بخشی از مقاله
چکیده
یکی از جدیدترین روش ها که می تواند باعث بهبود صحت پیش بینی و پاسخ به انتخاب شود، انتخاب براساس نشانگرها است. ژن پرولاکتین در بررسی چند قلوزایی و افزایش وزن به عنوان ژن کاندید مطرح می باشد.. ژن گیرنده هورمون پرولاکتین در بررسی چند قلوزایی و افزایش وزن به عنوان ژن کاندید مطرح می باشد.به منظور بررسی چند شکلی ژن گیرنده هورمون پرولاکتین از 150 راس گوسفند نژاد بلوچی خون گیري به عمل آمد. استخراج DNA به روش نمکی بهینه یافته، واکنش زنجیره اي پلی مراز با استفاده از آغازگر هاي اختصاصی جهت تکثیر دو قطعه 215 و 176 جفت بازي از ناحیه اینترون 1 این ژن و تعیین ژنوتیپ توسط تکنیک PCR-SSCP انجام گرفت.
در جایگاه اول - PRLR1 - سه آلل - 0/5433 - A، - 0/0767 - B و - 0/38 - C و سه ژنوتیپ AA، AB و AC با فراوانی هر یک به ترتیب 0/087، 0/153 و 0/76 و در جایگاه دوم - PRLR2 - دو آلل - 0/6767 - A و - 0/3233 - B و دو ژنوتیپ AA و AB با فراوانی هر یک به ترتیب 0/35 و 0/65 مشاهده شد آنالیز آماري نشان داد که جایگاه PRLR2 اثر معنی داري بر صفت بره زایی داشته است به طوري که میش هاي با ژنوتیپ هتروزیگوت AB بره هاي بیشتري در مقایسه با میش هاي با ژنوتیپ هموزیگوت AA تولید نمودند. نتایج اولیه نشان می دهد که ژن گیرنده پرولاکتین می تواند به عنوان یک ژن اصلی و یا در لینکاژ نزدیک با جایگاه ژنی دیگر به عنوان یک ژن تاثیر گذار در چند قلوزایی در گوسفند مورد توجه قرار گیرد.
مقدمه
اگرچه انتخاب فنوتیپی و استفاده از مدل هاي حیوانی همواره توانسته پیشرفت ژنتیکی مناسبی را در نسل هاي آتی به وجود آورد، اما هنوز به کارگیري روش هایی که منجر به کاهش فاصله نسلی و همچنین افزایش دقت ارزیابی هاي ژنتیکی می شود، مورد توجه است. لذا یکی از راهکار هاي مناسب براي دستیابی به این اهداف، به کار گیري نشانگر هاي ژنتیکی است که به طور مستقیم و یا غیر مستقیم بر صفات تولیدي و تولید مثلی تاثیرگذار می باشند.
از صفات مهم اقتصادي در پرورش گوسفند، نرخ باروري، رشد، ویژگی هاي لاشه، کیفیت پشم و چند قلوزایی است، که چند قلوزایی یکی از مهمترین صفات اقتصادي در پرورش گوسفند می باشد 2 - ،1، . - 3 یکی از راه هاي بهبود این صفات، شناسایی و انتخاب حیوانات برتر و مناسب براي صفات مذکور می باشد که امروزه از طریق تکنیک هاي مختلف مولکولی مبتنی بر DNA، دست یابی به آن ها امکان پذیر شده است.
بررسی ها نشان می دهد که پروتئین گیرنده هورمون پرولاکتین به عنوان یک عامل ویژه جهت تاثیر هورمون پرولاکتین و هورمون هاي پپتیدي هیپوفیز قدامی تاثیر گذار در فرایند هاي تولید مثلی می باشد . - 4 - هورمون پرولاکتین به همراه گیرنده آن از جمله ژن هاي کاندید جهت آنالیز پیوستگی صفات کمی مطرح بوده و گزارش شده است که روي صفات تولید مثلی در گوسفند، مرغ و صفات تولید شیر در گاو تاثیر گذار می باشد . - 5 - هورمون پرولاکتین جهت کنترل عملکرد هاي تولید مثلی ضروري است و این فعالیت ها به طور غیر مستقیم و با میانجی گري گیرنده آن انجام می پذیرد. جایگاه این ژن روي کروموزوم شماره 16 گوسفند شناسایی شده است . - 6 -
بنابراین با توجه به اهمیت جایگاه ژنی گیرنده هورمون پرولاکتین بر صفات تولید مثلی، این تحقیق به منظور ارزیابی رفتار این جایگاه ژنی در گوسفند بلوچی انجام گرفته است. مواد و روش ها از تعداد 150 راس از میش هاي گوسفند نژاد بلوچی موجود در مرکز اصلاح نژاد عباس آباد وابسته به سازمان جهاد کشاورزي استان خراسان رضوي خون گیري انجام و جهت جلوگیري از انعقاد خون، از محلول EDTA استفاده شد.
نمونه هاي خون بلافاصله با حفظ شرایط زنجیره سرد به آزمایشگاه منتقل و تا زمان استخراج DNA در دماي 4 درجه سانتی گراد نگهداري و جهت استخراج DNA از روش نمکی بهینه یافته استفاده شد. جهت تکثیر دو قطعه 215 و 176 جفت بازي واقع در اینترون یک ژن گیرنده پرولاکتین، از دو آغازگر اختصاصی استفاده شد - جدول . - 1 بهینه سازي فرایند SSCP-PCR با استفاده از پروتکل چو و همکاران انجام گرفت . - 10 -
تعیین ژنوتیپ
جهت بررسی چند شکلی ها در جایگاه ژنی گیرنده هورمون پرولاکتین از روش PCR_SSCP استفاده شد. به این منظور 2 میکرولیتر محصول پی سی آر را با 8 میکرو لیتر بافر بارگزاري مخلوط، با استفاده از دستگاه ترموسایکلر تک رشته اي نموده سپس با حفظ شرایط سرد روي ژل پلی اکریل آمید در دماي 4 درجه با ولتاژ 400 الکتروفورز شد. پس از اتمام کار ژل را با استفاده از نیترات نقره رنگ آمیزي و تعیین ژنوتیپ با روئت مستقیم باند ها از روي ژل انجام گرفت.
