بخشی از مقاله
چکیده: غشاي پلاسمایی سر اسپرم محل اصلی برهمکنش با اووسیت است و پروتئینهاي عملکردي مهمی دارد. اهمیت و نقش قطعی پروتئینهاي سطحی اسپرم با استفاده از ردههاي موشهاي مهندسی شده که فاقد پروتئینهاي طبیعی اسپرم هستند، فراهم شده است. در بسیاري از موارد فقدان این پروتئینها منجر به کاهش یا از دست رفتن کامل باروري میشود، زیرا باعث نقص در برهمکنش اسپرم- اووسیت میشوند.
مطالعه بیولوژي مولکولی اسپرم تا حد زیادي به منظور پایهگذاري مدلهایی براي ناباروري جنس نر صورت میگیرد. به طور معمول براي شناسایی زیر واحدهاي پروتئینی از دو رویکرد مکمل هم استفاده شده است: - 1 - شناسایی محتواي کل اسپرم از طریق تولید ایمنوگلوبولینهاي ضداسپرمی و - 2 - شناخت ژنهاي اسپرمی از طریق مشخص نمودن موتاسیونهاي ژنی و یا ناك اوت کردن ژن که مورفولوژي و عملکرد اسپرم را تغییر میدهد. آنتیباديهاي ضداسپرمی - ASA - به عنوان عامل اصلی ناباروري ایمنولوژیکی شناخته میشوند و به عنوان هدفی براي غیرفعالسازي اسپرمها نیز کاربرد دارند.
اگر چه اهمیت همه جانبهي چنین اختلالی همچنان مورد بحث است، اعتقاد بر این است که ASA ها که به پروتئینهاي غشایی اسپرم متصل میشوند، توانایی تاثیر بر عملکردهاي اسپرم را دارند. از آنجا که آنتیباديها در اسپرم زنده قادر به نفوذ به غشاي سلولی خارجی نیستند، بنابراین آنالیز آنتیژنی باید محدود به آنتیژن هاي غشاي خارجی اسپرم باشد. استثناء آن آنتیژنهاي آکروزومی است که طی واکنش آکروزومی به سطح منتقل میشوند. بنابراین هدف، شناخت آنتیژنهاي سطحی اسپرم جهت تولید آنتیباديهاي ضد اسپرمی است که باعث ناباروري جنس نر و کنترل جمعیت میشود.
مقدمه:
اصول پایهاي مستحکمی براي توسعه واکسنهاي مبتنی بر اسپرم وجود دارد. سلول اسپرم هم در جنس ماده و هم در جنس نر فعال کننده و تحریک کنندهي سیستم ایمنی است. در گونههاي متعددي از حیوانات و انسان، ایمنیزایی با اسپرم/ بیضه آنتیبادي ضداسپرمی تولید کرده است که منجر به ناباروري شده است. همین یافته اساس روشی نوین در تولید واکسنهاي ضدباروري از نوع اسپرمی در انسان است - . - 1
نشان داده شده است که آنتیباديهاي ضداسپرمی دلیل اصلی ناباروري هستند، چرا که حذف ASA باعث باروري مجدد زوج می شود. این یافتهها شاهد بر این است که اسپرم هم در زنان و هم در مردان باعث تولید پاسخ ایمنی میشود که ممکن است منجر به ناباروري شود. باید به خاطر داشت که استفاده از تمامی اسپرم جهت تحریک سیستم ایمنی ممکن است منجر به اثرات سوء ایمنوپاتولوژیکی در بافتها و اعضاي دیگر شود - - 1 محققین ناباروري ایمنولوژیکی را نتیجه عوامل متعددي از جمله عدم تحرك اسپرم، الحاق اسپرمها، میان کنش اسپرم - تخمک و یا جلوگیري از رشد و لانه گزینی جنین میدانند - - 2
سابقه علمی موضوع: جان هر1 و همکارانش سالها در خصوصیات ایمنولوژیکی اپی توپهاي سطحی اسپرم کار کردند تا براي توسعهي واکسنهاي ضدباروري آنتیبادي ضداسپرم تولید کنند. بعضی از پروتئینها کاندید تفاوت بین توانایی تولید اسپرم طبیعی و معیوب اند - . - 2 پولتون - 1996 - 2 آنتیژن موثر در ASA را در مردان وازکتوم و نابارور شناسایی کرد که در اسپرم اپیدیدیمی موجود بودند اما در بیضه حضور نداشتند. این پروتئینها در مسیر انتقال اسپرم در اپیدیدیم توسط مایع ترشح شده بر سطح اسپرم مینشینند. براي نمونه پروتئین - zynexin - Hed2 که از ناحیه دمی اپیدیدیم جدا میشود و آنتیبادي آن از تحرك و الحاق اسپرم به اووسیت جلوگیري میکند را میتوان نام برد - . - 3 اکثر مدلهاي ناباروري در موش شامل جهشهایی است که بر ظرفیت پذیري و تحرك اسپرم تاثیر میگذارند . - 4 -
اهمیت و ضرورت مساله: اهمیت این رساله استفاده از پروتئین سطح اسپرم جهت کاربرد در حیوانات خانگی بخصوص سگها است. ازآنجا که کنترل جمعیت حیوانات درسطح شهر از اهمیت بالایی برخوردار است، هدف یافتن راه حلی مناسب براي رفع این معضل است. ضمن آنکه مشکلات مربوط به اخته کردن حیوانات و مسائل اخلاقی مرتبط نیز مرتفع می گردد.
مواد و روش ها: در این پژوهش کیتهاي استخراج RNA و سنتز cDNA از شرکت اینترون، آنزیمTaq polymerase و dNTP از شرکت سیناژن، کیت تخلیص محصول PCR از ژل آگارز از شرکت Roche و Xgal و IPTG از شرکت vivantis تهیه شد.
