بخشی از مقاله
چکیده
تعداد 100 راس موش سوری بالغ به وزن تقریبی 30 تا 35 گرم به 5 گروه 20 تایی به صورت تصادفی تقسیم شدند
.گروه اول به عنوان شاهد، آب مقطر استریل هم حجم با گروه های درمانی دریافت کرد و به گروه های تیمار به ترتیب 50، 100، 200 و 300 میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن، متیونین که در 100 میکرولیتر آب مقطر استریل حل شده بود تزریق گردید. از هر 5 گروه آزمایش در روزهای 30 و 60 پس از شروع تزریقات تعداد 10 سر موش بطور تصادفی انتخاب و به روش انسانی کشته شدند. پس از کالبدگشایی، بیضه چپ موش های کشتار شده خارج و در فرمالین %10 قرار گرفته تا برای مطالعات هیستومورفومتریک آماده سازی گردد.
در این مطالعه درصد اسپرماتوژنز، شاخص میوزی، قطر لوله سمینیفروس، ارتفاع اپیتلیوم لوله های منی ساز و رتبه بندی جانسون مورد بررسی قرار گرفت. نتایج به دست آمده نشان داد که مصرف مقادیر بالای متیونین و نیز مدت زمان طولانی آن می تواند اثرات نامطلوبی بر روی بافت بیضه گذاشته و برخی شاخصه های مذکور را به طور معناداری کاهش دهد.
مقدمه
اسیدآمینه ضروری متیونین، از مهمترین اسیدآمینه های مورد نیاز پستانداران است. گرچه خود سیستئین برای پستانداران یک اسید آمینه ضروری به حساب نمی آید، ولی فقط می تواند از متیونین سنتز شود و بنابراین تأمین هر یک از دو اسید آمینه متیونین یا سیستئین در جیره غذایی، ضروری به نظر می رسد - . - 17 فعالیت آنتی اکسیدانی این اسید آمینه به واسطه گروه سولفیدریل آن صورت می گیرد.
فعالیت آنتی اکسیدانی این اسید آمینه باعث شده است که متیونین مانند ویتامین E از استرس های اکسیداتیو دخیل در سمیت های توبولی جلوگیری کند
متیونین می تواند با کمک به پاکسازی طبیعی دیواره داخلی عروق از ذرات چربیٌ، منجر به حفظ عملکرد طبیعی عروق شود. این اسید آمینه در رشد عضلات، سلامت پوست، مو و ناخن نقش داشته و با شلاته کردن فلزات سنگین و حذف آنها از بدن به سلامت کبد، کلیه ها و مثانه کمک می کند. متیونین به واسطه کاهش سطح هیستامین در بدن، یک مکمل مناسب برای افراد با آلرژی های مزمن و آرتریت محسوب می شود. این اسید آمینه ضروری از سمیت کلیوی به دنبال مصرف جنتامایسین جلوگیری کرده و سمیت کبدی حاصل از مسمومیت استامینوفن را کاهش می دهد
مطالعات زیادی در مورد اثر اسیدهای آمینه از جمله متیونین بر روی کشت جنین حیواناتی از جمله گاو و قوچ در شرایط آزمایشگاهی صورت گرفته است که ضرورت وجود اسیدهای آمینه را برای تکامل جنین در شرایط آزمایشگاهی نشان می دهد - . - 7 در بررسی های دیگر به اهمیت متیونین در بهبود اسپرماتوژنز، پارامترهای حرکتی اسپرم و حضور آن در محیط کشت برای بلوغ سیتوپلاسمی اووسیت اشاره شده است
با در نظر گرفتن ضرورت حضور متیونین در رژیم غذایی و نقش آن در جلوگیری از بیماری های کبدی و کلیوی و با توجه به گزارشات فوق الذکر از اثرات احتمالی متیونین بر بافت بیضه، در مطالعه پیش رو به منظور اطمینان از دریافت مقادیر کامل و یکسان متیونین در افراد یک گروه، تزریق داخل صفاقی انجام شد تا بدینوسیله روند اسپرماتوژنز و تغییرات هیستومورفومتری حاصل از تزریق متیونین در بافت بیضه موش های سوری بررسی گردد.
مواد و روش کار
کلیه مراحل این مطالعه، بر اساس مقررات و قوانین حمایت از حقوق حیوانات دانشکده دامپزشکی دانشگاه شهید باهنر کرمان صورت پذیرفت.
برای انجام این مطالعه، تعداد 100 سر موش سوری نر بالغ نژاد NMRI با وزن متوسط 35-30 گرم و سن 9-8 هفته از موسسه رازی کرمان خریداری و به مدت 5 روز در شرایط آزمایشگاه در محل نگهداری حیوانات آزمایشگاهی دانشکده دامپزشکی در قفس های پروپیلن با درب توری قرار گرفتند. موش ها با پلت مخصوص جوندگان تغذیه شده و به صورت آزادانه به آب و غذا دسترسی داشتند. شرایط نوری به صورت 12 ساعت روشنایی و 12 ساعت تاریکی و دما نیز 23 2 درجه سانتی گراد تعبیه شده بود.
محلول تزریقی
در این مطالعه، از دی ال متیونینٍ به صورت پودر کریستالی به رنگ سفید متمایل به زرد با خلوص 99 درصد - اسکارلا، اسپانیا - َ استفاده شد.
گروه های آزمایشی
حیوانات به صورت تصادفی به 5 گروه 20 تایی به شرح زیر تقسیم شدند:
گروه اول به عنوان شاهد،آب مقطر استریل هم حجم با گروه های درمانی دریافت کردند و به گروه های دیگر به ترتیب 50، 100، 200 و 300 میلی گرم متیونین به ازای هر کیلوگرم که در 100 میکرولیتر آب مقطر استریل حل شده بود به شکل داخل صفاقی تزریق گردید . - 14 - از هر 5 گروه آزمایشی در روز های 30 و 60 پس از شروع تزریقات، تعداد 10 سر موش بطور تصادفی انتخاب شده و به روش انسانی، با قطع نخاع کشتار شدند. از آنجا که مراحل اسپرماتوژنز، از آغاز تا تولید اسپرماتوزوآ در موش، حدود 35 روز به طول می انجامد - 5 - زمان در نظر گرفته شده برای تحقیق 30 - و 60 روز - ، زمان کافی برای بررسی اثر متیونین بر فاکتورهای هیستومورفومتریک بیضه تشخیص داده شد
مراحل هیستوتکنیک و هیستومورفومتریک
نمونه ها 24 ساعت در فرمالین %10 نگهداری و پس از تعویض فرمالین، به مدت 10 روز در فرمالین %10 فیکس گردیدند. پس از طی مراحل فیکساسیون، از نمونه ها بلوک تهیه و برش هایی به ضخامت 5 میکرون تهیه شد.
کلیه مراحل هیستومورفومتری این مطالعه، با استفاده از لنز دیجیتال - Dino-eye, AM-7023, 5Mp, Taiwan - صورت گرفت.
همچنین با استفاده از همین رنگ آمیزی، تغییرات هیستوپاتولوژی بررسی گردید.در مقاطع بدست آمده پس از رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین فاکتورهای زیر مورد ارزیابی قرار گرفتند:
.1 درصد اسپرماتوژنز: برای مشخص کردن این پارامتر 200 عدد از لوله های منی ساز با رنگ آمیزی H&E در زیر میکروسکوپ نوری از نظر حضور اسپرماتوزوآ در داخل آنها بررسی گردید. در این مطالعه، حتی وجود رده های قبلی سلول های زایا، به عنوان عدم وجود اسپرماتوژنز در نظر گرفته شد.
.2 شاخص میوزی: برای تعیین آن، نسبت تعداد اسپرماتیدهای گرد به اسپرماتید پاکی تن اولیه - اسپرماتوسیت اولیه - در نظر گرفته شد.
.3 قطر لوله های منی ساز: برای اندازه گیری، در هر مقطع 10 عدد از کوچک ترین و گردترین لوله ها مشخص و زیر میکروسکوپ نوری و با استفاده از لنز دیجیتال و بزرگنمایی 10x اندازه گیری شد.
.4 ارتفاع اپیتلیوم لوله های منی ساز: برای محاسبه آن از هر مقطع 10 عدد از کوچک ترین و گردترین لوله ها مشخص و ارتفاع اپیتلیوم آنها زیر میکروسکوپ نوری، با استفاده از لنز دیجیتال و بزرگنمایی 40x اندازی گیری شد.
.5 رتبه بندی جانسون: 100 عدد از کوچک ترین و گردترین لوله ها انتخاب و رتبه آنها با توجه به مقیاس رتبه بندی جانسون در زیر میکروسکوپ نوری تعیین شد.
آنالیز آماری
تمامی مراحل کمی، توسط نرم افزار آماری - 16 Chicago. U.S.A - SPSS و روش آماریOne - Way Anova بین گروههای تعریف شده، مورد بررسی قرار گرفت. همچنین از آزمون چند دامنهای توکی جهت تعیین اختلاف معنی دار بین گروه های آزمایشی بهره گرفته شد. در مطالعه حاضر، P<0/05 معنی دار تلقی شده است.
