بسیار کند یا عدم ترمیم زخم میباشد. با وجود پیشرفت های قابل توجه در درمان زخم، در موارد بسیار زیادی زخم های ایجاد شده در این بیماران التیام پیدا نکرده و به صورت مزمن در می آیند که در نهایت منجر به قطع عضو یا مرگ میشود. SRGFماده ای بسیار عالی برای بازسازی و بهبود طیف وسیعی از بافت ها است. گروهی از بیماریها مثل دیابت، روماتیسم و غیره میتواند مربوط به کمبود فاکتورهای رشد باشند.×SRGFدر تنظیمات بالینی میتواند مورد استفاده قرار بگیرد و احتیاجی به مصرف مواد گران قیمت و فناوری مخصوص ندارد. در حال حاضر این ماده در انسان به منظور جوان سازی پوست ، درمان شدید زخم های پوستی دیابتی، همچنین در گسترش سلولهای استرومای مزانشیمی کاربرد دارد. تعداد18 راس موش صحرایی نر خریداری شد. یک هفته بعد از القای دیابت وبعد ازبیهوشی با کتامین و زایلازین و شیو موهای پشت حیوان دو طرف ستون فقرات زخم هایی به وسیله پانچ بیوپسی ایجاد شد. یک زخم به عنوان کنترل ودیگری درمان در نظر گرفته شد. در گروه درمان در روز ایجاد زخم 4 تزریق SRGF در 4 نقطه در درم و بافت زیر جلدی صورت گرفت. پارامترهای هیستو پاتولوژیکی مثل ضخامت اپی درم ورگ زایی اندازه گیری شد. میزان رگ زایی و ضخامت اپی درم و میزان جمع شدن زخم در گروه درمان به طور قابل توجهی نسبت به گروه کنترل بیشتر بود.
کلید واژه ها: استرپتوزوسین، دیابت، زخم، × SRGF
مقدمه
دیابت شیرین یک اختلال متابولیکی غدد درون ریز است که با افزایش قند خون، وجود قند در ادرار، اختلالات در سوخت و ساز کربوهیدرات، چربی و پروتئین ناشی از کمبود ترشح انسولین ، عمل انسولین و یا هر دو مشخص می شود - . - 1 دیابت یکی از سه قاتلان بزرگ شناخته شده است که پس از سرطان و بیماری های قلبی - مغزی- عروقی باعث وخامت در سلامت انسان می شود و به تدریج در طول سال های اخیر رو به افزایش است - 6 ”زخم های دیابتی یک از مهمترین پیچیدگی های این بیماری است. زخم های دیابتی به دلیل نوروپاتی،×ایسکمی و عفونت ایجاد می شوند.×نوروپاتی مسیرهای اعصاب حسی، حرکتی و×خود مختار را تحت تاثیر قرار می دهد.×فاکتورهای بیماری زا برای نوروپاتی شامل×قند خون، گلیکوزیلاسیون غیرآنزیمی، استرس اکسیداتیو،×عوامل ایسکمیک و هیپوکسیک، اختلال در فاکتور رشد عصبی و اختلالات ایمونولوژیک می باشند.×همه×این عوامل در آسیب به مویرگ ها و اختلال عملکرد عصبی موثر هستند 4 - ،. - 3َِ%× این زخم ها عفونی شده و منجر به قطع عضو می شود . - 8 - علاوه بر این، کل هزینه سالانه درمان بیماری پا×در بیماران مبتلا به دیابت بیش از 1 میلیون×دلار×تخمین زده می شود؟× - 23 - × بنابراین، لازم است که استراتژی های جدید برای پیشگیری و درمان این زخم ها طراحی گردد. استفاده از فاکتورهای رشد ممکن است یک روش امیدبخش برای درمان زخم های دیابتی باشد. بهبود زخم یک فرایند پیچیده ای است که توسط سیگنال های مولکولی موثر بر سلول های مزانشیمی، تکثیر و بازسازی×ماتریکس خارج سلولی کنترل می شود. ترمیم یک پاسخ ایمنی ذاتی بدن برای برای حفظ تمامیت بافت می باشد و شامل مراحل انعقاد، التهاب، تشکیل بافت گرانوله،×بافت پوششی، انقباض زخم و باز سازی بافت می باشد.×سیتوکین ها و عوامل رشد مراحل مختلف ترمیم را کنترل می کنند - . - 17 در این رابطه، توسعه روش هایی لازم است که در فرایند ترمیم زخم کمک کند. عوامل رشد×پلی پپتیدهایی هستند که رشد، تمایز، و سوخت و ساز سلول را کنترل می کنند. عوامل رشد به گیرنده های خاص در سطح سلول متصل شده و رشد سلول را تحریک می کنند؟ اگر چه تنها در مقادیر اندک، تاثیر قدرتمندی بر ترمیم زخم دارند. PRPپلاکتهای غلیظ شده در حجم کوچکی از پلاسما می باشد که به عنوان منبع غنی از فاکتورهای رشد محسوب می شود - - 24 که در سالهای اخیر به دلیل ارزان بودن، استفاده آسان و فقدان اثرات جانبی یه عنوان یک روش درمانی جدید مورد توجه قرار گرفته است. گرانولهای آلفای پلاکتها حاوی فاکتورهای رشد زیادی است که باعث افزایش عروق جدید - angi ogenesi s - ، سنتز کلاژن و تکثیر سلولها شده و قابلیت ترمیم تاندون و لیگامنت، عضلات اسکلتی و استخوان را دارد. اثرات مثبت PRP بر روی آسیبهای تاندون”ٌَד، شکستگیهای استخوانی”ٌٌ“ و جلوگیری از پیشرفت تغییرات دژنراتیو در استئوارتریت گزارش شده است×؟”ِ“استخراج فاکتورهای موجود در پلاکتهاPl asm×Ri ch×i n×Growt h×Fact orsדPRGF”× خوانده می شوند”ًٌ×SRGF.“به عنوان یک ابزاری عمل می کند که اجازه می دهد تا×مقادیر زیادی از فاکتورهای رشد×که باعث تحریک تولید کلاژن و ماتریس خارج سلولی می شود در دسترس بافت آسیب دیده قرار گیرد. ×عوامل رشد با افزایش سریع سلول های مزانشیمی تمایز نیافته در محل زخم باعث تسریع بازسازی در طی ترمیم می شوند؟ مطالعات مختلف بالینی در بیماران دیابتی اثر مثبت فاکتورهای رشد را در تسریع ترمیم زخم نشان داده است”ُ،ٍד؟تحقیق
حاضر، به بررسی پاتولوژیک سرم غنی از فاکتورهای رشد آزاد شده از پلاکت ها rel easedדSRGF”؛ ×Serumri ch×i n×pl at el et growt h×f act ors بر روند ترمیم زخم دیابتی در موش صحرایی خواهد پرداخت.
مواد و روش کار
آماده سازی سرم غنی از فاکتور رشد: آماده سازی rel eased×growt h×f act ors - SRGF؛ ×Serumri ch×i n×pl at el et - خون 15 سر موش صحرایی نر نژاد ویستار درون لوله های گامای با ضدانعقاد سیترات سدیم جمع آوری می شود. لوله ها ابتدا با دور 1000 ×RPMبه مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ می شوند تا پلاسمای غنی از پلاکت - PRP - بدست آید. PRP مجددا به مدت 10 دقیقه با دور×RPM 2000×سانتریفیوژ می گردد. با افزودن کلرور کلسیم به میزان 25 میلی مولار به پلاکت های تغلیظ شده، ژل پلاکتی ایجاد و در نهایت با سانتریفوژ کردن ژل، سرم محبوس شده در لخته فیبرینی - SRGF - جدا شده و تا زمان تزریق داخل مفصلی، در فریزر -70 نگه داری می گردد. القای دیابت: به منظور القای دیابت در گروههای مورد مطالعه از استرپتوزوسین استفاده شد.ویال استرپتوزوسین را که حاوی یک گرم پودر آن بوده، در حلال مناسب - سیترات بافر - حل کرده و به صورت زیرجلدی داخل پوست پشت گردن با دوز 50 میلی گرم بر کیلوگرم تزریق گردید. پنج روز بعد از تزریق استرپتوزوسین سطح قند خون توسط نوارهای گلوکومتر اندازه گیری و موشهایی که قند خون ناشتای آنها بالای250 بود دیابتی در نظر گرفته شدند و برای ایجاد زخم و بررسی اثر فاکتور رشد پلاکتی بر ترمیم زخم انتخاب گردیدند. × 18 سر×موش×صحرایی×نر×نژاد×ویستار×از مرکز تحقیقاتی علوم و اعصاب دانشگاه علوم پزشکی خریداری و به محل نگهداری حیوانات آزمایشگاهی دانشکده دامپزشکی انتقال و در طول مدت آزمایش در دمای22×±×4× درجه سانتی×گراد و 12ساعت×روشنایی-12× ساعت×تاریکی×نگهداری شدند. دو هفته پس از القاء دیابت، جهت×ایجاد×زخم×پوستی،×ابتدا×موش×ها×توسط×تزریق×عضلانی×داروی×کتامین و×زایلازین×بیهوش×گردیدند×و×موهای× قسمت×میانی از×پشت×حیوانات×به×طور×کامل×تراشیده×و×محل×ایجاد×زخم×با×الکل70 درجه،×ضد×عفونی شد. با×استفاده×از×پانچ دو زخم کروی×شکل× به×ابعاد0.8 سانتی×متر t hi ckness - ؛ - Ful l بر×روی×ناحیه تراشیده×شده و در دو طرف ستون فقرات ایجاد×گردید که یک زخم به عنوان کنترل و دیگری درمان در نظر گرفته شد.×روز جراحی،×روز×صفر×در×نظر×گرفته×شد؟ پس از آن حیوان بصورت تصادفی به دو گروه کنترل و درمان
