بخشی از مقاله
چکیده
ارلیشیوز نوعی بیماری باکتریایی مشترک بین انسان و حیوانات است که در اثر باکتری کوچک داخل سلولی اجباری ارلیشیا ایجاد می شود .شایع ترین گونه بیماری زا در سگ ارلیشیا کنیساست که خصوصاً به علت حضور وسیع کنه های ریپی سفالوس سنگوینئوس که بیشترین پراکندگی را در جهان به ویژه در مناطق گرمسیری و نیمه گرمسیری دارد با شیوع بالاتری گزارش شده است .
در این تحقیق به منظور تایید آلودگی ارلیشیا در جمعیت کنه های ریپی سفالوس جدا شده از سگ های شهر زابل از واکنش &5استفاده کردیم.به صورت میانگین تعداد 5 عدد کنه از بدن هر یک از سگ های آلوده که در سطح شهر پراکنده بودند بدون توجه به سن و جنس و نژاد نمونه گیری کرده و جهت تشخیص گونه به آزمایشگاه انگل شناسی فرستادیم که تعداد 350 عدد کنه از کنههای گونه ریپی سفالوس جدا شده و در ظرف حاوی الکل 70 درصد و در دمای 4 درجه سانتیگراد قرار داده شد .
پنجاه pool تهیه گردید و در هر SRRO هفت کنه گذاشته شد و کنه های SRRO شده تا زمان جداسازی1$ در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری شدند .برای جداسازی1$ نمونه ها را ابتدا با آب مقطر شستشو داده و آنها را داخل URFNهای مربوط به نمونه قرار داده دادیم,سپس کنههای هر نمونه به صورت جداگانه کوبیده شدند, پوسته سخت کتینی جدا گردید و محتویات بدن کنه باقی ماند . برای جداسازی 1$ از کیت تجاری مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران - - ,EUF استفاده گردید.جهت بررسی وضعیت آلودگی به بیماری ارلیشیوز، پس از ذوب نمونه 1$ ابتدا SLSHWWLQJ انجام شد و سپس از کیت سریع9HWN - 3&5 کره جنوبی - استفاده گردید .
در نهایت 350 کنه که در مراحل مختلف بالغ و نوچه از بدن سگ ها برداشته شده بود و بر اساس بررسی مورفولوژیکی که در آزمایشگاه انگل شناسی انجام شده بود،کنه قهوهای سگ - ریپی سفالوس سنگوینوس - تشخیص داده شدند و بر اساس نتایج استخراج 1$ و آزمایش 3&5 به دست آمده پنج پول آنها مثبت بوده و حضور قطعه 336 bp نشانگر آلودگی به گونه ای از اجرام ارلیشیایی بود .در این مطالعه برای اولین بار حضور باکتری ارلیشیا در جمعیت کنه های بدن سگ های شهرستان زابل با روش مولکولی تایید شد.نتایج تحقیق حاضر نیز نشان داد که میزان آلودگی به روش مولکولی درکنه های بدن سگ درصد مشابهی با درصد آلودگی سگها دارد و این روش بررسی به عنوان یک روش ساده می تواند جایگزین مناسبی برای تعیین آلودگی حیوانات شمار بیاید .
کلمات کلیدی : ارلیشیوز, ریپی سفالوس کنیس , سگ
مقدمه
ارلیشیوز نوعی بیماری باکتریایی مشترک بین انسان و حیوانات است که در اثر باکتری کوچک داخل سلولی اجباری ارلیشیاایجاد می شود . گونه های باکتری ارلیشیا بر اساس سلول هایی که توسط آنها آلوده می شوند به سه دسته مونوسیتیک,گرانولوسیتیک و ترومبوسیتیک تقسیم می شوند . - 1 - این باکتری ها به وسیله کنه های سخت به میزبانان مهره داری مثل انسان ،حیوانات اهلی و وحشی منتقل می شود . - 3 - سگ ها به وسیله ارلیشیا کنیس، شافنسیس، اوینجی، اکوئی و فاگوسیتوفیلوم می توانند آلوده شوند . ارلیشیا موریس و رومیناتومنیز در سگ تشخیص داده شده اند . - 2 - شایع ترین گونه بیماری زا در سگ ارلیشیا کنیساست که خصوصاً به علت حضور وسیع کنه های ریپی سفالوس سنگوینئوس که بیشترین پراکندگی را در جهان به ویژه در مناطق گرمسیری و نیمه گرمسیری دارد با شیوع بالاتری گزارش شده است . - 1 - در این تحقیق به منظور تایید آلودگی ارلیشیا در جمعیت کنه های ریپی سفالوس جدا شده از سگ های شهر زابل از واکنش CRPاستفاده کردیم .
مواد و روش ها
به صورت میانگین تعداد 5 عدد کنه از بدن هر یک از سگ های آلوده که در سطح شهر پراکنده بودند بدون توجه به سن و جنس و نژاد نمونه گیری کرده و جهت تشخیص گونه به آزمایشگاه انگل شناسی فرستادیم که تعداد 350 عدد کنه از کنههای گونه ریپی سفالوس جدا شده و در ظرف حاوی الکل 70 درصد و در دمای 4 درجه سانتیگراد قرار داده شد .پنجاه pool تهیه گردید و در هر 7 pool کنه گذاشته شد و کنه های l poo شده تا زمان جداسازیDNA در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری شدند .برای جداسازیDNA نمونه ها را ابتدا با آب مقطر شستشو داده و آنها را داخل rockهای مربوط به نمونه قرار داده شدند. سپس کنههای هر نمونه به صورت جداگانه کوبیده شدند پوسته سخت کتینی جدا گردید و محتویات بدن کنه باقی ماند .برای جداسازی DNA از کیت تجاری مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران - - I brc استفاده گردید .جهت بررسی وضعیت آلودگی به بیماری ارلیشیوز، پس از ذوب نمونه DNA ابتدا pipetting انجام شد و سپس از کیت سریعVet k - PCR کره جنوبی - استفاده گردید .
نتایج
اطلاعات جمع آوری شده از جمعیت سگ های مورد مطالعه در این تحقیق به شرح زیر بود :350 کنه که در مراحل مختلف بالغ و نوچه از بدن سگ ها برداشته شده بود و براساس بررسی مورفولوژیکی که در آزمایشگاه انگل شناسی انجام شده بود،کنه قهوهای سگ - ریپی سفالوس سنگوینوس - تشخیص داده شدند و براساس نتایج استخراج NAD وآزمایش PCR به دست آمده پنج پول آنها مثبت بوده و حضور قطعه 336 bp نشانگر آلودگی به گونه ای از اجرام ارلیشیایی بود .
بحث
در این مطالعه برای اولین بار حضور باکتری ارلیشیا در جمعیت کنه های بدن سگ های شهرستان زابل با روش مولکولی تایید شد. نتایج تحقیق حاضر نیز نشان داد که میزان آلودگی به روش مولکولی در کنه های بدن سگ درصد مشابهی با درصد آلودگی سگها دارد و این روش بررسی به عنوان یک روش ساده می تواند جایگزین مناسبی برای تعیین آلودگی حیوانات شمار بیاید. در تحقیق حاضر، گونه ریپی سفالوس از روی بدن سگ ها جدا گردید و آلودگی به ارلیشیا در این کنه ها اثبات شد . اگرچه در بسیاری از تحقیقات انجام شده در زمینه میزان آلودگی کنه ها به گونه های مختلف ارلیشیایی ، تنوع گونهای کنه در محل بررسی مشاهده گردیده بود . - 4 -
نتیجه گیری
نتایج مطالعه حاضر به روش مولکولی جهت شناسایی ارلیشیوز انجام پذیرفت ، نشان دهنده این است که ارلیشیور را میتوان یک بیماری مشترک بین انسان و حیوانات در نظر گرفت . تعیین گونههای مسبب این بیماری در ایران جهت تعیین چرخه این بیماری عفونی و به کارگیری روش های موثر در کنترل و پیشگیری بیماری الزامی است . این مطالعه اولین گزارش آلودگی های جدا شده از سگها به ارلیشیا در شرق ایران است. برای تعیین گونههای شایع ارلیشیا در شهرستان زابل ، لازم است &53اختصاصی گونه ای نیز در مطالعات اتی انجام پذیرد .
منابع
