بخشی از مقاله
چکیده
با افزایش سویههای مقاوم به دارو در میان انواع میکروارگانیسمها، یافتن ترکیبات ضدمیکروبی و ضدقارچی از مواد طبیعی که اثرات کمتری را دارد، مورد توجه قرارگرفته است. فیسالیس با نام علمی - Physalis Peruviana - متعلق به خانواده سولاناسه - Solanaceae - میباشد. گیاهی دارویی، سرشار از آنتی اکسیدانها که میتواند رادیکال های آزاد را خنثی کند. فیسالیس به دلیل داشتن ترکیبات فعال بیولوژیکی از جمله آنتیاکسیدانهای پلیفنول، آلکالوئید، فلاونوئید، کارتنوئید، فیتواسترول، فیزالین، ویتامین و مواد معدنی خطر ابتلا به بیماریهای خاص را کاهش میدهد. ترکیبات فنولی به عنوان آنتی اکسیدانها از بیماریهای قلبیعروقی و برخی سرطانها حفاظت میکند.
ریشههای مویین یک منبع دائمی برای تولید متابولیتهای ثانویه میباشندکه مزایای زیادی از قبیل قابلیت رشد در شرایط آزمایشگاهی و بدون نیاز به هورمون، نگهداری آسان، ثبات بالا از نظر ژنتیکی و بیوسنتزی را دارا میباشند. اگروباکتریوم رایزوژنز بهعنوان یک ابزار بیوتکنولوژی در انواع گونههای گیاهی مورد استفاده منجر به کشف رویکرد بیولوژیکی جدیدی میگردد. مطالعه حاضر با هدف القای ریشههای مویین در ریز نمونههای برگ و ساقه با استفاده از سه سویه اگروباکتریوم رایزوژنز به نامهای ATCC15834،A4 ،LBA 9402 و اثر استوسیرینگون بر ریشه زایی در محیط کشت 1/2MS انجام شد. و تایید تراریختی ریشهها با استفاده از آزمون PCR انجام گرفت.
-1 مقدمه
فیسالیس متعلق به خانواده سولاناسه ارتفاع این گیاه 1 تا 1.5 متر و دارای برگ هایی ساده، به شکل قلب که سرشار از ویتامینهای - - A,C، آلکالوئیدها، فلاونوئیدها، کاروتنوئیدها و دیگر مواد از ارزش غذایی بالایی بر خوردار است .
عصاره برگ فعالیت ضدقارچ، آنتیاکسیدان، ضدالتهاب، ضدتومور، و مواد دافعحشرات، که ناشی از ترکیبات فعال زیستی فنل، whitanolidesو ethanolics میباشد 4]،3،withanolides.[2 لاکتون استروئیدی به طور عمده توسط گیاهان Solanaceous تولید میشوند اجزای آن دارای خواص ضد میکروبی، ضد تومور، ضد التهاب، محافظت کبد، ایمنی و فعالیت ضد انگلی میباشد .
آگروباگتریوم رایزوژنز یک باکتری گرم منفی خاکزی که منجر به تولید ریشه مویین در بیش از 450 گونهی گیاهی در شرایط بدون هورمون شده است. بزرگترین مزیت کشت ریشه های مویین توان بالایی در تولید متابولیت های ثانویه دارند .[ 6] عوامل متعددی در القای ریشه های مویین در گیاه نقش دارد، که میتوان به سویه باکتری و مدت زمان تلقیح7]،[8 نوع و سن ریزنمونه اشاره نمود .[9] در تحقیق حاضر توانایی سویههای مختلف اگروباکتریوم رایزوژنز در القای ریشه مویین در فیسالیس مورد بررسی قرار گرفته است.
-2 مواد و روشها
ریزنمونههای تهیه شده از گیاهچههای استریل با باکتری اگروباکتریوم رایزوژنز استرینهایATCC15834،A4 و LBA9402 به مدت 15 دقیقه در محیط کشت 1/2MS تلقیح شده و سپس روی محیط کشت همکشتی به مدت 48 ساعت قرار داده شدند.
برای حذف باکتری از واکشتهای مکرر در محیط 1/2MS دارای آنتی بیوتیک سفوتاکسیم استفاده شد. پس از ظاهر شدن ریشههای مویین، تعداد آنها روزانه شمارش شد. مدت زمان ظاهر شدن ریشهها در نمونه های تلقیح شده با هر استرین یادداشت شد. از هر تیمار سه تکرار و در هر تکرار حداقل 20 ریز نمونه مورد بررسی قرار گرفت. نتایج به دست آمده با استفاده از نرم افزاز SAS از نظر آماری مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. تائید تراریختی ریشه های ظاهر شده با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز و پرایمرهای اختصاصی rolB انجام شد.
-3 نتایج و بحث
با اینکه همهی استرینهای باکتری مورد مطالعه قادر به القای ریشه مویین در ریز نمونه های ساقه و برگ گیاه فیسالیس بودند، اما تفاوت معنی داری میان آنها مشاهده شد. اولین ریشههای مویین پس از گذشت 5 روز در محل زخم در نمونههای آلوده شده با سویه A4 برگ ظاهر شدند. بیشترین تعداد ریشههای مویین در ریز نمونههای تلقیح شده با سویه A4، و کمترین آن در سویهLBA9402 بود.
نتایج این آزمایش نشان داد که انتقال T-DNA از اگرو باکتریوم به ژنوم گیاهی و به دنبال آن ظهور ریشه های مویین به نوع سویه مورد استفاده بستگی دارد. در تحقیقات دیگر نیز تاثیر نوع سویه بر قابلیت القای ریشه های مویین در گونه های گیاهی مورد بررسی قرار گرفته است.
در آزمایشی طی مقایسه توانایی اثر چهار نوع سویه باکتریایی AR15834، A4، K599 و MSU440 بر القاء ریشه مویین در گیاه سرخارگل، AR15834 به عنوان بهترین سویه معرفی گردید .[10] در مطالعه دیگری ریزنمونههای گیاه درمنه خزری با سویههای مختلف آگروباکتریوم 8196 ، LBA9402، 2626 ، A4،1855 مشخص شد که تنها سویه 9402LBA می تواند در 20 درصد از ریزنمونه ها، ریشه مویین را القا نماید .[11] انتقال T - DNA از اگروباکتریوم به ژنوم گیاهی به عواملی از قبیل سویه باکتری[12] نوع ریزنمونه گیاهی14]،[13 و دوره همکشتی بستگی دارد.
نمودار: اثر سویه های مختلف بر القا ریشه مویین گیاه فیسالیس
