بخشی از مقاله
چکیده
تأثیر ایمونوگلوبولین - IgY - Y اختصاصی آنفلوانزای پرندگان استخراج شده از تخم مرغ در پیشگیری از بیماری آنفلوانزای پرندگان سروتیپ H9N2 در جوجه های تخم گذار مورد مطالعه قرار گرفت. این تحقیق طی دو مرحله انجام شد. در آزمایش اول تولید و جداسازی پادتن اختصاصی ضد آنفلوانزای پرندگان - H9N2 - از زرده تخم مرغ مورد بررسی قرار گرفت.
بالاترین تیتر پادتن پلی کلونال در زرده و سرم به ترتیب 14 و 35 روز پس از نخستین تزریق بدست آمد. مقدار تیتر پادتن در کل دوره آزمایش همواره در زرده بیشتر از سرم بود. آنالیز یافته ها با آزمون t-student و آزمون ناپارامتری فیشر انجام شد.
تیتر پادتن در سرم و زرده تخم مرغ در بین گروه ها معنی دار بدست آمد . - P<0.05 - در آزمایش دوم تاثیر پادتن اختصاصی ضد آنفلوانزای پرندگان - H9N2 - استخراج شده از زرده تخم مرغ در پیشگیری از بیماری آنفلوانزای پرندگان مورد بررسی قرار گرفت. میزان دفع ویروس در مدفوع پرندگان در گروه تیمار به طور معنی داری کاهش یافت . - P<0.05 - در گروه تیمار تعداد پرندگان مبتلا به طور معنی داری پایین بود . - P<0.05 -
در مجموع می توان نتیجه گرفت مصرف خوراکی IgY اختصاصی ضد آنفلوانزای پرندگان در جوجه های تخم گذار چالش شده با ویروس موجب کاهش میزان ابتلا پرندگان و دفع ویروس - مهم ترین عامل در پیشگیری و ریشه کنی آنفلوانزا - می گردد و بدین ترتیب می تواند نقش عمده ای در پیشگیری از بروز همه گیری و ظهور سویه های جدید و نوترکیب داشته باشد.
مقدمه
آنفلوانزای پرندگان، بیماری مسری است که بوسیله تیپ A ویروس آنفلوانزا از خانواده ارتومیکسوویرویده ایجاد می شود. این بیماری، تهدید کننده دائمی صنعت طیور جهان می باشد. جدا سازی ویروس های آنفلوانزای طیور H5N1 و H9N2 به ترتیب از انسان های تلف شده و بیمار با علائم مشابه آنفلوانزا، خطر بالقوه و مستقیم آنها را به جامعه انسانی طرح و اثبات نمود.
افزایش شیوع آن بین انسان ها و طیور در دهه های اخیر و عدم کارایی روش های موجود در پیشگیری و کنترل آن اهمیت بیماری را دو چندان می نماید. در ایران در خرداد سال 1377، بیماری در مرغان مشاهده شد. پس از انجام آزمایش های متفاوت سویه آن H9N2 تایید شد. این بیماری طی سال های 1378-1379 بالغ بر سیصد میلیارد ریال خسارت به صنعت طیور ایران وارد کرد. به دلیل افزایش بیماری زایی ویروس های H9N2، واگیری های آنفلوانزا صنعت طیور و سلامتی انسان را تهدید می کند - . - 4
مصرف آنتیبادیهای اختصاصی بر علیه پاتوژن های میزبان هم در انسان و هم در حیوانات، به عنوان روش جالبی به منظور ایجاد ایمنی پاسیو و افزایش مقاومت در مقابل عوامل بیماری زا محسوب میشود. ایمونوگلوبولین - IgY - Y مهم ترین آنتی بادی موجود در زرده تخم مرغ طیور می باشد. روش ساده خالص سازی و نشاندار کردن این ملکول از زرده تخم مرغ، عدم نیاز به خونگیری از حیوان، کاهش استرس، اجرای بهتر آزمایشهای ایمونولوژیکی، پتانسیل بالای IgY در پیشگیری و درمان بیماریها از جمله مزایای استفاده از آن در مقایسه با آنتیبادیهای پستانداران می باشند
مواد و روش کار
این آزمایش در دو مرحله انجام شد . در آزمایش اول تعداد 20 مرغ تخم گذار لگهورن سفید در دو گروه 10 تایی قرار گرفتند. گروه اول به عنوان گروه تیمار و گروه دوم به عنوان گروه شاهد در نظر گرفته شد. در گروه تیمار هر پرنده 0/5 میلی لیتر از واکسن کشته آنفلوانزا را از طریق عضلانی در چهار نقطه عضله سینه دریافت نمود. همزمان گروه کنترل 0/5 میلی لیتر از محلول سرم فیزیولوژی استریل را به روش مشابه دریافت کردند.
تزریق یادآور در سه نوبت در فواصل 2 هفته ای پس از نخستین ایمونیزاسیون انجام گرفت. خونگیری و جمع آوری تخم مرغ ها 7 روز پس از نخستین تزریق انجام گرفت و به کمک آزمایش ممانعت از هماگلوتیناسیون - HI - تیتر پادتن در سرم و زرده تعیین گردید. استخراج آنتیبادی IgY از زرده تخممرغ به کمک روش Fulton و همکاران 2002 انجام گرفت. در آزمایش دوم تعداد 50 قطعه جوجه SPF یک روزه تخم گذار - سویه لوهمن - در2 گروه، هر گروه شامل 25 قطعه پرنده به مدت 45 روز در ایزولاتورهای مجزا پرورش داده شدند.
هر دو گروه در 22 روزگی با 100 میکرولیتر ویروس زنده آنفلوانزا سروتیپ H9N2 حاوی 107 EID50 از طریق Intranasal چالش داده شدند. پرندگان در گروه تیمار، از 17 روزگی تا پایان دوره آزمایش، روزانه مقدار 15 میلی لیتر زرده حاوی پادتن، مخلوط شده با 3/7 میلی لیتر آب آشامیدنی را دریافت داشتند. گروه شاهد تا پایان دوره به صورت عدم مصرف پادتن نگه داشته شدند. پرندگان روزانه بررسی و هرگونه علائم و تلفات ثبت گردید. در روزهای 38، 42 و 45 از هر دو گروه نمونه های خون تهیه شد و به کمک آزمایش ELISA عیار پادتن تعیین و مورد بررسی قرار گرفت.
میزان دفع ویروس در پایان دوره آزمایشی به طور تصادفی در 8 پرنده از هر گروه بررسی شد. در پایان دوره پرورش کلیه پرندگان کشتار و لاشه ها کالبدگشایی گشته و از نظر جراحات ماکروسکوپی، اندام های مختلف مورد بررسی قرار گرفتند.
نتایج
مطابق نمودار 1 در ابتدا روند افزایشی در تیتر پادتن در سرم و زرده دیده می شود، به طوری که حداکثر تیتر پادتن در سرم 14 روز پس از نخستین تزریق دیده می شود، مقدار این تیتر تا هفته ششم با انجام تزریقات یادآور ثابت باقی می ماند و پس از آن کاهش در مقدار تیتر دیده می شود.
حدود 5 هفته پس از نخستین تزریق واکسن، اوج تیتر پادتن در زرده مرغ ها مشاهده شد. تیتر پادتن در زرده تخم مرغ ها همزمان با افزایش تیتر در سرم افزایش یافته و حداکثر تیتر پادتن در زرده تخم مرغ ها در هفته پنجم ملاحظه شد که تا پایان دوره ادامه پیدا کرد. مقدار تیتر پادتن در کل دوره آزمایش همواره در زرده بیشتر از سرم است. آنالیز داده های حاصل از تعیین تیتر پادتن - سرم و زرده تخم مرغ - در دو گروه آزمایشی وجود اختلاف معنی دار بین دو گروه را نشان داد.
نمودار -1 نمودار عیار پادتن بر علیه ویروس آنفلوانزا در سرم و زرده تخم مرغ - گروه تیمار -
جدول -1 مقایسه تیتر آنتی بادی در سرم و زرده گروه های آزمایشی به دست آمده از تست ممانعت از هماگلوتیناسیون
تیتر پادتن به کمک تست ELISA در سه مرحله تعیین شد. نتایج در جدول 2 دیده می شود. همانطور که دراین جدول مشاهده می شود از 8 پرنده مورد آزمایش در گروه تیمار 3 پرنده از نظر وجود پادتن در سرم منفی بودند، در حالیکه در 22 پرنده گروه شاهد تیتر پادتن ضد آنفلوانزا در 21 پرنده مثبت و تنها 1 پرنده از نظر وجود پادتن در سرم منفی بود. آنالیز نتایج حاصل به کمک آزمون ناپارامتری فیشر وجود اختلاف معنی دار آماری را بین دو گروه را تایید کرد - . - P<0.05
جدول -2 مقایسه پرندگان در دو گروه آزمایشی از نظر ابتلا به آنفلوانزا بدست آمده از تستELISA
مقایسه دو گروه از نظر دفع ویروس به کمک آزمون فیشر وجود اختلاف معنی دار در دو گروه را نشان داد - . - P<0.05 در این بررسی در گروه تیمار 7 پرنده از 8 پرنده مورد بررسی هیچگونه دفع ویروس را نشان ندادند، در حالیکه در گروه شاهد 7 پرنده از 8 پرنده مورد آزمایش دفع ویروس را نشان دادند. نتایج در جدول 3 دیده می شود.
جدول-3 مقایسه پرندگان در دو گروه آزمایشی از نظر دفع و جدا سازی ویروس از کلوآک به کمک تستHA
در بازرسی لاشه ها در بین دو گروه آزمایشی، اختلافاتی جزئی در شکل ظاهری پیش معده و میزان خونریزی در روده ها را درتعداد کمی از پرندگان دو گروه نشان داد.
