بخشی از مقاله
چکیده
باکتری اشریشیا کلی، که به طور طبیعی از دستگاه گوارش انسان و حیوان جداسازی میشود، از مهمترین اعضای میکروبیوتا - فلور طبیعی - این دستگاه محسوب شده و فرم بیماریزای آن ایجادکنندهی عوارض بسیار مهمّی در انسان و حیوان میباشد. گسترش روز افزون مقاومت های آنتی بیوتیکی باعث بروز مشکلاتی در جهت درمان شده است.
بر این اساس هدف از این مطالعه شناسایی مولکولی مقاومت آنتی بیوتیکی دسته سولوفونامید ها در اشریشیاکلی با منشا دامی است. مواد وروش کار: تعداد 102 نمونه مدفوع ازگاومیش سالم ذبح شده در شهرستان اهواز جمع آوری شد و با استفاده از روش PCR وجود ژن های مقومت به سولفونامید ها - sul2 و - sul1 مورد بررسی قرار گرفت. از تعداد 102 نمونه جمع آوری شده ، 96 جدایه اشریشیاکلی جداسازی شد که تعداد 12جدایه - 12 /5درصد - نسبت به ژن sulII مثبت بودند و هیچیک از جدایه ها نسبت به ژن sulI مثبت نبودند. بر اساس یافته های حاصل گاومیش می تواند به عنوان یکی از مخازن مقاومت آنتی بیوتیکی مطرح باشد و آگاهی از الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی نقش مهمی را در برابر انتخاب بهترین آنتیبیوتیک برای درمان ایفا میکند.
مقدمه
آنتی بیوتیک ها نقش ضروری در کاهش بیماری و مرگ ومیر ناشی از بیماری های عفونی در انسان و حیوانات دارند. با این حال اسفاده بی رویه از آنتی بیوتیک ها باعث بوجود آمدن مقاومت آنتی بیوتیکی در باکتری های پاتوژن و کامنسال شده است . - 6 - باکتری اشریشیاکلای معمولا به عنوان یک ابزار برای شناسایی مقاومت آنتی بیوتیکی در باکتری های موجود در مدفوع استفاده می شود به این دلیل که در طیف گسترده ای از میزبان ها وجود دارد
از زمان شناسایی سولفونامید ها در سال 1930 به طور گسترده ای در پزشکی و دامپزشکی برای درمان عفونت های باکتریایی و تک یاخته ای استفاده می شود. مقاومت به سولفونامید ها در اشرشیاکلای و سایر باکتری های میله ای روده برای سال های بسیاری متداول بوده است و معمولا به صورت مقاومت چندگانه آنتی بیوتیکی است - . - 10 سولفونامید ها به عنوان آنالوگ ساختاری پارا-آمینوبنزوئیک اسید - - PABA عمل کرده وبه آنزیم دی هیدروپتروات سنتتاز - DHPS - اتصال پیداکرده و مانع از سنتز اسیدفولیک در اجرام می شوند
مقاومت در برابر سولفونامیدها مخصوصا در باکتری های گرم منفی از قبیل اشرشیاکلای فراوان است که ژن مقاومت به وسیله پلاسمید حمل می شود. مقاومت با جهش در ژن DHPS بوجود می آید - . - 13-10-2 از ژن های ایجاد کننده مقاومت در برابر سولفونامیدهام میتوان sulI و sulII را نام برد که آنزیم دی هیدروپترویک اسید سنتتاز را مهار می کنند
با توجه به وجود گله های پرورش گاومیش در منطقه خوزستان، مقاومت آنتی بیوتیکی می تواند باعث بروز خسارات اقتصادی فراوان به دامداران منطقه می گردد لذا هدف از انجام این مطالعه شناسایی مقاومت های آنتی بیوتیکی جدایه های باکتریایی نسبت به آنتی بیوتیک های دسته سولفونامید در گاومیش های خوزستان است.
مواد و روشها
به منظور جداسازی باکتری اشریشیاکلی، تعداد 102 نمونه از مدفوع گاومیش های سالم ذبح شده در کشتارگاه اهواز تهیه شد. تعداد 96 جدایهی باکتری اشریشیاکلی توسط آزمایشات بیوشیمیایی تایید گردید. جهت ذخیره نمونه ها از محیط لوریا برتانی براث به همراه گلیسرول 50 درصد استفاده شد.
برای استخراج DNA، پس از کشت باکتری ها در محیط لوریا برتانی آگار، از روش لیز توسط Naoh نیم نرمال استفاده گردید که بر این اساس ابتدا یک کلنی در 25 میکرولیتر Naoh نیم نرمال حل شد و پس از 20 تا 30 دقیقه، به آن 25 میکرولیتر 1 Tris-HCL مولار اضافه گردید و در پایان حجم آن با آب مقطر استریل به 500 میکرولیتر رسانده شد.
جهت شناسایی ژن های ایجاد کننده مقاومت در برابر سولفونامید ها، آنزیم های sulI و sulII مورد بررسی قرار گرفتند. برای انجام این آزمایش از روش مولتی پلکس PCR با کمک پرایمر های اختصاصی استفاده گردید مطابق جدول شماره . - 7-5 - 1
جدول شماره :1 پرایمرهای مورد استفاده و وزن محصولات جهت شناسایی ژن sulI و sulII
نتایج و بحث
از 102 نمونه مدفوع گرفته شده از گاومیش ها 96 مورد باکتری اشریشیاکلی جداسازی شد که معیار جداسازی و تائید جدایه های اشریشیاکلی، ویژگی های بیوشیمیایی این باکتری بود. در آزمایشات PCR، از میان 96 جدایه مورد مطالعه، بر اساس نتایج 12جدایه - 12 /5درصد - نسبت به ژن sulII مثبت بودند و هیچیک از جدایه ها نسبت به ژن sulI مثبت نبودند.
سویه های اشریشیاکلی بیماری زا به عنوان یک مشکل جدی برای سلامت عمومی جامعه و از نظر اقتصادی در محصولات لبنی تلقی می گردد. پس آگاهی از مقاومت آنتی بیوتیکی برای درمان مخازن آلودگی نقش مهمی دارد. در مطالعات انجام گرفته در ایران و سایر نقاط دنیا اهمیت نشخوارکنندگان مثل گاو وگوسفند به عنوان مخزن آلودگی واطلاعاتی در رابطه با مقاومت آنتیبیوتیکی وجود دارد ولی اطلاعات در رابطه با گاومیش محدود می باشد.
باکتری اشریشیاکلی برای ارزیابی خطر انتشار انتقال مقاومت آنتی بیوتیکی بین میزبان ها استفاده می شود. در مطالعه ای در جنوب آفریقا برای بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی در گاو و گاومیش 3 گروه مورد بررسی قرار گرفت. گروه 1 گاومیش های بدون تماس با گاو، گروه 2 گاومیش های در تماس با گاو و گروه 3 گاو بودند. نتایج به این صورت بود که مقاومت آنتی بیوتیکی درگروه3 بیشترین و گروه 1 کمترین مقاومت را داشت
در مطالعهای، مقاومت آنتی بیوتیکی را در انسان وحیوانات بر روی آنتی بیوتیک های دسته سولفونامیدها و تتراسایکلین ها و پنیسیلین بررسی کردند که از میان 3 دسته آنتی بیوتیک مورد بررسی بیشترین حساسیت نسبت به دسته آنتی بییوتیک های سولفونامیدها بود
در مطالعه ای بر روی جدایه های اشریشیا کلی جدا شده از شیر گاومیش و گاو مقاومت آنتی بیوتیکی را بررسی کردند که جدایه های شناسایی شده از گاومیش نسبت به آنتی بیوتیک های دسته سولفونامید ها حساس بودند
در تانزانیا خطر انتقال مقاومت آنتی بیوتیکی در بین حیوانات اهلی و وحشی بر روی نمونه های مدفعوعی گاو وگاومیش وگورخر مورد بررسی قرار گرفت. به این صورت که ایزولههای اشریشیاکلی مقاوم به سفوتاکسیم را از نظر وجود ژن sul3 بررسی کردند و تفاوتی بین گروه وحشی واهلی مشاهده نکردند
