بخشی از مقاله
چکیده
سابقه و هدف: عفونت های ناشی از انتروکوکوس ها در تمامی دنیا در حال افزایش است . مقاومت این باکتر یها به آنتی بیوتیک ها باعث کاهش تأثیر این آنتی بیوتیک ها در دیواره این باکتری ها می شود لذا هدف از این مطالعه تعیین فراوانی و مقاومت آنها نسبت به آنتی بیوتیک های مورد استفاده بر علیه این باکتری بوده است.
مواد و روشها: در این تحقیق تعداد 193 نمونه انتروکوک از نمونه های بالینی شامل : خون ، ادرار در بیمارستانها و مراکز درمانی شهر تبریز و مرند مورد بررسی قرار گرفت. کلیه سویه ها با استفاده از آزمایشات باکتریولوژی مورد شناسایی قرا گرفتند و الگوی مقاومت روش استاندارد Kirby Baur مقاومت دارویی آنها نسبت به آنتی بیوتیک های ونکومایسین، آمپی سیلین، لاین زولید ، تیکوپلانین ، جنتامایسین ، سیپروفلوکساسین، تتراسایکلین، دالفوپرستین تعیین گردید. همچنین تعیین MIC به روش E-Test انجام شد.
نتایج: از 193 سویه انتروک، 93سویه - 48/18 % - متعلق به گونه فکالیس بودند. گونه انتروکوکوس فکالیس بیشترین مقاومت را نسبت به آنتی بیوتیک های تتراسایکلین - - % 43/2 و سیپروفلوکساسین - - % 41/1 و بیشترین حساسیت رو به آنتی بیوتیک لاین زولید - - %89/4 و تیکوپلانین - - % 77/9 نشان دادند. حداقل غلظت مهاری نشان داد که 40 نمونه مقاوم به سیپروفلوکساسین می باشند.
نتیجه گیری: سویه های انتروکوکوس فکالیس مقاوم به سیپروفلوکسازین کلونالیتی متنوعی دارند. یعنی توزیع یک نواختی نداشته و نشان دهنده انتقال ژن های مقاومت به میزان بالا در جمعیت انتروککی می باشد×؟در حقیقت افراد کلونیزه شده با این سویه ها مخازنی برای انتشار ژن های مقاومت در جامعه به حساب می آیند که نیازمند اجرای برنامه های مراقبتی بیشتری است.
-1مقدمه
انتروکوکها کوکسی های گرم مثبت و کاتالاز منفی هستند و قادرند در حضور 6/5 درصد نمک طعام و 40 درصد املاح صفراوی رشد نمایند. این باکتری ها فلور طبیعی روده حیوانات خونگرم از جمله انسان محسوب می شوند. شایع ترین انتروکوک ها ی دخیل در عفونتهای انسانی انتروکوکوس فکالیس - 85-90 درصد - و فاسیوم - 5-10 درصد - هستند . - 22 - عفونتهای بیمارستانی باعث طولانی شدن زمان بستری بیمار و در نتیجه افزایش قابل توجه هزینه های درمانی کشور می گردد
انتروکوکوس به عنوان عامل مهم عفونت های بیمارستانی و عفونت های اکتسابی از جامعه مطرح می باشند - 28،. - 11 در دو دهه اخیر، انتروکوک ها به عنوان یکی از مهم ترین پاتوژن های انسانی شناخته شده اند. این ارگانیسم ها به طور ذاتی به تعداد زیادی از آنتی بیوتیک ها مقاوم هستند و علاوه براین،توانایی کسب مقاومت های جدید را نیز به طور فزاینده ای دارند. انتروکوکوس فکالیس به عنوان رایج ترین گونه، بیش از هشتاد در صد از عفونت های ناشی از انتروکک ها مانند اندوکاردیت، باکتریمی، عفونت های ادراری، بیمارستان ، نوزادان و سیستم اعصاب مرکزی را به خود اختصاص داده است
دلایل افزایش نقش انتروکوک ها در عفونت های بیمارستانی می تواند ناشی از افزایش اثر فشار انتخابی ناشی از استفاده بی رویه آنتی بیوتیک های مختلف باشد. یکی از داروهایی که برای درمان عفونت های انتروککی به خصوص عفونت های ادراری استفاده میشود، آنتی بیوتیک های فلوروکوئینولونی است که سیپروفلوکسازین از رایج ترین آنها است. از آنجایی که مصرف آنتی بیوتیک ها در ایران محدودیت خاصی ندارد و به دلیل این که انتروکوکوس فکالیس به راحتی ژن های مقاومت را کسب می کند، سویه های این باکتری، درجات مختلف و افزایش یافته ای از مقاومت نسبت به سیپروفلوکسازین نشان داده اند.
مقاومت به سیپروفلوکسازین در بین نمونه های بالینی، به دلیل مصرف زیاد این دارو، درمان عفونت های انتروککی را دچار مشکل کرده است. کنترل عفونت های انتروکوکوس فکالیس، به خصوص انواع چند مقاومتی آن، بسیار مشکل می باشد و راه درمان مشخصی هم برای آن وجود ندارد. بنابراین کنترل سرایت و شیوع بیماری این میکروارگانیسم ها از اهمیت بالایی برخورداراست
مکانیسم های موثری برای اکتساب و انتقال ژن های مقاوم در تعدادی از این گونه ها و سایر گونه های باکتریایی وجود دارد. ژنهای کد کننده مقاوم به جنتامایسین قادرند از طریق پلاسمید های پاسخ دهنده به فرمون با فرکانس بالایی بین سویه های انتروکوکوس فکالیس جابجا شده و وقوع این پدیده در مورد سویه های ایران از قبل به اثبات رسیده است - . - 3با وجودی که مطالعاتی بر روی فاکتورهای ویرولانس این باکتری ها انجام شده است ولی تاکنون در میان سویه های مختلف جدا شده از افراد سالم و بیمار، فاکتورهای ویرولانس شاخص که بتوان بیماری زایی ر ا به آن ها نسبت داد یافت نگردیده است.
شایع ترین عوامل مسبب بیماری های انسان توسط این گروه از باکتری ها، دو گونه انتروکوکوس فکالیس و انتروکوکوس فاسیوم می باشند - . - 4 گر چه تا کنون هیچ توکسین مترشحه پروتئینی در انتروکوک ها شناسایی نشده است،احتمالاً بیماری زایی آن ها به واسطه فعالیت مجموع ه ای از فاکتورهای دخیل در بیماری زایی همچون پروتئین ها یا کربوهیدرات های شرکت کننده در اتصال باکتری به اپی تلیوم دستگاه گوارش و تناسلی، فاکتور تجمعی شرکت کننده در تبادل پلاسمیدی و سایر عوامل صورت می پذیرد - . - 6 ترکیب سیپروفلوکساسین و مترونیدازول یکی از این گونه ترکیبات دارویی است.
سیپروفلوکساسین نام بین المللی ژنریک برای نوعی آنتی بیوتیک سنتتیک، تولیدشده توسط ' بایر فارماکوتیکال 'تحت عناوین تجاری Cipro و Ciproxin است. این آنتی بیوتیک به گروه فلوروکینولونها تعلق دارد و یک باکتریوسید است مکانیسم عمل این دارو جلوگیری از آنزیم DNA girase است - . - 10 پژوهش حاضر با هدف شناسایی سویه های سیپروفلوکساسین انجام شده است.
همانندسازی DNA باکتری توسط اتصال به کلینیکی انتروکوکوس فکالیس مقاوم به
-2 مواد و روشها
196 نمونه های بالینی مختلف شامل ادرار، خون از بیماران بستری وسرپایی بیمارستانها و مراکز درمانی شهر تبریز در بازه زمانی هفت ماهه از مهر ماه 1393 لغایت فروردین ماه 1394به روش Simple Random Sampling جمع آوری شدند. نمونه با رنگ آمیزی گرم، با انجام تست های کاتالاز، حساسیت به باسیتراسین، رشد بر روی محیط نمک 6/5 درصد نمک طعام و تست هیدرولیز ال-پیرولیدونیل – بتا- نفتیل آمید - PYR - نمونه ها در حد جنس و گونه شناسایی شدند - کلیه ی محیط های کشت مصرفی ازشرکت Merck تهیه شده بود
جهت بررسی مقاومت دارویی با روش استاندارد Kirby Baur مقاومت سویه های انتروکوکوس فکالیس نسبت به آنتی بیوتیک های ونکومایسین 30 mg، آمپی سیلین 10 mg، لاین زولید 30mg، تیکوپلانین 30 mg، جنتامایسین 10 mg، سیپروفلوکساسین5 mg، تتراسایکلین30 mg، دالفوپرستین30 mg تهیه شده از شرکت پادتن طب بر روی محیط مولر هینتون آگار - - Merck انجام شد - - 15، که ابتدا باکتری های ایزوله شده در محیط TSB روی محیط مولر هینتون آگار تجدید کشت شده و بعد از 24 ساعت آماده برای آنتی بیوگرام شد.
برای انجام آنتی بیوگرام سوسپانسیون باکتری با غلظت معادل استاندارد نیم مک فارلند تهیه و بر روی محیط کشت مولر هینتون آگار کشت داده شد . نمونه ها در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت گرماگذاری شدند. در نهایت بر اساس قطر هاله عدم رشد اطراف دیسک ها نتایج به صورت حساس ، نیمه حساس ، مقاوم بیان گردیدند. از سویه استاندارد E.faecalis ATCC 19433 به عنوان کنترل دیسک ها استفاده شد برای آنتی بیوتیک سیپروفلوکساسین، تعیین حداقل غلظت مهار کننده MIC به روش E-Test - شرکت هایمدیا هند - بر اساس کمیته استانداردهای بالینی CLSI انجام گرفت و نتایج بر اساس دستورالعمل استاندارد های CLSI تفسیر شد
-3 نتایج
از 196 سویه ی انتروکوکوس جمع آوری شده از نمونه های بالینی، 35 نمونه 17/86 - درصد - نمونه مربوط به بیمارستان رازی مرند و 48 نمونه - 24/49 درصد - مربوط به مراکز بهداشتی و درمانی مرند، 15 نمونه 7/65 - درصد - مربوط به بیمارستان امام رضا تبریز، 32 نمونه 16/32 - درصد - مربوط به آزمایشگاه مرکزی استان تبریز، 17 نمونه 8/67 - درصد - از بیمارستان سینا، 19 نمونه - 9/7 درصد - از بیمارستان عالی نسب تبریز و 30 نمونه - 15/3 درصد - مربوط به مراکز بهداشتی و درمانی تبریز می باشند.
در مجموع نمونه های بالینی مورد بررسی در این مطالعه شامل 166 نمونه - 84/7 درصد - از ادرار ، 30 نمونه - 15/3 درصد - از خون جدا شده بود. بخش سرپایی 135 نمونه - 68/87 درصد - و بخش بستری 61 نمونه - 31/12 درصد - بودند. میانگین سنی بیماران 48/4 ± 27 از حداقل 10 ماه تا حداکثر 85 سال متغییر بود. 115 نمونه - 58/67 درصد - مربوط به مردان و 81 نمونه - 41/33 درصد - مربوط به زنان بود. در مجموع 93 نمونه متعلق به گونه فکالیس بودند
